破骨细胞TRPV5通道对体外降解生物珊瑚人工骨的影响

背景:生物珊瑚人工骨是一种修复长段骨缺损的良好替代材料,但其在体内的降解吸收速率与新生骨的生长速率不够匹配,因而其在临床上的应用受到限制。目的:探讨破骨细胞TRPV5通道对生物珊瑚人工骨降解的影响。方法:取生长状态良好的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7,接种于生物珊瑚人工骨片上,加入破骨细胞诱导分化培养液,观察有破骨细胞出现后,分别加入含0,50,500,5000μmol/L钌红(TRPV5通道抑制剂)的破骨细胞诱导分化培养液。培养一定时间后,激光共聚焦显微镜下观察TRPV5通道蛋白表达,扫描电镜下观察生物珊瑚人工骨片上的吸收陷窝,应用Western Blot检测细胞TRPV5通道蛋白表达。结果与结论:①激光共聚焦显微镜:TRPV5表达于破骨细胞的胞浆和胞膜,随着钌红浓度的增加,破骨细胞上TRPV5表达减少;②扫描电镜:0 nmol/L钌红组骨片上可见大片连续的骨吸收陷窝,其他浓度钌红组骨片上的骨吸收陷窝减少,并散在分布,并且随着钌红浓度的升高,骨陷窝面积逐渐减少;③Western Blot检测:与0 nmol/L钌红组比较,其他浓度钌红组TRPV5通道蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01);④结果表明:破骨细胞在生物珊瑚人工骨片上生长良好,TRPV5可作为调控生物珊瑚人工骨降解速率的靶点。

珊瑚人工骨的生物学评价

目的 :评价海南珊瑚人工骨的生物相容性。方法 :参考上海市非直接接触血液的医用生物材料生物性能测试标准评价珊瑚人工骨的组织相容性进行了一系列体内及体外试验 ,包括 :细胞毒性试验 ,溶血试验 ,急性全身毒性试验 ,热原试验 ,皮下种植 ,肌肉种植及骨内种植试验。结果 :各实验结果均符合种植材料要求。结论 :珊瑚人工骨具有良好的生物相容性 ,安全无毒 ,无溶血性 ,对组织刺激小 ,不含热原。

重组骨形成蛋白-2与珊瑚人工骨复合物应用于拔牙窝修复的动物实验研究

目的 :探讨重组骨形成蛋白 - 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein ,rhBMP - 2 ) /珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )与珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :12只成年狗作为实验动物 ,拔除两侧上颌第 2及第 3切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚骨作为对照。并于植骨后 4、8、12周取材 ,采用组织学观察及计算机图像分析方法 ,观察比较两种植入材料在拔牙窝内的骨修复能力及修复效果。结果 :复合骨具有较强的骨修复作用 ,植入牙槽窝后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断形成 ,12周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示复合骨组新生骨形成的比值明显高于珊瑚骨组 ,两组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5)。结论 :复合骨在拔牙窝中的骨修复能力和修复效果明显优于珊瑚骨。

生物珊瑚人工骨支架材料生物相容性检测

目的评价生物珊瑚人工骨(BCAB)材料作为骨组织工程支架材料与小鼠胚胎干细胞(MESCs)构建组织工程骨的有效性及材料生物相容性。方法设MESCs与BCAB支架材料混合黏附培养为实验组,单纯MESCs培养为对照组,分别于第2、4、6、8天进行MTT法检测细胞增殖活性,特异性胚胎抗原-1检测细胞对材料的黏附性。于第8日对接种细胞材料片行成骨诱导,诱导培养10 d后行茜素红染色及电镜扫描检测成骨诱导及体外组织工程骨构建情况。取12只大鼠,脊柱左侧皮下植入空白BCAB支架片状材料,右侧植入黏附细胞BCAB片状材料,随机分4、8、12周3组行影像学检查,并取双侧标本行病理切片观察局部炎症反应,四环素标记下荧光显微镜观察成骨情况。第12周组取心、肝、肾病理切片及评估心、肝、肾毒性反应。结果 MTT法检测细胞增殖活性结果显示,在培养2 d和4 d时实验组与对照组间MTT值差异无统计学意义(P>0.05),在6 d及8 d时实验组MTT值明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。特异性胚胎抗原-1检测证实MESCs对BCAB支架材料具有良好的黏附性,在其三维微孔隙内能较快增殖。茜素红染色及电镜扫描检测证实黏附细胞材料成骨诱导有效,体外组织工程骨构建成功。材料植入局部组织炎症反应轻,空白支架材料于第8周开始降解,12周达初步降解,无异位成骨;黏附细胞支架材料则有明显异位成骨现象,且较对侧空白支架材料降解时效延长。第12周组实验动物心、肝、肾标本病理切片未见异常损害。结论 BCAB支架材料具有良好的生物相容性,其降解周期与新骨重建周期大致相当,是一种良好的骨组织工程支架材料。

