球型脂联素通过TGFβ_1/Smads通路对2型糖尿病大鼠肾病保护作用的探讨

目的探讨球型脂联素(gAd)对2型糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用,分析其是否通过转化生长因子β_1(TGF-β_1)/Smads通路起作用。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=18)、造模组(n=42),成功建立2型糖尿病肾脏病变模型的36只大鼠再随机分为2型糖尿病组(DM组,n=18)、gAd干预组(AD组,n=18)。分别于观察4周、8周、12周时测各组大鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿白蛋白、尿肌酐和肾重/体重,观察肾脏病理改变,测TGF-β_1、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达水平。结果在各时间段,DM组较NC组FBG、24 h尿白蛋白、尿肌酐、肾重/体重及TGF-β_1、Smad3表达升高,Smad7表达降低(P <0.05);AD组较DM组FBG、24 h尿白蛋白、尿肌酐、肾重/体重及TGF-β_1、Smad3表达降低,Smad7表达升高(P <0.05)。结论 gAd可通过降低TGF-β_1、Smad3表达,同时上调Smad7表达,延缓2型糖尿病肾病肾纤维化的进展。

球型脂联素对高糖环境下脐静脉内皮细胞增殖及VEGF表达的影响

目的研究高糖环境下球型脂联素作用于人脐静脉内皮细胞增殖及调节VEGF的机制。方法通过噻唑蓝(MTT)比色法探索是否在高糖环境下影响人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖;并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测经球型脂联素作用后高糖培养基上清中VEGF的含量,进行统计分析。结果经球型脂联素处理后的HUVEC增殖能力明显高于高糖组,且培养基中上清液VEGF蛋白的含量也有显著升高(P<0.05)。结论球型脂联素在高糖环境下可通过下调VEGF的表达显著促进HUVEC的增殖,并能在一定程度上逆转高糖条件诱导的HUVEC损伤。

球型脂联素对高糖环境NIT-1胰岛β细胞功能的影响

用β细胞株NIT—1来研究球型脂联素对高糖损伤β细胞分泌功能及相关基因表达的影响。结果显示球型脂联素可恢复部分β细胞功能相关基因的表达，抑制高糖诱导NAD（P）H氧化酶组分p47phox表达增加，但未能改善高糖诱导的胰岛素mRNA水平下降及胰岛素分泌缺陷。

人脂联素球型结构域原核表达重组质粒的构建及体外表达

目的通过分子克隆表达人脂联素基因球型结构域(gAd),为进一步研究提供实验基础。方法应用RT-PCR方法从人大网膜脂肪组织总RNA中扩增出gAd cDNA,克隆入载体pMD18-T、pET32a(+)中,形成重组质粒gAd-pET32a(+)。筛选出阳性克隆,通过限制性内切酶酶切、PCR和测序进行鉴定,并在体外进行小量表达。结果从脂肪组织总RNA中扩增得到412 bp片段gAd基因,其cDNA序列与GenBank人gAd基因序列相同,并在体外表达得到相对分子质量为34 000的重组蛋白。结论成功构建了gAd基因原核表达质粒并实现体外的小量表达。

脂联素对2型糖尿病大鼠心肌组织TGF-β_1/Smads信号通路的影响

目的观察球形脂联素(gAd)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads信号通路的影响,探讨2型糖尿病心肌病心肌纤维化的机制。方法将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=24)、造模组(n=56)。将成模大鼠再随机分为糖尿病心肌病组(DCM组,n=26)、gAd干预组(DA组,n=26)。DA组大鼠每日腹腔注射gAd 10μg/kg,DCM组和NC组注射同等剂量生理盐水。药物干预4周末、8周末、12周末,随机取8只大鼠,心脏超声评价心功能,腹主动脉采血测相关生化指标,HE染色观察心肌组织形态,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白免疫印迹(Western blot)法分别测定心肌组织Smad3、Smad7、TGF-β_1 mRNA和蛋白表达。结果在各时间段中,与NC组比较,DCM组大鼠心重指数增加,心功能减退,DA组心功能好转(P<0.05);与NC组比较,DCM组心肌组织TGF-β_1、Smad3表达增加,Smad7表达减少;应用gAd干预后,TGF-β_1、Smad3表达较DCM组减少,Smad7表达较DCM组增加,且呈时间依赖性(P<0.05)。结论 gAd通过抑制TGF-β_1/Smads信号通路,改善心功能,延缓糖尿病心肌病的进展。

球形脂联素和葡萄糖对INS-1细胞内PPARα、CPT1与ACO基因表达的影响

以3、11、20mmol／L葡萄糖或在5mmol／L葡萄糖浓度时以2．5mg／L球形脂联素孵育INS-1细胞24h，RT—PCR检测PPARα、肉毒碱棕榈酸转移酶1（CPT1）和酰基辅酶A氧化酶（ACO）mRNA的表达。结果显示，随着葡萄糖浓度的升高，INS-1细胞PPARα和CPT1、ACO mRNA的表达降低（均P〈0．05），球形脂联素增加PPARα（0．945±0．153vs0．749±0．069）、CPT1（0．590±0．029vs0．388±0．037）和ACO（1．553±0．131vs1．287±0．224）mRNA的表达（均P〈0．05），可被AMP活化的蛋白激酶（AMPK）抑制剂阿糖腺苷所抑制（分别为0．360±0．113、0．248±0．037和0．942±0．303，均P〈0．05）。