力达霉素产生菌球孢链霉菌C-1027中atrA同源基因的克隆及分析

目的:在天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中多效性调节因子AtrA(AtrA-c)可通过激活放线紫红素途径特异性的调节因子ActII-ORF4的转录来控制放线紫红素的产生。在灰色链霉菌Streptomyces griseus NBRC13350和阿维链霉菌Streptomyces avermitilis MA-4680中也发现了AtrA-c编码基因(atrA-c)的同源基因,分别影响链霉素和阿维菌素的生物合成。为探索球孢链霉菌C-1027(Streptomyces globisporus C-1027)中是否存在AtrA,克隆球孢链霉菌C-1027中atrA基因并进行生物信息学分析,为进一步确定其对力达霉素产生的调控作用及调控机制奠定基础。方法:采用在球孢链霉菌C-1027中异源表达AtrA-c,来确定AtrA-c对力达霉素产量的影响;通过Southern blot分析来判断在球孢链霉菌C-1027基因组中是否有atrA-c同源基因;PCR扩增方法获得球孢链霉菌C-1027 atrA基因(atrA-gl)并测序;通过多种生物信息学软件来分析atrA-gl及其与旁侧基因的组织结构、对已发现的AtrA蛋白进行同源性比对及亲缘关系分析。结果:在球孢链霉菌C-1027中异源表达天蓝色链霉菌AtrA-c蛋白,发现其对力达霉素的产量有影响。以atrA-c为探针,通过Southern blot分析显示球孢链霉菌C-1027基因组中存在atrA-c的同源基因。PCR扩增得到球孢链霉菌C-1027的atrA基因的全序列以及该基因上下游的旁侧序列(GenBank/EMBL/DDBJ登录号GU723707)。通过对球孢链霉菌C-1027、天蓝色链霉菌A3(2)、灰色链霉菌NBRC13350以及阿维链霉菌MA-4680 AtrA蛋白序列进行同源性分析发现,4种AtrA蛋白编码氨基酸序列一致性达到65%～87%,相似性高达70%～89%。并且,球孢链霉菌C-1027 atrA基因与相邻基因形成的组织结构与天蓝色链霉菌和灰色链霉菌完全一致。根据蛋白质同源性绘制进化树,发现球孢链霉菌AtrA蛋白与灰色链霉菌AtrA蛋白亲缘关系最近。结论:确定在球孢链霉菌C-1027中存在atrA同源基因并影响力达霉素的产量,克隆了首个力达霉素生物合成基因簇外的调节基因——atrA基因,通过生物信息学分析初步推测了该基因的功能,为进一步研究AtrA-gl对力达霉素途径特异性级联调控网络的调控关系奠定了基础。

利用球孢链霉菌发酵液消化双歧杆菌细胞壁提取质粒的研究

目的寻找一种经济适用的提取双歧杆菌质粒的方法。方法利用球孢链霉菌发酵产生的变溶菌素来消化双歧杆菌细胞壁,提取质粒,并与商业化溶菌酶法比较。结果球孢链霉菌发酵液与溶菌酶均成功提取到质粒。结论利用球孢链霉菌发酵液提取质粒经济简便。

球孢链霉菌AM6的液体发酵条件研究

以PD培养液为测定培养基，采用抑菌圈法测定了球孢链霉菌AM6在不同培养时间、pH值、温度、通气量下液体发酵产物时烟草赤星病菌孢子的抑制作用。结果表明，AM6在培养的第96～108h和132-156h时分别达到产孢、产素高峰期；pH9．0,28℃产素最高；通气量少有利于产素。

