大鼠内耳前体细胞的增殖研究

目的探讨不同年龄及生长因子对大鼠内耳前体细胞体外增殖的影响。方法 1分离取出出生后1天(P1)、7天(P7)、14天(P14)、21天(P21)、30天(P30)、60天(P60)各天龄12只(24耳)SD大鼠的球囊斑、椭圆囊斑、Corti器的前体细胞,在无血清条件下进行单细胞悬浮培养,至第七天,在倒置相差显微镜下对所形成的细胞球进行计数;2取P1大鼠球囊斑、椭圆囊斑、Corti器高增殖细胞分为实验组和对照组,实验组分为四组,培养液分别添加表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF),对照组不加生长因子,观察不同生长因子对细胞球数量的影响;3免疫荧光染色检测细胞球的表型特征。结果1P1SD大鼠内耳各器官单细胞表现为nestin阳性,培养7天后,可形成悬浮的细胞球,球体细胞免疫荧光表现为nestin和BrdU阳性;2耳蜗Corti器只在P1、P7可形成细胞球,而球囊斑、椭圆囊斑各天龄段均可形成细胞球;3培养液中添加EGF、bFGF、IGF-1组,培养形成的细胞球数量明显增多,与对照组比较,差异有显著统计学意义(P<0.01);添加LIF组则与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠内耳球囊斑、椭圆囊斑以及耳蜗Corti器内有高增殖能力细胞,能表达神经干细胞的特性;随着鼠龄的增长,这种增殖能力总体表现为减退趋势;EGF、bFGF、IGF-1均可单独促进P1大鼠内耳前体细胞的增殖,而LIF无促增殖作用。

实验动物前庭感觉毛细胞的定量观察

目的测量常用实验动物内耳前庭感觉区的实际面积和量化分析前庭各个感觉区的毛细胞总数或密度。方法①制作CBA/CaJ小鼠、裸鼠、SD大鼠、豚鼠、南美栗鼠、新西兰白兔和非洲黑长尾猴的球囊斑铺片和椭圆囊斑铺片及壶腹嵴铺片,所有铺片样品来自每种受试动物的6个颞骨,在放大100倍的光学显微镜下拍摄2个囊斑铺片的整体照片;②应用Image J软件的图像测量程序,测量了上述7种常用实验动物球囊斑和椭圆囊斑的实际面积;③用网格将球囊斑铺片和椭圆囊斑铺片照片上的前庭感觉区划分为一个个方块区域。在放大400倍的光学显微镜下准确计数每个方格内的毛细胞数量,然后将每个方格的毛细胞计数结果相加以获得每种受试动物球囊斑和椭圆囊斑上的毛细胞总数;④应用前庭小视野定量观察技术计算出前庭各个感觉区小视野范围内的毛细胞密度。结果①从小鼠、裸鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔到猴的球囊斑面积依次为(0.193±0.009)、(0.216±0.008)、(0.323±0.010)、(0.528±0.035)、(0.687±0.065)、(1.237±0.075)、(1.371±0.032)mm 2;椭圆囊斑的面积依次为(0.193±0.020)、(0.208±0.013)、(0.321±0.011)、(0.526±0.034)、(0.795±0.017)、(1.224±0.082)、(1.388±0.048)mm 2;②从小鼠、裸鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔到猴的球囊斑毛细胞的总数依次为(2476.3±64.4)、(2389.8±47.8)、(3135.3±191.6)、(4882.2±208.7)、(6128.5±242.9)、(10572.2±464.4)、(10992.7±397.4)个;椭圆囊斑毛细胞的总数依次为(2491.4±54.8)、(2368.0±46.1)、(3218.8±82.9)、(4925.3±271.1)、(7794.0±386.1)、(11347.4±435.7)、(11114.5±410.6)个;③从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的球囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为101.0±5.79(微纹区)/120.8±4.15(周边区),95.5±3.91(微纹区)/109.2±5.26(周边区),78.4±6.54(微纹区)/94.8±4.38(周边区),60.0±4.74(微纹区)/84.6±2.61(周边区),57.2±3.83(微纹区)/80.0±3.54(周边区),53.8±4.21(微纹区)/68.0±4.18(周边区)。从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的椭圆囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为103.8±5.02(微纹区)/119.2±3.70(周边区),91.2±2.49(微纹区)/106.4±4.16(周边区),74.1±3.54(微纹区)/90.8±3.56(周边区),60.4±4.98(微纹区)/81.6±2.07(周边区),57.8±1.92(微纹区)/77.8±3.70(周边区),54.0±2.74(微纹区)/66.4±2.51(周边区)。从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的壶腹嵴毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为112.4±6.38,105.5±3.51,95.2±3.42,84.0±7.16,78.2±2.86,70.8±2.39。可见由于体型较小动物毛细胞的细胞体比体型较大动物毛细胞的细胞体小,因而体型较小动物的前庭毛细胞密度高于体型较大动物的前庭毛细胞密度。另外,每种实验动物球囊斑和椭圆囊斑微纹区的毛细胞密度相似,周边区的毛细胞密度也大致相同,但是同种实验动物囊斑微纹区的毛细胞密度却低于周边区的毛细胞密度。此外,壶腹嵴毛细胞的密度与球囊斑和椭圆囊斑周边区的毛细胞密度几乎相同。鉴于某些损害因素往往具有选择性破坏囊斑微纹区毛细胞的表现,因此囊斑微纹区的毛细胞密度应该与囊斑周边区的毛细胞密度区分开来进行统计,必要时甚至需要把Ⅰ型毛细胞和Ⅱ型毛细胞也区分开来分别予以病理学改变的定量评估。结论本研究采用的前庭测量方法和获得的前庭各个感觉区的测量数据和毛细胞总数及毛细胞密度,为前庭病理学研究的定量分析提供了有益的参考经验和必要的参考数据。

