珍珠黄杨春季扦插生根性状差异及内源激素变化

为了研究珍珠黄杨Buxus sinicavar. parvifolia扦插生根的相关机制,通过酶联免疫吸附分析(ELISA)技术对春季扦插生根过程中各品种的吲哚乙酸(IAA),脱落酸(ABA),异戊烯基核苷(iPA)和赤霉素4(GA4)质量分数作进程研究,并对其生根性状结果作统计分析。研究发现:在愈合组织产生前后及根突出表皮时,IAA、ABA和GA4质量分数的变化曲线在不同品种处理之间存在差异,3号和5号品种在ABT6处理后扦插生根能力有了提高。结果表明,易生根品种的激素质量分数在生根关键时期更利于插穗愈合组织的产生以及根原基的形成与分化。

珍珠黄杨DNA的提取方法比较及ISSR反应体系的优化

为从珍珠黄杨幼叶中提取高质量的总DNA,比较了1%CTAB、2%CTAB、4%CTAB和1.5%SDS4种DNA提取方法。结果表明:2%CTAB提取的DNAA260/A280值最好,ISSR-PCR扩增效果最佳,是有效提取珍珠黄杨基因组DNA的方法。并在此基础上,以(CT)8G为引物,采用单因素实验法,确立了适合珍珠黄杨的ISSR-PCR反应体系:在总体积20μL的反应体系中,含30ngDNA模板,2.0mmol/LMg2+,0.30μmol/L引物,0.20mmol/LdNTPs,1UTaq酶。

珍珠黄杨两个天然群体遗传多样性的RAPD分析

以珍珠黄杨为材料,研究了RAPD分析过程中的模板DNA、Mg2+、随机引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等影响因素,建立了适于珍珠黄杨RAPD分析的PCR反应体系,并在此基础上对珍珠黄杨两个天然群体的遗传多样性进行了分析。从200个随机引物中筛选出14个引物共检测出个161个位点,其中多态位点137个。用POPGEN32版软件对数据进行了分析,结果表明:多态位点百分率为85·09%,Shannon’s信息指数为0·5492,Nei’s基因多样性为0·3711,珍珠黄杨具有较高的遗传多样性。

珍珠黄杨ITS-PCR体系的建立与优化

本研究利用改良CTAB法从珍珠黄杨叶片中提取基因组DNA作为模板,在TaqDNA聚合酶量不变的基础上,利用正交设计L9(34)对4个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP和引物)在3个水平上对珍珠黄杨ITS-PCR反应体系进行优化。实验结果表明,在总体积50μL的反应体系中,建立了最佳ITS-PCR扩增条件:Mg2+浓度2.0mmol/L、引物浓度0.3μmol/L、dNTP浓度0.3mmol/L、DNA模板浓度240ng/50μL、TaqDNA聚合酶的用量1.75U/50μL和退火温度56℃,该优化体系保证了珍珠黄杨ITS-PCR产物的纯度和质量要求。珍珠黄杨ITS片段克隆测序后获得的序列长度为642bp,其系统学信息将为珍珠黄杨的起源进化提供有力的分子水平证据。

珍珠黄杨不同扦插继代的荧光特性

利用叶片体内荧光测定技术,检测了通过连续继代扦插的高山引种驯化植物珍珠黄杨的4个不同继代的荧光诱导动力学参数。结果表明:Fv,Fm,Fv/Fm,Fv/Fo,Fm/Fo这5个参数从1990、1994、1998到2000继代呈现逐渐增大规律。后一继代各参数值都比前一继代的大,后续继代(1998、2000继代)Fm/Fo和Fv/Fo明显大于初始继代(1990、1994继代),表明后续继代的PSⅡ潜在活力和光能转换效率较高。荧光诱导动力学从P相到T相的时间逐渐缩短,振荡衰减逐渐加快,暗示光合作用的光、暗反应在初始继代,特别是1990继代受到严重抑制。珍珠黄杨除1990继代的Pq值大于QNP值外,其他3个继代均是QNP值大于Pq值,并且随着继代扦插的进行,QNP在荧光淬灭中所占的比值越来越大,Q的变异趋势与其生长适应能力的变化是一致的。