不同培养条件对球孢链霉菌JK-1生长及其产生抗菌物质的影响

【目的】研究不同培养条件对球孢链霉菌JK-1生长及其产生抗菌物质的影响,明确该菌生长及其产生抗菌物质的最适培养条件。【方法】在不同培养条件下分别测量球孢链霉菌JK-1的菌体干重,并以稻瘟菌为指示菌,采用菌丝生长速率法测定不同培养条件下JK-1发酵液的抑菌活性。【结果】在供试的7种培养基中,LB培养基最有利于菌体生长,PSB培养基最有利于产生抗菌物质。JK-1在10～35℃范围内均可以生长并产生抗菌物质,25℃为菌体生长和产生抗菌物质的最适温度。JK-1在PSB中培养5d菌体干重可达最大值,培养7d抑菌活性可达到最大值。适宜于JK-1生长及其产生抗菌物质的pH值范围为6～8,最适为pH7。JK-1能够有效利用多种碳源和氮源进行生长和产生抗菌物质,其中分别以甘油为碳源和酪氨酸为氮源时生长最好;以麦芽糖为碳源和硫酸铵为氮源时发酵液的抑菌活性最强。【结论】球孢链霉菌JK-1生长和产生抗菌物质的最佳培养条件为pH7的PSB培养基,25℃条件下培养7d,甘油和酪氨酸最适于该菌的菌体生长,麦芽糖和硫酸铵最适于产生抗菌物质。

球孢链霉菌JK-1抗菌物质的理化特性研究

[目的]明确球孢链霉菌JK-1抗菌物质的基本理化性质.[方法]以稻瘟菌为指示菌,采用菌丝生长速率法分别测定球孢链霉菌JK-1发酵滤液在不同温度、不同酸碱度、蛋白酶K处理和硫酸铵盐析之后的抑菌活性;采用硫酸铵盐析对抗菌物质进行初步提纯,并通过超滤的方法初步测定该抗菌物质的分子量大小.[结果]球孢链霉菌JK-1产生的抗菌物质在高温和蛋白酶K处理的情况下抑菌活性显著降低,在pH2 ～ 11条件下抑菌活性无显著变化,而pH≥11的强碱性条件下抑菌活性显著降低.饱和度为50％的硫酸铵即可将发酵液中的抗菌物质完全沉淀下来,超滤发现其分子量在10 ～ 30 kD.[结论]该研究结果为球孢链霉菌的田间应用及其抗菌物质的分离鉴定奠定了基础.

球孢链霉菌溶菌酶的产生条件研究

研究了球孢链霉菌S186（Streptomycesglobisporus）溶菌酶的产生条件，球孢链霉菌在由糊精2．0％，大豆蛋白0．4％，多聚股0．2％，NaCl0．7％，KH2PO40．05％，Na2HPO40．1％，CaCl20．01％（起始pH7．5）组成的培养基中，30℃，240r／min振荡培养96h，酶活力达到30．1U／ml。

球孢链霉菌一种抗生素生物合成基因的核苷酸序列分析

C-1027是一种具有极强抗肿瘤活性的新型抗生素，由球孢链霉菌（Streptomycesglobisporus）产生。F2DNA片段含有一种编码C－1027生物合成的基因。以质粒pUC18为载体，对其进行了亚克隆，并对该片段进行了核苷酸序列分析，发现一编码122个氨基酸的开放阅读框架，经检索可能是一种新的序列。

球孢链霉菌的一个新变种

从我国青海湖的湖水中,分离到一株嗜盐的链霉菌,编号为3701.经对该菌株形态、培养特征,生理特性、碳源利用、抗菌谱等进行研究后,发现它与球孢链霉菌比较相似,但又有明显区别,认为是个新变种,命名为球孢链霉菌青海湖变种(Streptomyces globisporus var.qinghailacustris n.var.Feng).

抑制真菌病害几丁质酶产生菌的筛选、鉴定

从土壤中分离到132株细菌和链霉菌,用平板透明圈法筛选到32株产几丁质酶菌株,其中一株链霉菌经测定对稻瘟菌、水稻纹枯病菌、辣椒炭疽病菌、小麦赤霉病菌等多种病原真菌具明显抑制作用,该菌经形态学及生理生化特性鉴定,初步定为球孢链霉菌(Streptomyces globisporus),是一种新的几丁质酶产生菌。

变溶菌素(Mutanolysin)研究历史和发展前景

变溶菌素(Ｍｕｔａｎｏｌｙｓｉｎ)是由球孢链霉菌(Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ)的培养液制备的由多种不同溶菌酶组成的粗酶液。这种溶菌酶群在防治龋齿、从细菌细胞壁制取免疫活性物质等方面及一些科研领域有着良好的应用前景,其研究越来越受到广泛?..

