水解珍珠液抑制人皮肤细胞黑色素形成的作用机制研究

目的:明确水解珍珠液抑制人皮肤细胞黑色素形成的作用机制。方法:水解珍珠液培养不经过或经过UVB照射的人角质形成细胞(Hacat)48 h后,CCK8法检测细胞增殖率,生化法检测细胞ROS、MDA含量,ELISA法检测细胞PC、NT含量;水解珍珠液培养不经过或经过α-MSH刺激的人黑色素瘤细胞(A875)48 h后,CCK8法检测细胞增殖率,NaOH法检测细胞内黑色素含量,Western blot法检测细胞TYR及TRP-1蛋白的表达;水解珍珠液培养不经过任何刺激或经过α-MSH刺激或经过UVB照射的A875/Hacat混合细胞48 h后,倒置光学显微镜检测各组A875细胞中树突的形成,倒置荧光显微镜检测A875细胞中TRP-1阳性黑素体转移到Hacat细胞的情况。结果:UVB照射Hacat细胞显著抑制增殖率,而水解珍珠液对Hacat细胞没有毒性,显著降低了UVB照射下Hacat细胞的ROS、MDA、PC、NT含量(P<0.05),提高细胞增殖率(P<0.05);α-MSH刺激显著提高A875细胞的黑色素含量(P<0.05),显著降低A875细胞的增殖率(P<0.05),水解珍珠液培养不经过或经过α-MSH刺激的A875,结果都显著降低细胞TYR和TRP-1蛋白表达及黑色素含量(P<0.05),且随着水解珍珠液浓度提高依赖性降低。水解珍珠液培养不经过任何刺激或经过α-MSH刺激或经过UVB照射的A875/Hacat混合细胞中,A875细胞树突形成水平均降低,A875细胞中TRP-1阳性黑素体转移到Hacat细胞的水平均降低,且随着水解珍珠液浓度提高而依赖性降低。结论:水解珍珠液能够抑制人皮肤细胞黑色素形成,该机制与黑色素合成期间,水解珍珠液抑制TYR和TRP-1蛋白表达,降低黑色素含量有关;同时,与黑色素合成之后,水解珍珠液抑制黑素体从黑素细胞转移到角质细胞也有关。

珍珠液对体外培养人瘢痕成纤维细胞生长的抑制

背景:研究发现,珍珠液有促组织细胞再生、消除瘢痕等功效。目的:观察珍珠液对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖的影响。设计、时间及地点:分组对比观察实验,于2008-09/12在广西医科大学医学实验中心完成。材料:瘢痕组织组织标本来自广西医科大学整形外科患者。珍珠液是珍珠的水解液,含有多种氨基酸、多肽、维生素、矿物质和天然酶等,购自北海国发生物有限公司。方法:参考Veelken方法进行成纤维细胞原代及传代培养,反复传代去除非成纤维细胞成分后,建立人皮肤瘢痕细胞系。取对数生长期的人皮肤瘢痕成纤维细胞3～5代,用胰蛋白酶消化成单细胞悬液,接种于96孔塑料培养板,密度为0.5×104/孔,每孔加入100μL的细胞悬液和100μL的DMEM培养基,常规培养24h后吸弃原培养液,实验分组:珍珠液组:加入已经配置的含珍珠液质量浓度为125.00,62.50,31.30,15.60,7.80,3.90,1.95,0.98mg/L的培养基200μL;对照组:每孔只加200μL的培养基。主要观察指标:MTT法检测成纤维细胞增殖情况,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡情况。结果:珍珠液对成纤维细胞的半效抑制浓度IC50为15mg/L,除0.98mg/L质量浓度外,其余质量浓度均能有效地抑制成纤维细胞的生长,且呈剂量依赖性抑制成纤维细胞的生长,珍珠液的浓度越高,对成纤维细胞的抑制率越大。剂量IC50=15mg/L培养的成纤维细胞体积缩小、胞质少、密度变小,凋亡细胞多、呈棕黄色。对照组成纤维细胞体积大、胞质丰富、密度大。珍珠液作用后的细胞凋亡指数高于空白对照组(P<0.01)。结论:珍珠液能抑制体外培养皮肤瘢痕成纤维细胞的生长,并诱导其凋亡。