珍珠黄杨优良无性系形态特征分析

根据珍珠黄杨的形态生物学特征,对其种质资源进行了定性和定量描述,初步整理出5个无性系品种,为申报新品种和合理利用珍珠黄杨资源提供了依据。

珍珠黄杨无性系过氧化物酶同工酶分析研究

[目的]利用过氧化物酶(POD)同工酶标记技术对珍珠黄杨无性系进行研究。[方法]以珍珠黄杨普通无性系和新整理出的5个无性系为材料,对其叶片提取液进行POD同工酶电泳。[结果]结果表明:珍珠黄杨各无性系经POD同工酶电泳后条带数较少,只有4条,多态性不强,但根据酶谱染色深浅仍能区别各个无性系。[结论]研究认为该技术在珍珠黄杨无性系鉴定中有一定的应用潜力。

利用ISSR标记鉴别珍珠黄杨无性系

利用ISSR-PCR方法对珍珠黄杨5个无性系进行了基因组多态性分析,从100个ISSR引物中筛选出19个多态性引物用于扩增,共扩增出256条谱带,其中多态性条带211条,占总带数的82.4%,平均每条引物扩增的DNA带数目为13.5条,依据扩增结果进行Ne i相似性系数和遗传距离分析,利用UPGMA法构建聚类树状图。结果表明:ISSR分析产生了一些无性系特有的指纹图谱,认为ISSR技术在珍珠黄杨无性系鉴定和阐明遗传关系中有一定的应用潜力。

珍珠黄杨RAPD最佳反应体系研究

以RAPD遗传标记为手段,对野生珍珠黄杨种群RAPD最佳反应体系进行研究。结果表明,在36℃时珍珠黄杨有比较好的片段数量和片段亮度。此外,2.5 mmol·L-1 Mg Cl2,0.25 mmol·L-1 d NTP,0.3μmol·L-1引物浓和2.0 U·(20μL)-1 Taq DNA聚合酶构成了珍珠黄杨RAPD扩增的最佳组合反应体系。

珍珠黄杨叶片的蛋白质提取方法探讨

蛋白质样品制备是双向电泳的核心。为了找到一种适合提取珍珠黄杨叶片蛋白质的方法,本文以该树种扦插苗的叶片为材料,用TCA-丙酮沉淀法、Tris-饱和酚法和2-D Clean-Up Kit提取蛋白质,并进行双向凝胶电泳,采用银染法进行检测。结果表明,TCA-丙酮沉淀法得到的样品图谱背景模糊、拖尾;Tris-饱和酚法得到的样品图谱清晰,蛋白点饱满,无纵向或横向拖尾,但有蛋白点丢失;2-D Clean-Up Kit提取的蛋白质样品得到了较好双向电泳图谱。

珍珠黄杨矮化基因BsGAI2的克隆及功能分析

GA信号转导途径或生物合成受阻是导致植物矮化的重要因素,而DELLA蛋白是GA信号传导通路中一类重要的负调节因子。本研究利用同源克隆和RACE技术,从珍珠黄杨中克隆得到BsGAI2基因的c DNA序列,全长为2305 bp,包括1836 bp完整的ORF。实时荧光定量表达分析表明,BsGAI2基因在珍珠黄杨茎中表达量最高,在根中表达量最低;BsGAI2转基因烟草呈明显矮化,节间变短,长势较慢,延迟开花等特征。利用GFP荧光检测方法鉴定转化型烟草,发现转化苗的叶、茎中均有荧光信号,并且茎木质部有明亮富集的荧光信号。这些结果均表明BsGAI2基因可能在珍珠黄杨茎节间缩短导致矮化的过程中扮演重要角色。本研究分析了BsGAI2基因编码蛋白的理化性质和功能鉴定,为今后进一步研究BsGAI2基因及DELLA蛋白家族的功能提供了理论依据。

