人琥珀酸受体1基因启动子荧光素酶报告基因的构建及活性鉴定

目的构建人琥珀酸受体1(SUCNR1)基因启动子荧光素酶报告基因重组表达载体并检测其活性。方法以糖尿病患者基因组DNA为模板进行聚合酶链反应(PCR),经分子克隆法将SUCNR1基因启动子序列插入p GL3-Basic质粒,用菌落PCR、测序方法筛选和鉴定重组质粒。实验组-1,-2,-3组为分别转入pRL-TK质粒和不同序列的重组质粒(SNP1、SNP2、SNP3)的293T细胞,测定各组的荧光素酶活性(重组质粒荧光素酶活性与海肾素荧光素酶活性的比值),间接检测不同启动子序列的差异表达。结果 PCR反应和菌落PCR反应获得产物长度均为1 065 bp;重构载体插入序列与数据库中标准序列匹配度为99.36%;对照组和实验组-1,-2,-3组的相对荧光素酶活性分别为2.33±0.55,19.34±3.51,37.56±4.73和23.67±2.52。各实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论成功构建人pGL3-Basic-SUCNR1荧光素酶表达载体,且糖尿病患者中带有不同SNP位点的SUCNR1基因启动子活性存在显著差异。

琥珀酸:对能量稳态调节具有多效功能的代谢物

琥珀酸是连接三羧酸循环和线粒体呼吸链的重要中间产物,同时也是某些肠道共生菌的重要代谢产物。线粒体和肠道菌来源的琥珀酸均可进入机体循环系统,导致该有机酸水平在生理和病理状态下产生波动。尽管长期以来琥珀酸被认为是一种与炎症相关的危险信号分子,但其还在能量稳态调节中显示多效作用。琥珀酸的多效性除与其来源有关外,还与其作用途径密切相关。本文从琥珀酸的来源、参与能量稳态调节的途径及其与代谢紊乱性疾病间的关系三个方面进行重点论述,以期为全面了解琥珀酸的功能及靶向琥珀酸途径进行代谢性疾病的防治提供重要信息。