人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定

目的:从人卵巢癌细胞株SKOV-3中分离培养卵巢癌干细胞,并鉴定其生物学性质。方法:卵巢癌SKOV-3细胞在含有生长因子的无血清培养基(SFM)中悬浮培养得到肿瘤细胞球。流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测SKOV-3细胞及其细胞球CD44和CD117的表达,筛选细胞表面标记物和观察体外侵袭能力;将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基(SSM)培养促使其分化,并将细胞球和普通SKOV-3细胞分别接种于96孔板,CCK-8法检测增殖能力及其耐药性。结果:卵巢癌SKOV-3细胞能在SFM中形成可以稳定传代的细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长;肿瘤细胞球中高表达CD44和CD117抗原标记,特别是CD44,其侵袭能力显著高于正常SKOV-3细胞(P<0.05);细胞球对顺铂具有更强的耐药性,将顺铂作用于细胞球及贴壁分化细胞24,48及72h后,细胞球抑制率分别为2.59%,8.43%,12.08%,显著低于分化贴壁细胞(抑制率分别为10.73%,28.13%,39.17%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞系中获取的细胞球,可能含有一小部分具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞,多表达CD44和CD117抗原标记,且CD44更具有特异性。

人胎肝细胞分离与培养技术的研究

目的 探讨分离及培养人胎肝细胞的最佳方法。方法 比较两种灌流消化法对分离人胎肝细胞的效果 ,观察不同条件对体外培养人胎细胞生长及生存时间的影响。结果 经腹主动脉及脐静脉双灌流消化法分离人胎肝细胞效果明显优于单纯经脐静脉灌流消化法 ,前者肝细胞获得率为 (5.97± 1 .81 )× 1 0 8/kg体重 ,后者肝细胞获得率为 (4 .1 2± 2 .3 1 )× 1 0 8/kg体重 (P <0 .0 5)。促肝细胞生长素对体外培养的人胎肝细胞生长和生存时间无明显影响 ,均在培养第 1 0～ 1 4天开始变性、坏死。鼠尾胶可延长体外培养人胎肝细胞的生存时间达 2 0～ 2 8d。与球体细胞培养方法相结合 ,人胎肝细胞在体外生存时间延长至 3 0～ 3 8d。结论 人胎肝细胞的分离应首选经腹主动脉及脐静脉双灌流消化法。人胎肝细胞在体外生存时间受培养条件的影响。