广谱拮抗放线菌C28的鉴定及其对甜瓜蔓枯病的防治效果

【目的】研究放线菌C28对12种植物病原真菌的抑菌作用及对盆栽甜瓜蔓枯病的防治效果,并对该放线菌进行分类鉴定。【方法】采用琼脂块法、生长速率法研究放线菌C28对靶标病原真菌的抑菌作用;通过盆栽试验研究C28对甜瓜蔓枯病的防治效果;根据形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析确定C28的分类地位。【结果】①放线菌C28对供试病原真菌具有一定的广谱拮抗性,拮抗圈直径为10.0～22.5mm;其无菌发酵滤液对病原真菌菌丝生长具有明显的抑制作用,无菌发酵滤液原液对木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)、层出镰刀菌(F.proliferatum)及葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)的抑菌率分别高达95.0%,90.0%及93.1%。②用放线菌C28无菌发酵滤液稀释104倍处理甜瓜种子后,甜瓜胚轴、胚根长度较对照(无菌水处理)增加37.1%和12.5%;种子简明活力指数高达141.7,与对照差异显著(P<0.05)。③用C28无菌发酵滤液原液喷施处理后,甜瓜蔓枯病病情指数较对照显著下降(P<0.05),预防和治疗效果分别为42.4%和40.0%。④根据形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列分析,将放线菌C28鉴定为球孢链霉菌球孢亚种(Streptomyces globisporus subsp.globisporus)。【结论】球孢链霉菌球孢亚种C28对多种病原真菌具有广谱拮抗性,对甜瓜蔓枯病具有良好的抑菌和生防效果,对瓜类种子萌发和生长具有一定的促进作用。

变溶菌素发酵条件的优化研究(Ⅱ)

研究了不同Ｃ／Ｎ比、表面活性剂、不同类型诱导物、种龄和发酵时间等多项操作条件对球孢链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ）Ｓ１８６产生变溶菌素（ｍｕｔａｎｏｌｙｓｉｎ）的影响。结果表明，最适Ｃ／Ｎ比为１３∶１，培养基中加入诱导物变形链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓｍｕｔａｎｓ）菌体细胞，变溶菌素的产量可提高２．４５倍，表面活性剂及消泡剂等的加入对变溶菌素的产生都有不同程度的影响，Ｔｗｅｅｎ２０和植物油均可促进酶的产生。

抗水稻主要真菌病害的H50的分类鉴定

从水稻田土壤中筛选到一株编号为H5 0的链霉菌 ,表现出对水稻纹枯病和水稻稻瘟病病菌有强烈的拮抗作用 ,其次生代谢产物对病菌菌丝有断裂、扭曲、缢缩等有致畸效应 .根据菌株形态特征、细胞壁化学成分、培养特征及生理生化特性等 ,鉴定该菌株为 :球孢链霉菌 (Streptomycesglobisporus) .图 3表 2参

溶氧对变溶菌素发酵的影响

变溶菌素是由球孢链霉菌产生的一种胞外溶菌酶群。它包括几种不同类型的溶菌酶,有着广阔的用途和良好的应用前景。许多研究结果[1,2]表明,它比卵清溶菌酶有更为广泛的溶菌谱,应用范围更广,尤其是在预防和治疗龋齿[3]方面有其独特的优点。在医药上可用作灭菌剂,也可用其作?..

非核糖体肽合成酶缩合结构域基因片段克隆

从大连渤海海域筛选出1株放线菌L1,结合形态观察、生理生化实验和16S rDNA分子鉴定,确定L1属于链霉菌属球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)。根据GenBank发布的非核糖体肽合成酶(NRPS)序列设计引物,从放线菌L1的基因组DNA中扩增获得NRPS基因片段。测序结果及比对分析表明该片段属于NRPS缩合结构域部分序列。三维建模显示其结构呈V型,包含缩合结构域核心序列,与数据库已知结构相一致,可以推断该克隆片段为NRPS缩合结构域基因片段,为后续深入研究缩合结构域特异性与相关NRPS功能提供基础。