球孢虫草(Cordyceps bassiana)活性成分分析

以球孢虫草为材料,采用气相色谱测定了虫草多糖的单糖组成,高碘酸钠比色法测定了D-甘露醇含量,应用HPLC测定了核苷类物质的含量及组成,并与野生冬虫夏草进行了比较。结果表明,球孢虫草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比是1.2:1.0;胞内多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.4:4.0:1.0。球孢虫草子座与发酵菌丝体中甘露醇的含量分别为4.01%和12.05%;且它们中均含有鸟苷、腺苷和尿苷三种成分,但发酵菌丝体中三者的含量高于子座及野生冬虫夏草。通过三种活性成分测定,为综合评价球孢虫草内在品质和开发球孢虫草提供了科学依据。

蝉生球孢虫草液体发酵培养基的优化及其菌丝多糖对免疫细胞功能的影响

目的:对药用真菌球孢虫草Cordyceps bassiana Bs1112菌株的液体培养进行优化,提取纯化的菌丝多糖并进行免疫功效的评估。方法:采用Plackett-Burman设计和响应面分析获得的优化培养基组分,通过凝胶渗透色谱法(GPC)色谱分析菌丝多糖的重均相对分子质量;采用流式细胞术检测球孢虫草多糖对人体关键免疫调节细胞(NKT细胞)的CD3+CD56+双阳性影响,并以肝癌细胞Hep G2为靶细胞评估经球孢虫草多糖处理后的NKT细胞的杀伤率。结果:响应面分析优化获得培养基组分比例,多糖含量最高可达913.5 mg/L。经凝胶渗透色谱法色谱分析发现菌丝多糖的重均相对分子质量为2212815 u。不同质量浓度球孢虫草多糖处理对CD3+CD56+NKT细胞的体外增殖产生抑制作用,但增强了该细胞对Hep G2细胞的杀伤力。结论:条件优化后获取的球孢虫草菌丝多糖对人体NKT细胞具有免疫调节作用。

重要虫生真菌球孢白僵菌有性型的发现和证实

球孢白僵菌Beauveria bassiana是害虫生物防治中最重要的虫生菌之一, 但百余年来其有性型一直未能证实. 最近在安徽大别山和牯牛降自然保护区均采集到一种未见描述的虫草, 并由其次生子囊孢子单孢分离出球孢白僵菌. 典型的微循环产孢现象证实了该虫草为球孢白僵菌有性型. 该虫草被作为新种命名为球孢虫草(Cordyceps bassiana Li, Li, Huang & Fan sp Nov).

虫草属EST-SSR标记系统的建立研究

目的:通过球孢虫草、蛹虫草EST设计EST-SSR引物,建立虫草属EST-SSR标记系统。方法:从NCBI公共数据库下载获得虫草EST,利用Sequece Seiners 1.2软件去除冗余序列并设计引物,进行PAGE电泳。结果:通过去除EST总序列中低质量的和冗余的序列后,得到全长为2 953 173 bp的4 556条无冗余球孢虫草EST。从中发掘出718个EST-SSR,分布于616条EST中,出现频率是15.8%。平均分布频率是每4 096 bp出现1个,三核苷酸重复序列有419个,是出现最多的重复类型。蛹虫草EST去冗余后得到1 363条无冗余EST,共含有1 117个EST-SSR,出现频率为81.95%,出现最多的重复类型是A核苷酸重复。根据球孢虫草EST-SSR序列,设计合成50对引物,有扩增产物的引物为34对,占总设计引物数的68%。根据蛹虫草EST-SSR,设计合成40对引物,有扩增产物的引物为39对,占总设计引物数的97.5%。基于SSR标记进行聚类分析,7种虫草无性型均能分开,且分为4支。结论:虫草属EST-SSR出现频率较高、类型较丰富、多态性潜能较高,具有较高的利用价值。球孢虫草和蛹虫草EST开发的SSR标记在虫草属有较好的转移性与通用性,可以很好的应用于虫草种间遗传关系的研究。应用虫草物种EST建立分子标记是一条简便而又有效的途径。