一期前路手术内固定珊瑚人工骨植入治疗脊柱结核

目的探讨脊柱结核手术治疗中一期前路病灶清除椎体间植珊瑚羟基磷灰石人工骨融合同时前路内固定手术治疗的安全性、有效性。方法总结18例脊柱结核患者,采用一期前路病灶清除,椎体间植珊瑚羟基磷灰石人工骨融合,前路内固定器内固定治疗。结果平均随访25个月,18例患者血沉恢复正常时间平均为术后2个月,无局部结核复发、窦道形成,植骨全部骨性融合,融合时间平均为术后5.8个月,后凸畸形矫正平均较术前纠正23.6°。神经功能全部得到显著改善。结论脊柱结核内固定可有效纠正脊柱后凸畸形,早期重建脊柱稳定性,有助于植骨融合和减少结核复发,在结核病灶彻底清除的同时,植珊瑚羟基磷灰石人工骨是安全有效的。植骨替代材料,珊瑚羟基磷灰石人工骨的应用,避免了取自体骨带来的并发症。

珊瑚人工骨的细胞生物学评价

本实验采用体外细胞培养法评价珊瑚人工骨的细胞相容性。Ｌ９２９小鼠成纤维细胞培养，按细胞增殖度法和形态观察法，取５种浓度珊瑚骨浸提液进行检测，分别于２、４、８、１０天用四唑盐比色法《ＭＴＴ法》计数，计算细胞相对增殖度，用六级毒性分类法评级，分别于２、４天取材扫描电镜观察。结果，培养期细胞大量增殖，形态良好，贴壁生长，毒性评级为０～１级，结果显示珊瑚人工骨具有良好的细胞相容性。

载药珊瑚人工骨修复骨缺损及预防感染的实验研究

目的 :探讨载药珊瑚人工骨修复骨缺损及预防感染的可能性。方法 :将珊瑚与克林霉素复合 ,制成载药珊瑚人工骨 ;将其置于接种有金葡菌的培养基中检测其体外缓释特性及抗菌活性 ;将其植入金葡菌污染的兔颅骨缺损区 ,通过细菌培养和组织病理检查评价其骨缺损修复能力及抗感染能力。结果 :载药珊瑚人工骨在体外持续释放高浓度抗菌素 ;植入金葡菌污染的骨缺损后可有效预防骨感染 ,骨感染的发生率明显低于单纯珊瑚人工骨植入组。结论

重组人骨形成蛋白-2-珊瑚人工骨复合物在拔牙窝牙槽骨修复中的作用

目的 :探讨重组人骨形成蛋白 - 2与珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :拔除 12只成年狗两侧上颌第二及第三切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )作为对照。并于植入后 4、8、12周取材 ,采用组织学观察、图像分析和 [99Tcm]-MDP核素骨显像等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果 :复合骨植入牙槽骨后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断生成 ,12周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示不同时间复合骨组新骨形成的比值显著高于珊瑚骨组(P <0 0 5 ) ;4和 8周复合骨组核素浓聚程度高于珊瑚骨组 ,12周两组核素浓聚程度差异不明显。结论

椎弓根系统复位珊瑚人工骨椎间融合治疗腰椎滑脱

[目的]观察椎弓根系统复位固定和珊瑚人工骨椎间融合的方法治疗腰椎滑脱的临床疗效。[方法]22例腰椎滑脱(Ⅰ度11例,Ⅱ度9例,Ⅲ度2例)经保守治疗无效的病人,平均年龄48.5岁,均行手术治疗,用Steffee钢板和RFⅡ型椎弓根系统复位固定,珊瑚人工骨椎间融合加外侧后方植骨融合。[结果]随访12～54个月(平均23.6个月),优15例,良5例,中2例,优良率为90%,所有患者滑脱椎体得到融合。[结论]采用椎弓根复位固定系统和珊瑚人工骨椎间融合的方法治疗腰椎滑脱,临床疗效满意。