珍珠水解液对肝窦内皮细胞活力及肝窦毛细血管化的干预作用

目的探讨珍珠水解液对肝纤维化时肝窦毛细血管化病变的干预作用及机制。方法合浦珍珠水解液与肝窦内皮细胞(HSEC)和肝星状细胞(HSC-LX2)共同孵育,采用MTT比色法测定HSEC和HSC-LX2的细胞增殖抑制率,流式细胞术测定HSC-LX2的细胞周期及细胞凋亡情况,透射电镜观察HSEC的窗孔及基底膜等微结构的变化情况。结果瘦素激活后,HSC-LX2细胞活性显著增高(P=0.041),HSEC则出现细胞活性显著降低(P=0.004)、窗孔数量减少、窗孔直径下降、连续基底膜形成等肝窦毛细血管化现象。瘦素干预后给予低、中、高不同浓度珍珠水解液治疗,各浓度组均可使缩小及消失了的HSEC窗孔发生增多和扩大(低浓度组:P=0.020;中浓度组:P=0.028;高浓度组:P=0.032),使HSEC外成片的基膜变得稀薄甚至消失(低浓度组:P=0.020;中浓度组:P=0.028;高浓度组:P=0.032);使活化的HSC-LX2活力下降(低浓度组:P=0.018;中浓度组:P=0.013;高浓度组:P=0.009),并诱导其发生细胞凋亡(低浓度组:P=0.012;中浓度组:P=0.006;高浓度组:P=0.005)。随着珍珠水解液给药浓度上升,干预肝窦毛细血管化的效果有梯度增高,具有剂量依赖性(低浓度组:P=0.020;中浓度组:P=0.028;高浓度组:P=0.032)。高浓度珍珠水解液干预肝窦毛细血管化的效果强于治疗剂量的秋水仙碱(P=0.034)和丹参酚酸B(P=0.038)。结论合浦珍珠水解液可使HSEC细胞的活性增加、窗孔面积恢复、基底膜消失,使激活的HSC-LX2细胞丧失活力并发生凋亡,具有针对HSEC及HSC-LX2的显著的抗肝窦毛细血管化药理学作用。

珍珠、珍珠母、珍珠贝肉、珍珠母液的化学成分及其生物活性的研究进展

珍珠、珍珠母、珍珠贝肉、珍珠母液是由多种有机物、无机物构成,包括微量元素、氨基酸、维生素、多糖、多肽等物质,因此具有多种生物活性,如成骨活性、抗氧化活性、促进成纤维细胞迁移、改善记忆障碍、抗惊厥和镇静催眠、抗炎和抗凋亡、增强免疫力等作用。故本文针对近年来珍珠、珍珠母、珍珠贝肉、珍珠母液的化学成分、生物活性的研究进展进行综述,旨在为珍珠的进一步研究和开发利用提供依据。

复方珍珠水解液影响眼内水晶体的抗氧化防御体系的实验研究

将新鲜完整的透明兔晶体浸浴在10mlTC199液中，添加30％H2O20．2ml，FeC12mg，造成产生羟自由基的Fenton反应模型，温育在37℃，5％CO2，95％空气的日制SANYOCO2培养箱内24小时。测定被温育兔晶体抗氧化防御体系的8项指标［超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX），过氧化氨酶（CAT），抗坏血酸，还原型谷胱甘肽（GSH），维生素E，晶体水溶性蛋白以及脂质过氧化终未产物—丙二醛（MDA）］。研究复方珍珠水解液（复方自由基清除剂）与白内停滴服液对Fenton反应模型体系内温育晶体抗氧化防御机构的保护作用。结果表明复方珍珠水解液是一种天然抗氧化剂，对晶体的酶性与非酶性抗氧化防御体系具有保护作用，是一良好的防治白内障药物。

珍珠燕窝提取液的功效试验

珍珠燕窝提取液的功效试验张玫，王道生，王坚（江苏省药品检验所南京２１０００８；苏州医学院苏州２１５００７；南京航空航天部八五一一研究所南京２１００１６）关键词珍珠燕窝提取液；细胞免疫；体液免疫；脂质过氧化；超氧化物歧化酶珍珠燕窝提取液由珍珠、燕窝等组...

