甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐的合成及临床应用

目的合成甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)的底物甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐,并探讨其临床应用。方法采用DCC-HOB t脱水合成多肽方法制备甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐;采用连续检测法测定血清GPDA的活性。结果获得高纯度底物甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐,纯度为98.5%。血清GPDA活性在358.1 U/L以下线性良好,标本批内、批间平均变异系数分别为3.01%、5.04%。应用于临床检测表明,肝癌组GPDA活性增高而胃癌组和慢性胃炎组GPDA活性则下降,与正常组比较均有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论所合成的底物符合临床诊断肝癌、胃癌及慢性胃炎的要求。

铕-N,N-二(N-亚甲基琥珀酰亚胺)甘氨酸-1,10-二氮杂菲三元配合物的光致变色

合成了Ｎ，Ｎ－二（Ｎ－亚甲基琥珀酰亚胺）甘氨酸，并以元素分析、ＩＲ、１ＨＮＭＲ和质谱进行表征．实验中发现铕（Ⅲ）与Ｎ，Ｎ－二（Ｎ－亚甲基琥珀酰亚胺）甘氨酸和１，１０－二氮杂菲形成的配合物具有光致变色的性质．在铕变色物种里，铕离子与Ｎ，Ｎ－二（Ｎ－亚甲基琥珀酰亚胺）甘氨酸中的羧基，１，１０－二氮杂菲中的氮原子相结合。

N-对硝基苯甲酰四氢噻唑2-硫酮与甘氨酸的反应

在三聚氯氰存在下对硝基苯甲酸与四氢噻唑-2-硫酮反应得到N-对硝基苯甲酰四氢噻唑-2-硫酮．在K2CO3存在下产物与甘氨酸反应得到N-对硝基苯甲酰甘氨酸，与N-甲基甘氨酸反应得到了水解产物对硝基苯甲酸．

琥珀酰辅酶A转移酶硝基化酪氨酸位点特异单克隆抗体的制备

线粒体琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)含有4个酪氨酸残基,其4、76位点酪氨酸(Tyr4、Tyr76)的硝基化可导致其酶活性下降,制备特定的抗体可对其硝基化水平和位点进行检测。应用淋巴细胞杂交瘤技术,以化学合成的含琥珀酰辅酶A转移酶硝基化Tyr4和Tyr76肽段为半抗原,偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)后,作为免疫原免疫Balb/c小鼠,分离免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了多株融合细胞。经对融合细胞多次筛选和检测,最终获得4株单克隆抗体,分别对应SCOT Tyr4和Tyr76硝基化后表位,其间接ELISA检测效价分别达到1∶128 000、1∶32 000、1∶512 000和1∶4 096 000,表明抗体具有较强特异性和灵敏度。

连续监测法测定血清亮氨酸氨基肽酶的活性及临床应用

目的应用亮氨酰对硝基苯胺(Leu-pNA)为底物建立测定血清亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性的连续监测法,并探讨其在肝病诊断中的临床意义。方法基于LAP催化水解Leu-pNA生成有色对硝基苯胺的原理,对pH值、底物浓度、反应时间等条件进行研究,并用该法检测临床各种肝病血清LAP活性。结果酶促反应最适pH为7.20,最适底物浓度为4.8 mmol/L,批内、批间平均变异(CV%)分别为3.68%、5.91%。临床检验表明,肝硬化、活动性肝炎患者的血清LAP活性均高于正常组,呈现显著性差异(P<0.05)。结论本法灵敏度高,结果准确,且操作简便,在肝脏疾病诊断中具有临床意义。

肉制品中使用亚硝酸盐的现状与发展

本文回顾了利用亚硝酸盐腌肉制品的各方进展,评价了腌制生产的现状,预测了未来的发展趋势.观点中有些是一般性的概念,也有一些是很具体明确的研究结论.本文目的是做一个总的客观的报告,同时对结论给出技术性解释.最近。

HPLC快速测定血液制品中的保护剂甘氨酸

目的采用HPLC法测定血液制品中保护剂甘氨酸的含量。方法采用N-羟基琥珀酰亚胺苯甲酸酯进行衍生结合中空纤维离心超滤-HPLC法快速测定甘氨酸。采用Angla Innoval C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%三乙胺磷酸缓冲液(25∶75,pH5.0),流速1 mL·min^(-1),检测波长236 nm,进样量10μL。结果40~140 mg·L^(-1)甘氨酸与峰面积呈良好的线性关系(r^(2)>0.9999);几种血液制品的回收率为98.4%~101.8%,RSD<2%。结论所用方法操作简单、快速,结果准确、可靠,可为血液制品中甘氨酸的快速含量测定提供可靠的分析平台。

