circNT5E靶向调控miR-152-3p对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨circNT5E对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织与人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌细胞HGC27中circNT5E、miR-152-3p的表达量。双荧光素酶报告基因实验检测miR-152-3p过表达对野生型载体wt-circNT5E、突变型载体mut-circNT5E荧光素酶活性的影响。以HGC27细胞为研究对象进行体外细胞实验,实验分组为si-NC组、si-circNT5E组、si-circNT5E-NC组、si-circNT5E-152-3p组。CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭能力。Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与癌旁组织和GES-1细胞相比,circNT5E在胃癌组织和细胞中表达量升高(均P<0.05),miR-152-3p的表达量降低(均P<0.05);进一步机制分析提示miR-152-3p是circNT5E的靶基因。功能实验表明敲除circNT5E抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭的能力,诱导细胞凋亡(均P<0.05)。敲除miR-152-3p可逆转circNT5E表达降低对细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用和对凋亡的促进作用(均P<0.05)。结论circNT5E可通过调控miR-152-3p介导胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。

3MA对Ce6-PDT诱导结肠癌SW620细胞凋亡及自噬的影响

目的探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3MA)对Ce6-PDT诱导结肠癌SW620细胞凋亡及自噬的影响。方法取对数生长期SW620细胞,分为空白对照组、单纯光照组、Ce6-PDT组和3MA-Ce6-PDT组,Ce6-PDT组加入不同浓度Ce6(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μg/m L),3MA-Ce6-PDT组给予1.0μg/m L的Ce6+5 mmol/m L的3MA。采用MTT法测算细胞存活率;Annexin V-PE/7-ADD染色及罗丹明123联合流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞线粒体膜电位变化;吖啶橙染色联合荧光显微镜观察细胞自噬体形成;蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达。结果 Ce6-PDT组细胞存活率与Ce6浓度浓度呈负相关(r=-0.820,P<0.01),细胞凋亡率与Ce6浓度呈正相关(r=0.845,P<0.01)。选取细胞存活率和细胞凋亡率约为50%时Ce6浓度1μg/m L为后续给药浓度。在Ce6浓度达到1μg/m L时,线粒体膜电位随Ce6浓度增加而降低(P<0.01)。空白对照组和单纯光照组几乎没有亮红色荧光产生,Ce6-PDT组中有大量亮红色荧光出现,3MA-Ce6-PDT组中出现亮红色荧光的数量较Ce6-PDT组减少。与Ce6-PDT组相比,3MA-Ce6-PDT组细胞存活率降低、细胞凋亡率升高、自噬相关蛋白表达降低、凋亡相关蛋白表达增加(P均<0.05)。结论Ce6-PDT可引起结肠癌SW620细胞发生凋亡和自噬,3MA会促进Ce6-PDT诱导的结肠癌细胞SW620凋亡。

疏风解毒胶囊HPLC指纹图谱研究

目的建立疏风解毒胶囊(pgC)emiC指纹图谱分析方法,为全面有效控制其质量提供依据。方法采用emiC法建立pgC指纹图谱,色谱条件:rnitaryCNU色谱柱(ORMmm×QKSmm,Rμm),以乙腈JMKNB甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量NKMmiL min,柱温PM℃,检测波长ORMnm,进样量NMμi;对所建指纹图谱进行相似度分析及主成分分析(m CA),并对共有峰进行药材归属及成分指认。结果建立了pgCemiC指纹图谱共有模式,确定了OO个共有峰;NQ批pgC相似度在MKVNR^MKVTT,m CA表明前P个主成分代表了原始emiC指纹图谱的主要信息;在指纹图谱所标定的OO个共有峰中,U、NO、NP、NQ、NR、NS、ON、OO号峰来自虎杖,N、O、P、T、V、NM号峰来自连翘,R、S、NN号峰来自马鞭草,Q号峰来自败酱草,NU、NV号峰来自甘草,NT、OM号峰未能归属到具体药材;通过质谱数据比对,共指认出NS个共有峰,分别为N号峰(连翘酯苷b)、R号峰(戟叶马鞭草苷)、S号峰(马鞭草苷)、T号峰(R′J羟基连翘酯苷A)、U号峰(虎杖苷)、V号峰(连翘苷)、NM号峰(连翘酯苷A)、NN号峰(毛蕊花糖苷)、NO号峰(异连翘酯苷A)、NP号峰(芦荟大黄素)、NQ号峰(大黄素JUJlJ葡萄糖苷)、NR号峰(大黄酸)、NU号峰(甘草酸单铵盐)、NV号峰(PJ羟基光甘草酚)、ON号峰(大黄素)、OO号峰(大黄酚)。结论首次建立了pgCemiC指纹图谱分析方法,该法操作简单、准确,精密度、重复性好,可较全面地反映pgC中化学成分的信息,为pgC质量控制提供了可靠的科学依据。