海水珍珠水解液体外抗氧化活性的研究

以VC为对照品,测定海水珍珠水解液对DPPH·、ABTS·、OH·和O_2^-·的清除能力。结果表明,海水珍珠水解液对DPPH·的清除能力较强,其清除率略低于VC,IC50为7. 85%,当海水珍珠水解液体积分数为16%,其清除率达95. 11%;海水珍珠水解液对OH·和O_2^-·的清除能力相对较弱,当海水珍珠水解液体积分数为20%时,对其清除率分别为23. 44%和42. 94%;海水珍珠水解液对ABTS·的清除率大于VC,其差异显著(P <0. 05),IC50为7. 41%;海水珍珠水解液对DPPH·、ABTS·、OH·和O_2^-·的清除率都随着体积分数的增大而显著增加(P <0. 05)。海水珍珠水解液具备较高的抗氧化能力,为海水珍珠资源的开发利用提供了理论依据。

传统“珍珠水解液”的工艺改进研究

用双酶法改进传统的“珍珠水解液”的生产工艺，以珍珠层粉脱钙后所得的壳角蛋白、及经脱腥后的珠母贝全脏器为原料，经打浆、双酶水鲜、过滤、脱色、灌封、杀菌后，得水解液制品。经氨基酸分析仪测定，水解液中游离氨基酸总量≥２，５００ｍｇ／１００ｍｌ；其中必需氨基酸含量≥９００ｍｇ／１００ｍｌ；牛磺酸含量≥２３０ｍｇ／１００ｍｌ。

PAN分光光度法测定全珍珠水解液中微量铜

探讨了用Cu 1 ( 2 吡啶偶氮 ) 2 萘酚分光光度法测定珍珠水解液中微量铜的最佳条件。在HCl KCl溶液介质中 ,十二烷基苯磺酸钠存在下 ,其表观摩尔吸光系数为 1 .4 2× 1 0 4L·mol-1·cm-1,Cu2 +含量在 0 1 0 0 μg/5 0ml范围服从比尔定律 ,检测限为 0 .5 μg/dm3。应用于珍珠水解液制备的工艺优化中指标控制 ,效果良好。

市售中药石膏、珍珠母煎液、残渣中化学成分的含量测定

用容量法和X射线荧光光谱分析法测定了不同重量、不同目数的石膏、珍珠母煎液及残渣中的主要化学成分和人体必需10种微量元素,发现这些元素的溶出量有一定的变化规律,可作为研究中药石膏、珍珠母复方中化学成分变化时参考.

珍珠水解液中钙离子含量的离子选择电极测定方法

用离子选择电极法分别对标准溶液中钙离子含量 ,电极检测性能及 p H值对离子选择电极的影响等进行了一系列测定和讨论 ,提出了离子选择电极测定珍珠水解液中钙离子含量的方法 .同时将离子选择电极法和原子吸收法测定样品的结果加以了比较 .该方法所用仪器易普及 ,适用于中小型企业进行产品的测试 .

珍珠水解液对皮肤增生性瘢痕及正常皮肤来源成纤维细胞bFGF、TGF-β1表达的影响

目的:观察珍珠水解液对正常皮肤及瘢痕皮肤来源成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)的影响,并探讨其对病理性瘢痕的作用。方法:原代培养、分离纯化获得人类皮肤瘢痕和正常皮肤成纤维细胞系。采用荧光实时定量RT-PCR及免疫细胞化学法分别检测成纤维细胞在珍珠水解液作用下bFGF、TGF-β1mRNA及蛋白表达变化的情况。结果:珍珠水解液可下调增生性瘢痕及正常皮肤来源的成纤维细胞TGF-β1mRNA和蛋白表达,同时上调bFGF的mRNA和蛋白的表达,且呈现浓度依赖性。结论:珍珠水解液能调节成纤维细胞bFGF、TGF-β1的分泌,其对皮肤瘢痕作用的功效及机制值得进一步研究。

