玻璃化溶液EG5.5对小鼠未成熟卵发育能力的影响

目的研究玻璃化溶液EG5·5对未成熟卵母细胞成熟、受精和发育能力的影响。方法小鼠成熟卵母细胞经玻璃化溶液EG5·5暴露处理但不予以冷冻保存,然后行体外成熟、体外受精和胚胎培养;新鲜的未成熟卵直接行体外成熟和受精作为对照组,比较两组卵母细胞的成熟率、受精、卵裂率和囊胚形成率。结果EG5·5暴露组卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率与对照组均无显著差异。结论EG5·5不影响未成熟卵的成熟、受精和进一步发育能力。

玻璃化溶液一步冷冻家兔胚胎试验

随着哺乳动物胚胎冷冻技术的不断改进和完善,要求冷冻方法愈来愈简单化,以便于生产应用和推广。Rall 等(1985)提出了一种玻璃化溶液作防冻液,该溶液在极低温度时,变得粘稠,无冰晶形成的玻璃样固体。这个过程称玻璃化,该溶液就叫玻璃化溶液。该溶液要求防冻剂浓度高,冷冻至解冻速率快,并使胚胎或器官内外物质同时玻璃化,而达到保存它们的目的。Rall 用 DMSO(二甲亚酚)和聚合物配制成一种玻璃化溶液。用该溶液冷冻保存了531枚小鼠胚胎。解冻后体外培养发育率为87.5％。Tomohiro Kono

角膜内皮细胞玻璃化冷冻保护剂的实验研究

对角膜内皮细胞的玻璃化冷冻保护剂进行了研究,进而获得一种玻璃化溶液。首先筛选渗透性保护剂;在此基础上,进行糖类非渗透性保护剂的筛选。渗透性保护剂的筛选范围包括二甲基亚砜、乙二醇、1,2-丙二醇、2,3-丁二醇、乙酰胺和乙二醇单甲醚。糖类非渗透性保护剂包括木糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖。所采用的细胞活性的评价方法包括台盼兰拒染法和CCK-8试剂盒。研究结果表明:在众多的渗透性保护剂中,乙二醇的保护效果最好;糖类保护剂中,葡萄糖的保护效果较好。获得的玻璃化溶液的组成是:载体溶液-乙二醇-葡萄糖,其中乙二醇和葡萄糖的浓度分别为52%(w/w)和8%(w/w)。经此玻璃化溶液冷冻保存后的角膜内皮细胞的活率高达(85.5±0.7)%。

角膜内皮体外模型玻璃化法保存研究

以牛角膜内皮细胞在培养至融合时的单层细胞作为角膜内皮的体外模型,采用两种玻璃化溶液,考察玻璃化过程对细胞活性的影响.首先以光学显微镜和扫描电镜考察了体外模型的细胞形态和胞间连接情况,发现培养的角膜内皮细胞融合后无论是细胞形态和胞间连接都与天然的角膜内皮相近.然后用低温显微镜考察了两种玻璃化溶液在升降温过程的结冰情况,发现两玻璃化溶液在100℃/min的降温和升温速率下都能玻璃化且反玻璃化较弱.设计了一套保护剂的导入和洗脱方案,使得内皮细胞的体积变化维持在-50%～40%.最后以CCK-8试剂盒考察了玻璃化溶液的毒性和细胞经冷冻后的活性,发现VS^2的毒性比VS^1强;经VS^1和VS^2冷冻后的细胞活率分别为61.3%和51.7%,这说明VS^1的保存效果比VS^2好.