可吸收性医用珊瑚人工骨的致突变性研究

目的评价珊瑚人工骨的遗传毒性。方法采用Ames试验;细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓细胞微核试验。结果不同浓度的浸提液加与不加S9mix条件下Ames试验;细胞染色体畸变试验以及微核试验与阴性对照组比较无显著差异,结果为阴性。结论在本试验系统条件下,可吸收性珊瑚人工骨无致突变作用。

血管内皮生长因子对珊瑚人工骨材料成骨作用的影响

背景:人工骨材料在大块骨缺损中常常无法发挥成骨作用,研究表明如果存在血供不足,骨缺损难以愈合。目的:了解血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)质粒转染细胞对珊瑚人工骨材料成骨作用的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-08/2007-06在德国海德堡大学附属骨科医院实验室完成。材料:应用6～9月龄雌性新西兰白兔24只制备桡骨骨缺损模型,并随机分为4组;自兔的骨髓分离培养骨髓基质干细胞,传代培养扩增;通过EndoFree Plasmid Giga试剂盒扩增pVEGF165和pCR3.1的质粒。方法:将pVEGF165或pCR3.1质粒转染骨髓基质干细胞,将含有VEGF基因的质粒和VEGF基因重组的骨髓基质干细胞分别载入珊瑚人工骨材料,然后植入2组模型兔桡骨干中段15mm的骨缺损内,另外2组植入载空白质粒或空白质粒转染的骨髓基质干细胞的珊瑚人工骨材料。主要观察指标:实验动物桡骨骨缺损内人工骨材料吸收速度,血管数目以及新形成的骨量。结果:VEGF重组的骨髓基质干细胞分泌足量VEGF超过1周;血管计数发现VEGF质粒和骨髓基质干细胞能促进血管生成,但体外转染VEGF的细胞疗效更显著;VEGF质粒或其转染的骨髓基质干细胞对珊瑚人工骨材料的吸收具有促进作用。结论:VEGF基因重组的细胞能够持续表达高于正常水平的VEGF,并且能够在一定程度上促进人工骨材料的吸收。

珊瑚人工骨复合人胚骨防治干槽症的疗效观察

目的 通过临床观察珊瑚人工骨复合人胚骨植入下颌阻生牙拔除后牙槽窝的愈合情况 ,为减少和预防干槽症的发生和保持牙槽高度提供有效措施。方法 将下颌阻生牙患者分为实验组 (A)、对照组 (B)两组 ,两组 15 0人 ,30 0颗牙。A组拔牙后拔牙窝植入珊瑚人工骨复合人胚骨 ,B组拔牙窝不放置任何药物。结果 A组无 1例干槽症发生 ,B组有 12例干槽症发生 ,发生率为 8%。两组间经 χ2 检验差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 拔除下颌阻生牙后牙槽窝内植入珊瑚人工骨复合人胚骨能较好的预防干槽症的发生 。

生物珊瑚人工骨材料体外细胞生物相容性检测

目的利用小鼠胚胎干细胞检测生物珊瑚人工骨材料的细胞生物相容性。方法小鼠胚胎干细胞与生物珊瑚骨支架材料混合体外培养为实验组,设单纯小鼠胚胎干细胞培养为对照组,分别于第2、4、6、8天进行MTT法检测细胞增殖活性,特异性胚胎抗原-1检测及电镜扫描观察。采用SPSS13.0对所得数据行t检验。结果 MTT法检测细胞增殖活性结果显示,实验组在培养2d、4d时,与对照组组间无显著性差异(P>0.05),在6d及8d时实验组MTT值明显高于对照组,且组间具有显著性差异(P<0.05)。特异性胚胎抗原-1检测及电镜扫描证实小鼠胚胎干细胞对生物珊瑚人工骨支架材料具有良好的粘附性,在其三维微孔隙内能较快增殖。结论体外小鼠胚胎干细胞检测试验证实珊瑚人工骨具有良好的细胞生物相容性,具备骨组织工程支架材料的良好特性。