质膜钙ATP酶异构体1～4的剪接体在新生大鼠前庭器官的表达

目的研究质膜钙ATP酶异构体(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase isoforms,PMCAs)1~4(PMCA1~4)的A端和C端剪接变异体在新生大鼠前庭器官的表达。方法取出生2天的健康SD大鼠10只,断头后分离出前庭器官(椭圆囊斑和球囊斑),提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测PMCA1~4的A端和C端剪接变异体的表达。结果在新生大鼠的椭圆囊斑和球囊斑PMCA1~4表达的剪接体分别为PMCA1x/b,PMCA2w/(a、b),PMCA3z/(a、b、c)和PMCA4(x、z)/b。结论在新生大鼠前庭器官,PMCA1、PMCA2、PMCA3和PMCA4之间表达的A端和C端剪接变异体类型均不同,这可能是由于椭圆囊斑和球囊斑对这些PMCA亚型有着不同的Ca2+调节需求。

胎儿前庭感觉上皮的定量学研究

目的:补充正常胎儿前庭感觉上皮的解剖形态学资料。方法:本组实验选用新鲜胎尸30例,通过球囊斑、椭圆囊斑、壶腹嵴的分离铺片技术,光学显微镜观察,结果输入JVC图象分析系统。结果:球囊斑、椭圆囊斑、壶腹嵴的毛细胞数分别为18634±297、32834±246、7459±94个,与成人相应部位比较差异不显著(P>0.05)。球囊斑、椭圆囊斑、壶腹嵴的表面积分别为1.95±0.14、3.62±0.36、0.87±0.06mm2,与成人相应部位比较差异显著(P<0.05)。随着胎龄的增加,前庭感觉上皮的面积也增加(0<r<1且P<0.05)。结论:胎儿的前庭感觉上皮的面积较成人的前庭感觉上皮的面积小,但感觉毛细胞数与成人的感觉毛细胞数差别不大。24周以上胎儿前庭感觉上皮的表面积与胎龄呈正相关。

噪声作用对链霉素在内耳不同结构含量的影响

耳毒性药物和噪声在耳蜗、前庭病理性破坏中占有重要地位。声响负荷与抗生素耳毒性联合作用则对内耳的影响特别大,然而,噪声增强抗生素毒性作用的机制仍然不明。为此,著者研究了噪声对链霉素在内耳结构含量分配的影响。应用组织自动放射摄影术追踪观察注入动物体内的标记物,即以35S标记的放射性链霉素硫酸盐,按每公斤体重50毫居里的剂量（200000/kg）注入实验动物的腹腔内。用强度为100dB,频率为2870～5740赫的窄带噪声进行刺激,实验动物为45只白鼠和15只豚鼠。分两个实验组,第一组动物声音刺激持续6小时后立即杀死,而在噪声持续达3小时时注入放射性链霉素。第二组实验动物每天接受6小时的噪声刺激共5天,也是在实验终了前3小时注入链霉素。对照组的动物注入链霉素而不进行噪声刺激。

前庭学

900724 豚鼠内耳前庭器超微结构研究/戚琼芳…∥江苏医药.-1989,15(8).-440～441 本文通过扫描和透射电镜研究正常豚鼠前庭器的超微结构,探讨了前庭椭圆囊斑,球囊斑和壶腹嵴的形态结构及结构与功能的关系,为进一步研究人类前庭病理及晕动病的发病机理打下基础。图3参3(原提要) 900725 豚鼠圆窗膜的超微结构研究(摘要)/孙新辉…∥西安医科大学学报.-1989,10(4)

前庭学

901218 压力波引起豚鼠前庭器损伤的电镜观察/王尔贵…//第四军医大学学报.-1990,11(1).-4～6 作者将豚鼠暴露于压力峰值为175.3dB(SPL)的压力波。爆震后行前庭功能检查及透射电镜观察。结果示前庭功能未发现异常。透射电镜发现半规管壶腹嵴和球囊斑。