EDS-40玻璃化液冻存小鼠4细胞胚胎的研究

目的研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠4细胞胚胎的效果。方法①EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试。②随机将4细胞小鼠胚胎,在25℃室温下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中。对照组置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻。各组均冻存3个月后,在25℃的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率。结果两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EFS-40、EDS-40及对照组冷冻复温后的存活率分别87.8%、93.47%、80.77%;EFS-40、EDS-40及对照组冻胚的卵裂率分别:79.83%、86.53%、69.23%。结论 EDS-40玻璃化液冻贮小鼠4细胞胚胎的效果明显优于EFS-40,是一种理想的玻璃化液。

EDS-40玻璃化液冻存小鼠囊胚的实验研究

目的研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠囊胚的效果。方法(1)EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试。(2)随机将小鼠囊胚,在25°C室温下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中。对照组置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻。(3)各组均冻存3个月,在25°C的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率。结果两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EFS-40、EDS-40及对照组冷冻复温后的存活率分别为:82.14%、86.78%、69.6%;EFS-40、EDS-40及对照组冻胚的卵裂率分别为:66.96%、80.99%、54.4%。结论EDS-40较EFS-40玻璃化溶液冻存小鼠囊胚效果更好。

两种玻璃化液冻存小鼠2细胞胚胎效果分析

目的研究EDS-40及EFS-40玻璃化液对冻贮小鼠2细胞胚胎的效果。方法(1)EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试。(2)随机将2细胞小鼠胚胎,在25°C室温下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中。(3)各组均冻存3个月,在25°C的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率。结果两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EFS-40、EDS-40组冷冻复温后的存活率分别为77.98%、84.31%;EFS-40、EDS-40组冻胚的卵裂率分别:66.98%、78.43%。结论EDS-40玻璃化液冻贮小鼠2细胞胚胎可以达到与EFS-40相似的效果。

浅析猪胚胎玻璃化保存

随着生物技术发展,猪胚胎保存的重要性越来越大。但由于猪胚胎对低温特别敏感,因而其研究进展受到了极大限制。如何提高猪胚胎保存效率成为急待解决的重大问题。作者通过对国内外胚胎玻璃化保存研究进展进行分析,就胚胎的高脂含量以及保存时胚胎细胞骨架受损做出分析提出见解。

谈哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的过去，现在与将来

谈哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的过去，现在与将来朱士恩（中国农业大学动物科技学院，北京１０００９４）１９７２年Ｗｈｉｔｉｎｇｈａｍ等人利用鼠的胚胎，首次报道了慢速冷冻法。由于其操作过程复杂，１９７７年Ｗｉｌａｄｓｅｎ对其进行了改良，发明了快速冷冻法，但...

两种玻璃化液冻存小鼠早期囊胚的效果分析

目的研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠早期囊胚的效果。方法①EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试。②随机将小鼠早期囊胚,先10%EG中预处理2min后分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液管并迅速投入液氮中。③各组均冻存3个月,复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率,囊胚培养12h后行移植,观察妊娠率及产仔率。结果两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EDS-40及EFS-40冷冻复温后的存活率分别为:75.4%、64.2%,差异有统计学意义(P<0.05);EDS-40及EFS-40组冻胚移植后的妊娠率及产仔率分别为:53.33%、23.08%,45.45%,18.18%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EDS-40较EFS-40玻璃化溶液冻存小鼠早期囊胚效果更好。

EDS-40玻璃化液冻贮人2-8细胞胚胎效果的研究

目的：研究EDS-40玻璃化液冻贮人2—8细胞胚胎的效果。方法：将EDS-40与EFS-40玻璃化液对照进行研究，随机选用人2—8细胞胚胎．分别加入EDS-40及EFS-40玻璃化液处理后装管并迅速投入液氮中冻贮，均冻贮2～3个月后解冻复苏，观察胚胎存活率。结果：EDS-40玻璃化液冻贮人胚胎的存活率高于EFS-40玻璃化液（51．6％vs46．6％），但无明显统计学差异（p〉0．05）。结论：EDS-40液是一种较好的新玻璃化液，其冻贮人胚胎后胚胎的复苏存活率高于经典的EFS-40液。