珍珠黄杨育苗栽培与盆景制作技术

对珍珠黄杨的形态习性、育苗栽培、病虫害防治及盆景制作进行了阐述,对加强野生资源保护、合理开发应用这一濒危物种具有较高意义。

珍珠黄杨愈伤组织诱导的研究

[目地]探讨珍珠黄杨愈伤组织的诱导条件.[方法]以MS为基本培养基,采用2.0、1.6、1.2和0.8 mm4种不同直径茎段为外植体,采用NAA和6-BA 2种激素不同浓度组合诱导愈伤组织;采用2,4-D、NAA和6-BA 3种激素的不同浓度组合对珍珠黄杨愈伤组织进行继代培养.[结果]使用珍珠黄杨茎段为材料时,最佳愈伤组织诱导激素组合为1.0 mg/L NAA ＋2.0 mg/L 6-BA,出愈率为69.84％;最佳取材直径为1.2～1.6mm;最佳愈伤继代激素组合为2.0 mg/L2,4-D＋ 1.0 mg/L 6-BA.[结论]该研究为珍珠黄杨的高速繁殖研究奠定了基础.

珍珠黄杨的养护

珍珠黄杨是树桩盆景的理想树种。但有人认为珍珠黄杨无法驯化，不好养，致使珍珠黄杨言不顺名不正。本人莳养珍珠黄杨盆景多年，认为它是极好的盆景素材，现将与同仁共同学习研讨。

珍珠黄杨的嫩枝育苗技术

插床的设置：育苗地宜选在温室或大棚内，床底垫12-15厘米厚的煤渣或砾石、粗沙作渗水层，上铺15-20厘米厚的细河沙作扦插基质、扦插前沙床要喷水，使持水量达到四成饱和，而后将沙压实、刮平待用，初次扦插可直接使用，重复使用时需用500倍高锰酸钾溶液彻底杀菌消毒。

中国红珍珠黄杨

中国红珍珠黄杨在青州繁育成功，现有成熟结果大树200余株，成活的小苗数千株。其由著名植物学家、南京林业大学博士生导师向其柏敦授发脱并命名，他认为是一个反季节、高观赏性的新品种。

珍珠黄杨雨季嫩枝扦插育苗

珍珠黄杨，又称瓜子黄杨，常被用作道路绿化的地被绿篱，可单株造型，或作为盆景制作材料。采用雨季嫩枝扦插育苗，是珍珠黄杨快速繁殖的好方法。因嫩枝中生长素含量高，组织幼嫩，分生组织活跃，顶芽和叶子有合成生长素与生根素的作用，可促进生成愈伤组织并生根，容易成活。雨季扦插，光热充足，生长快，能够有效地缩短育苗周期，提高土地利用率和节约生产成本。但是，由于雨季气温高，光照强，蒸发量大，湿度不易保持，掌握不好就会造成扦插失败。根据多年生产经验，应把握以下技术要点。

珍珠黄杨BsGAI1基因的克隆及实时定量表达分析

DELLA蛋白是赤霉素信号传导通路中一类重要的负调节因子。本研究以珍珠黄杨叶片为试材,利用PCR技术和RACE技术克隆得到珍珠黄杨DELLA蛋白基因Bs GAI1。其c DNA全长2 576 bp,包括1 884 bp完整的ORF,能够编码含有627个氨基酸的蛋白。同时,蛋白相对分子质量为67.39 k D,等电点(p I)为4.99,并且总亲水性平均数为-0.162,预测该蛋白为亲水性蛋白。生物信息学研究表明,Bs GAI1编码蛋白具有DELLA蛋白的典型结构域。实时荧光定量表达分析表明,Bs GAI1基因在珍珠黄杨根、叶、茎和花中都有一定的表达,在根中表达量最低,茎中表达量最高。研究说明,Bs GAI1基因可能在珍珠黄杨茎节间缩短导致矮化的过程中扮演重要角色。