琥珀单酰诺氟沙星的合成

诺氟沙星与琥珀酸酐进行Ｎ－酰化反应制备琥珀单酰诺氟沙星，收率达７９．８％。

离子色谱法测定氯化琥珀胆碱原料及注射液中的氯化胆碱和氯化琥珀酰单胆碱

目的采用离子色谱法测定氯化琥珀胆碱原料及注射液中的氯化胆碱和氯化琥珀酰单胆碱。方法采用Dionex RFICTM Ionpac CS17色谱柱(4 mm×250 mm),以甲烷磺酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),采用抑制电导检测器进行测定。结果氯化胆碱、氯化琥珀酰单胆碱浓度分别在18.0～562.8μg·m L^(-1)(r=0.999 9)和14.4～449.8μg·mL^(-1)(r=0.999 9)内线性关系良好,定量限均为0.01μg·mL^(-1)。原料中氯化胆碱、氯化琥珀酰单胆碱回收率分别为103.4%～105.7%和102.4%～107.1%;注射液中氯化胆碱、氯化琥珀酰单胆碱回收率分别为95.6%～100.2%和94.4%～103.5%。结论该方法专属性强、准确、简便、快速,适用于氯化琥珀胆碱原料及制剂中的有关物质测定。

聚乙二醇(PEG-5000)对胰激肽释放酶化学修饰的初步研究

以自制单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯对猪胰激肽释放酶进行化学修饰,修饰产物以super-dex G75凝胶色谱柱进行分离纯化。结果表明,修饰PPK分子质量增加,保留活性降低,对温度的耐受性加强,稳定性增加。

猪红细胞的体外双修饰及异源输血试验

为探讨表面抗原修饰后猪红细胞异源输血的可行性,采用α-半乳糖苷酶和单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG-SC)对猪红细胞进行双修饰后,体外检测红细胞的渗透脆性,并进行配血试验和犬输血试验。观察输血前后犬的各项临床指标变化,并对其进行血常规和尿常规的连续检测分析。结果表明,修饰红细胞渗透脆性降低,体外配血未出现凝集反应。输血后亦未引起明显的临床异常反应,血常规及尿常规正常。说明猪红细胞体外双修饰后进行首次异源输血具有可行性,可作为动物通用血源用于临床。

聚乙二醇琥珀酰亚胺酯修饰牛血红蛋白作为红细胞代用品的条件研究

以单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯(Succinimidyl carbonate methoxy polyethylene glycol,SC-mPEG)为修饰剂对牛血红蛋白(Bovine hemoglobin,BHB)进行了修饰,考察了不同条件下,SC-mPEG与牛血红蛋白反应的产率,并且建立了SC-mPEG-BHB混合物的分析方法。根据不同反应因素对SC-mPEG修饰血红蛋白反应的影响确定了SC-mPEG与牛血红蛋白反应的最佳条件,即SC-mPEG与牛血红蛋白最佳配比为60∶1,在4℃,pH9的缓冲溶液体系反应2h。

胰高血糖素样肽-1在乙醇中的聚乙二醇修饰

以乙醇为溶剂,单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG-SC)为修饰剂,对胰高血糖素样肽-1(GLP-1)进行了修饰反应条件的优化,同时对单修饰产物Mono-PEG-GLP-1进行分离纯化,并考察了其体外稳定性和体内活性.得到的优化反应条件为:GLP-1浓度1mg/mL,mPEG-SC与GLP-1摩尔比1:1,37℃下反应24h,该产物最高转化率达77%.采用冷冻离心方式对Mono-PEG-GLP-1进行初步分离和浓缩,然后经反相液相色谱进一步高效纯化,纯度可达97%以上.体外实验表明,Mono-PEG-GLP-1在血清中具有更好的稳定性及更强的抗胰蛋白酶消化能力.体内动物实验表明,Mono-PEG-GLP-1具有更好的降血糖作用.

琥珀胆碱的体内过程及其法医毒物分析研究

琥珀胆碱是临床常用的去极化型肌松药,主要作为手术麻醉诱导剂。近年来该药被非法制成毒针,用来从事违法活动,造成人员琥珀胆碱中毒而死亡。本文综述了琥珀胆碱与代谢产物琥珀单酰胆碱的药代动力学过程,生物样品中琥珀胆碱和琥珀单酰胆碱的前处理以及定性、定量分析方法,对该药法医毒物分析过程中的分析靶标确定、生物检材确定、样品处理与保存等关键问题进行了探讨,对今后琥珀胆碱中毒的司法实践进行了展望。

聚乙二醇修饰牛血红蛋白作为红细胞代用品的条件优化和产物检测

目的:考察不同条件下单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯(SC-mPEG)与牛血红蛋白(BHB)的反应产率,以建立分析(SC-mPEG-BHB)混合物的方法。方法:综合运用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、凝胶渗透色谱(GPC)、毛细管电泳(CE)、三硝基苯磺酸(TNBS)等方法对产物进行分析。根据不同因素对SC-mPEG修饰BHB反应的影响,确定了SC-mPEG与BHB反应的最佳体系。结果:确定的最佳分析条件为SC-mPEG与BHB最佳配比60∶1,在4℃、pH9的缓冲溶液体系反应2h。结论:本文可为后续的红细胞代用品的研究奠定基础。

聚乙二醇修饰牛血红蛋白产物的分离纯化和检测

目的:研究聚乙二醇修饰剂单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯(SC-mPEG)对牛血红蛋白(BHB)修饰产物的合适的分离纯化、检测方法。方法:采用阳离子交换层析以及有机溶剂沉淀法进行分离,并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和三硝基苯磺酸(TNBS)法进行检测。结果:阳离子交换层析法分离出修饰与低修饰产物,TNBS法检测阳离子交换层析分离所得2个峰值产物的平均修饰率分别为52.95%和14.19%。结论:阳离子交换层析法可作为分离纯化SC-mPEG-BHB的方法;TNBS方法可作为检测SC-mPEG-BHB平均修饰率的方法。

聚乙二醇修饰重组溶葡球菌酶的初步研究

目的:探讨聚乙二醇(PEG)修饰重组溶葡球菌酶(lysostaphin)的反应条件以及修饰后产物的纯化方法。方法:采用超声波细胞粉碎机进行菌体破碎,阳离子交换层析、疏水层析进行蛋白纯化;在不同条件下,将活化的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA)与纯化后的lysostaphin反应,以单个PEG-Lysostaphin的比例为指标,用SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS方法确定其在修饰产物中的所占比例;采用Sephacryl S-200分子筛凝胶层析法对修饰产物进行分离纯化。结果:mPEG-SPA修饰lysostaphin的反应条件为pH 8.0,温度4℃,lysostaphin与mPEG-SPA的质量比为1∶5,反应时间2.0h;反应产物经一步Sephacryl S-200分子筛凝胶层析纯化后,初步实现分离。结论:初步确定了聚乙二醇修饰lysostaphin的反应条件及修饰产物的纯化方法。