珍珠养颜液对小鼠抗衰老及免疫调节的研究

目的:研究珍珠养颜液对小鼠抗衰老作用及免疫功能的影响。方法:分别以D-半乳糖制备衰老小鼠模型、环磷酰胺造成免疫低下小鼠模型,以血清SOD、肝脏及脑组织中MDA水平、小鼠的学习记忆能力、胸腺及脾脏系数和碳粒廓清指数作为观察指标评价珍珠养颜液的作用。结果:珍珠养颜液能显著提高衰老小鼠血清SOD水平、降低肝脏及脑组织的MDA水平、增加衰老小鼠的胸腺系数,同时可改善衰老小鼠的学习记忆能力。同时,其可使得免疫低下小鼠的胸腺及脾脏系数增高,并能增强小鼠碳粒廓清能力。结论:珍珠养颜液可能具有抗衰老的作用,并可改善实验动物的免疫功能。

珍珠层粉水解液预防白内障的作用机理探讨

探讨珍珠层粉水解液预防白内障的作用机理。结果表明，珍珠层粉水解液中含有１８种氨基酸，其中包括人体内所必需的８ 种氨基酸和多种微量元素；具有保护大鼠晶体内水溶性蛋白、超氧化物歧化酶（ Ｓ Ｏ Ｄ） 和还原型谷胱甘肽（ Ｇ Ｓ Ｈ） 的能力，能抑制脂质过氧化和清除活性氧自由基，这些都与珍珠层粉水解液预防白内障的作用密切相关。

珍珠明目滴眼液及珍珠液中蛋白多肽类成分的分析

目的分析不同厂家珍珠明目滴眼液及珍珠液中蛋白多肽类成分的差异,为保证原料药生产工艺的稳定性,有效地控制珍珠明目滴眼液的质量提供参考依据。方法采用UPLC-Q-TOF MS正离子模式进行分析,鉴定珍珠明目滴眼液及珍珠液中的肽类成分,Acquity UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm,1.7μm）色谱柱,乙腈-0.1%甲醇水溶液作为流动相;柱前衍生化HPLC-DAD法测定珍珠明目滴眼液中16种氨基酸。结果不同生产企业的珍珠明目滴眼液及珍珠液中多肽的相对分子质量（MW）、16种氨基酸分别占总氨基酸量的百分比差异较大。5家企业中3家的原料药珍珠液中肽的MW均小于2 000,另2个厂家珍珠液中肽的MW为500~4 746,以大于2 000的肽为主。7个厂家的珍珠明目滴眼液样品中,2个厂家样品中肽的MW以2 000~4 000为主,并含有4 000以上的肽,另5个厂家样品中不含4 000以上的肽。7个厂家的珍珠明目滴眼液中16种氨基酸质量浓度相对总氨基酸质量浓度的百分比差异较大,2个厂家采用酸/酶水解工艺的珍珠液中脯氨酸与丙氨酸质量浓度的比值〉1,5个厂家采用水直接提取工艺的二者比值小于1。结论建议修订珍珠液质量标准,明确制备工艺为水直接提取,确保滴眼液中的有效成分多肽（MW在500~5 000）,珍珠液及珍珠明目滴眼液质量标准增加检查项脯氨酸与丙氨酸质量浓度的比值及定量测定项氨基酸总量,以有效控制珍珠明目滴眼液的质量,确保其有效性。

马氏珍珠贝酶解液澄清工艺条件优化的研究

以珍珠贝蛋白酶解液为研究对象,考察不同澄清剂对酶解液浑浊体系浑浊度的影响。结果表明,带正电的壳聚糖与带负电和电中性的澄清剂相比,能较好脱除酶解液体系中的浑浊物质,经测定浑浊物质的表面电位呈电负性,表明壳聚糖通过静电吸附作用与浑浊物质结合达到澄清目的。壳聚糖的澄清效果在一定范围内与壳聚糖分子量无关,随脱乙酰度增大而增强,进一步证明静电作用为壳聚糖吸附的决定作用力。经澄清处理的酶解液分子量在10000Da以上的肽段明显减少,说明壳聚糖主要与分子量在10000Da以上的肽段作用而使酶解液澄清。酶解液经壳聚糖吸附澄清处理后,Q值为744·20cal/mol,低于1300cal/mol,无苦味。