珊瑚人工骨的研究进展

珊瑚人工骨来源广泛 ,易于加工制备 ,是具有良好生物相容性的骨充填材料。本文综述珊瑚人工骨的理化性能 ,生物学特性以及临床应用的研究进展。

^(99m)Tc-MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白-2与珊瑚人工骨修复牙槽骨缺损

目的 探讨应用99mTc -MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白 - 2与珊瑚人工骨在牙槽骨缺损修复中成活和成骨效果的价值。方法 拔除 1 2只成年狗两侧上颌第 2及第 3切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )作为对照。并于植入后 4 ,8,1 2周取材 ,采用组织学观察、图像分析和99mTc -MDP核素骨显像等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果 复合骨植入牙槽骨后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断生成 ,1 2周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示不同时间复合骨组新骨形成的比值显著高于珊瑚骨组 (P <0 0 5) ;4和 8周复合骨组核素浓聚程度高于珊瑚骨组 ,1 2周两组核素浓聚程度差异不明显。结论 99mTc -MDP放射性骨显像能早期判断移植骨的成活情况及成骨效果。

珊瑚人工骨表面贴附移植与钛种植体形成骨结合后的形态学观察

目的:研究珊瑚人工骨表面贴附移植后与同期植入的钛种植体的结合情况。方法:10只杂种犬被随机数字表法分为5组,每组2只。将复合重组人骨形态发生蛋白(rhBMP-2)的珊瑚块置于下颌骨表面,按标准方法植入纯钛种植体2枚,使种植体一半位于珊瑚块内,另一半位于下颌骨内,rhBMP-2珊瑚块固定。共植入材料2块,种植体4枚。同法作对侧下颌骨,植入单纯珊瑚块作为对照。术后于不同时间点取材,制作组织学切片,光学显微镜下观察,并行组织形态学测量。结果:单纯珊瑚成骨较少,未成骨区域由软组织充填,珊瑚与种植体之间可形成部分骨结合;复合材料组成骨明显多于单纯珊瑚,近下颌骨区与种植体形成更完善的骨界面,界面骨成熟。组织形态学测量,珊瑚组成骨量(2.32±0.27)mm,骨结合率23.92%;rhBMP-2珊瑚组成骨量(2.61±0.14)mm,骨结合率50.73%。结论:单纯珊瑚与rhBMP-2珊瑚表面贴附移植后二者成骨量差别不大,均可与种植体形成骨结合,但骨结合率有明显差别。

骨髓基质细胞与珊瑚人工骨和两种屏障膜生物相容性的实验研究

目的:探讨珊瑚人工骨(natural coral,NC)作为骨组织工程学载体吸附骨髓基质细胞(bone marrowstromalcells,BMSCs)的可行性,并比较两种可降解性屏障膜PLGA-NC复合膜和PLGA膜的生物相容性及用于牙周引导组织再生术的可行性。方法: 体外分离培养狗的BMSCs,检测其成骨活性;将NC和可降解性屏障膜材料分别吸附原代培养的BMSCs,观察复合物的形态,进行细胞蛋白含量测定。结果: BMSCs在NC的孔隙中生长良好,并有细胞基质的分泌;两种屏障膜与细胞均有较好的生物相容性,但PLGA-NC 复合膜较PLGA膜有更多的微孔和更好的成形性。结论: NC可作为牙周骨组织工程学中的细胞载体;PLGA-NC复合膜比单纯的PLGA膜更适合作为牙周引导组织再生的屏障膜材料。

珊瑚人工骨复合人胚骨充填颌骨缺损的临床观察

临床应用珊瑚人工骨颗粒复合冷冻脱钙人胚骨及少量抗生素充填 3 5例颌骨缺损 ,并选择 3 0例血块充填组进行比较分析。结果显示 :珊瑚人工骨复合人胚骨组的骨修复速度、抗感染性明显优于血块充填组。认为珊瑚人工骨复合人胚骨充填颌骨缺损是一种较为实用的骨充填材料。

珊瑚人工骨复合人胚骨防治干槽症150例疗效观察

干槽症(dry socket,DS)即纤维蛋白溶解性牙槽炎,是常见的拨牙术后并发症,多数发生在下颌第三磨牙拔除后,其发生率不同,国外报告下颌阻生智齿为20%左右,国内下颌阻生智齿为4%～10%[1].本文将150颗下颌第三阻生牙拨除后,在拨牙窝植入珊瑚人工骨复合人胚骨,在防治干槽症及保持牙槽骨高度、预防第二磨牙远中颈外露等方面,取得较满意的效果,现报道如下.