血浆弹性蛋白酶的微量测定和临床应用

目的 拟建立一种血浆弹性蛋白酶的快捷、微量测定方法。方法 以琥珀酰甘氨酰对硝基苯胺 (succinyl-L -trianalinyl-p -nitroanilide ,SLAPN)作为弹性蛋白酶的作用底物 ,根据单位时间内 4-硝基苯胺释放量 (A450nm)的变化 ,反应弹性蛋白酶的活性。结果 线性范围为 0～ 5 0 0 μg/L,批内和批间误差分别为 5 .0 2 %和 8.3 2 % ,血浆用量仅为 2 0～ 40 μl。正常健康人 (n =12 )血浆弹性蛋白酶含量 (3 7.5 0± 15 .5 6)μg/L。肠瘘合并感染患者 (n =6)为 (4 8.40± 2 7.82 )μg/L,明显高于正常人 (P <0 .0 1)。猪急性出血坏死性胰腺炎 (5 %牛磺胆酸钠 + 80 0 0～ 10 0 0 0u/ml胰蛋白酶 )诱导12h后为 (2 3 9.0 6± 180 .2 4) μg/L明显高于诱导前水平〔(3 6.15± 9.40 ) μg/L,P <0 .0 1〕。结论 该方法操作简便、快捷、灵敏度高、特异性好 。

α_1-抗胰蛋白酶活性测定方法及其影响因素的研究

目的研究用发色底物法测定α1-AT生物活性时，以正常人混合血浆为参考标准的血浆稀释度范围和测定的影响因素。方法采用酶标仪测定抗胰蛋白酶与过量的胰蛋白酶反应后，剩余的胰蛋白酶与BAPNA发色反应的OD值（405nm），观察时间和温度对反应的影响，优化正常人混合血浆（30人份）稀释度范围，建立并验证血浆标准曲线，同时观察几种物质对测定的影响。结果通过优化实验．血浆的稀释倍数在1／50～1／100之间有良好的线性；PEG4000、蔗糖、Tween80／TNBP（S／D）、辛酸钠等对活性测定无明显影响，而枸橼酸钠浓度〉0．125mol／L，α1-AT生物活性测定结果偏高约20％。结论以正常人混合血浆为参考标准品，用酶标仪测定α1-AT的生物活性，快速、准确，方法稳定可靠，α1-AT制备过程中常用的几种物质，除枸橼酸钠外，对其活性测定均无影响。

HPLC法测定人凝血酶原复合物中氨基酸含量

目的:建立用高效液相色谱法测定人凝血酶原复合物中氨基酸含量。方法:采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)为衍生剂,与氨基酸柱前衍生后,用Agilent 1200高效液相色谱仪,AccQ.Tag C18柱(waters 150 mm×3.9 mm,4μm),以水Eluent(醋酸盐-磷酸盐缓冲液)稀释液和乙腈进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温37℃,进样量10μL。结果:各氨基酸在32 min内测定完毕,回收率为99.3%～100.6%。RSD均小于1.5%。结论:本法分离度好,快速、简便,可作为产品的质量控制方法。

稀土铕有机框架材料的合成及荧光性能研究

本文主要运用水热合成法,以间硝基苯磺酰氯甘氨酸为第一配体,4,4’-联吡啶为第二配体,在温度为140℃、溶剂为水∶DMF=9∶6,通过控制溶液的pH为碱性条件时,合成间硝基苯磺酰甘氨酸铕有机配合物。并对所合成的配合物进行红外、荧光等表征,通过红外性质、荧光性质分析可以初步得出2,2’-联吡啶、4,4’-联吡啶作辅助配体时,间硝基苯磺酰甘氨酸与稀土铕形成配合物,所得产率较高,产品质量较好,且所得两种金属有机配合物荧光性质良好。

柱前衍生HPLC-MS/MS检测对虾中呈味肽

建立了一种基于高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测对虾中γ-Glu-Val-Gly含量的方法。通过水溶液提取,经10000分子质量纤维素半透膜超滤、2,4-二硝基氯苯(CDNB)衍生后,采用液质联用的方法对三肽物质进行定性、定量分析,定性分析选取470.1/395、470.1/367、470.1/184.2 3对特异性前体和离子碎片,定量分析选取470.1/72.2特异性前体和离子碎片。结果表明,此方法加标回收率在87.66%~112.74%之间;检测限(LOD)为0.3 ng/mL,定量限(LOQ)为0.9 ng/mL;日内和日间变异系数分别为7.5%和8.3%;线性范围为0.001~0.04 μg/mL,线性相关系数为0.9994。该方法操作简便、准确度高、成本低,满足水产品中γ-Glu-Val-Gly的定量分析需求,为水产品中风味物质含量的检测提供技术支持。