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻技术进展

1972年Whittingham等首先发明了胚胎的慢速冷冻保存法,这项技术一直被广泛应用。直到1985年Rall & Fahy又发明了胚胎的玻璃化冷冻保存技术,该技术的开发,简化了操作程序,大大缩短了操作时间,逐步代替了传统的慢速冷冻法。1986年Scheffen等使用丙三醇和丙二醇各为25％,配制成的GP25玻璃化溶液,虽然化学毒性有所降低,但冷冻后胚胎,特别是囊胚的发育率仍不稳定。为此,Kasai等(1990)利用化学毒性较低的乙二醇为主体抗冻保护剂。

EDS-40玻璃化冻存小鼠卵母细胞的研究

目的设计研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠卵母细胞的效果。方法①按随机分组原则,分为实验组和对照组,实验组(a)采用自行设计的EDS-40玻璃化液进行玻璃化冷冻(其配方为:40%乙二醇+18%葡聚糖),对照组(b)采用国际上已证实效果较好的EFS-40玻璃化溶液进行玻璃化冷冻,对照组(c)采用以PROH为基础的程序冷冻液进行程序冷冻。首先对EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,行玻璃化测试;再随机选用小鼠卵母细胞,在室温25℃下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中。对照组(c)置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻。各组均冻存2mo～3mo后,在25℃的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察卵母细胞的成活率。将成活的卵母细胞行体外受精,观察其受精率。结果①两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;②EDS-40、EFS-40及对照组冷冻复温后的存活率依次为:79.34%、67.94%、56.34%;③EDS-40、EFS-40及对照组冻卵的受精率分别:79.17%、66.29%、51.25%。结论①EDS-40可以用来玻璃化冷冻小鼠卵母细胞;②EDS-40较EFS-40玻璃化溶液冻存小鼠卵母细胞效果更好;③玻璃化技术比传统冷冻法效果更好。

用玻璃化超低温保存牛胚胎

近几年报道了将哺乳动物胚胎直接投入液氮的快速冷冻法以及在各种条件下所做的研究。其中之一是采用2～4M甘油与蔗糖的混合液,用于小鼠胚胎(Takeda等,1984)和牛胚胎(Chupin,1986)。此外,还有使用高浓度防冻剂、使细胞内外不出现冰晶化的所谓玻璃化保存法,此法用于小鼠胚胎(Rall和Fahy,1985)和牛胚胎(Massip等,1986),并得到了后代。这些快速冷冻法可以大大缩短冷冻所需时间,同时也无需价格昂贵的自动程控冷却器等仪器设备,

柑橘原生质体的超低温保存

对柑橘原生质体的超低温保存进行研究 ,发现玻璃化溶液加入小牛血清蛋白对原生质体的超低温保存有利 ,不同品种的胚性愈伤组织原生质体超低温保存后的成活率不同 ;不同倍性的伏令夏橙原生质体超低温保存后的成活率也不同 ,其中 2倍体成活率最高 ,其次为 4倍体 ,6倍体成活率最低 .超低温保存后的原生质体在BH3培养基中能够恢复分裂 。

低温医学的现状与展望 第四届中日低温医学研讨会论文综述

第四届中日低温医学研讨会,暨第20届日本冷冻外科与第18届日本低温医学研讨会于1991年11月20——23日在日本福岗举行,中日双方及美国、加拿人、德国、阿根廷等国家的低温医学、生物学专家、学者100余人参加了这次会议。与会代表就细胞、组织、器官的冷冻保存及其相关的生物学、免疫学机制,以及冷冻外科等领域的研究成果和实践经验进行了广泛交流和深入的探讨。本次会议集中反映了中日两国。

超低温冷冻对小鼠桑椹胚多能性因子Oct-4表达的影响

本实验旨在探讨昆明白小鼠桑椹胚超低温冷冻后Oct-4表达的变化与胚胎发育潜力的关系。胚胎采用OPS法冷冻，即胚胎于IO％EG＋10％DMSO溶液中预处理30s，然后再移入玻璃化溶液（EDFS30）中处理25S，以OPS为承载器投入液氮中。毒性组胚胎未投入液氮，其他过程与冷冻组相同，新鲜胚胎为对照组。