球毛壳菌素A发酵工艺优化及有效成分的提取分离

[目的]对球毛壳菌素A的提取分离和发酵工艺优化进行了研究,并采用HPLC进行定量分析,为建立产量高、成本低、无污染的规模化球毛壳菌发酵生产工艺打下基础。[结果]经均匀设计法优化出培养基配方中碳源和氮源最优组合为蔗糖17 g/L,淀粉6 g/L,蛋白胨0.5 g/L,最佳发酵时间为13 d。采用乙酸乙酯作提取剂,浸泡时间为3 d。分离纯化采用乙酸乙酯-石油醚(体积比1∶3)为洗脱剂,展开剂采用乙酸乙酯-石油醚-甲酸(体积比37∶63∶1)为最佳。[结论]通过对培养基配方的优化,球毛壳菌发酵产生球毛壳菌素A的发酵量可达到0.17 g/L,比目前已报道的文献值高13.3%。

内生真菌代谢产物球毛壳菌素A的液相色谱分析

[目的]内生真菌代谢产物球毛壳菌素A具有优异、广谱的抑菌活性，具备良好的新型杀菌剂的开发前景。为了更好的分析发酵过程地液中球毛壳菌素A的含量，采用反相高效液棚色谱法，建立了内生真菌代谢产物球毛壳菌素A定量分析方法。[结果]经梯度洗脱优化出的色谱条件：使用DuPont ZORBAX ODS C18色谱柱，以乙腈为流动相A、水为流动相B，梯度条件：（A）0～10min，20％-25％；10～20min，25％-40％；20—55min，40％～55％；55-75min，55％～75％；75～85min，75％～90％。流速为1．0mL／min，柱温：25℃，波长为254nm。[结论]该方法精密度为1．49％，重现性为5．41％，可以作为球毛壳菌发酵优化过程中代谢产物球毛菌素A的检测技术。

球毛壳菌素F对Poly(I∶C)诱导的RAW264.7细胞TNF-α水平的影响

该实验主要研究球毛壳菌素F对聚肌苷酸胞苷酸Poly(I∶C)诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7 TNF-α表达水平的影响.采用不同浓度的Poly(I∶C)(50μg.mL-1、100μg.mL-1和200μg.mL-1)和球毛壳菌素F(2μg.mL-1)对RAW264.7进行处理,运用流式细胞术检测细胞内TNF-α的表达水平.结果表明,各浓度的Poly(I∶C)与对照组相比均能极显著提高RAW264.7的TNF-α水平(P<0.001),并且具有浓度依赖性;球毛壳菌素F能够极显著地降低Poly(I∶C)诱导的细胞TNF-α水平(P<0.01).结论,球毛壳菌素F可能是通过降低炎症因子TNF-α的分泌而达到抗炎作用的.

Chaetomium globosum PKS编码基因pks-1参与球毛壳甲菌素、黑色素和孢子形成

球毛壳菌(Chaetomium globosum)是自然界中分布最广泛的真菌之一,因产生球毛壳菌素(chaetoglobosins)而被人们所熟知.然而,该真菌球毛壳菌素合成的分子机制尚不清楚.本研究利用RNAi技术证实C.globosum的一个聚酮合酶(polyketidesynthase)基因pks-1参与chaetoglobosin A合成.RNA干扰pks-1后,chaetoglobosin A的产量明显下降,同时沉默转化子的黑色素合成降低、菌丝变白,表明两种聚酮类化合物—黑色素和chaetoglobosin A,可能共有相同合成步骤.实验还发现pks-1在孢子生成过程中也起着重要的作用,pks-1基因沉默转化子失去了产孢的能力,聚酮类化合物可能通过未知过程调控孢子生成.C.globosum的pks-1基因的多重作用未有报道.本研究为C.globosum的chaetoglobosins生物合成以及次生代谢和真菌形态发生的关系提供了有用信息.