琥珀酸脱氢酶基因B亚单位在散发性副神经节瘤中的突变

目的:探讨人线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)基因B亚单位(SDHB)基因突变与散发性副神经节瘤之间的关系。方法:取8例散发性副神经节瘤患者的肿瘤石蜡标本,提取基因组DNA,对SDHB基因的8个外显子进行PCR扩增和测序分析,与Genebank中人类SDHB基因序列及SNP数据库比对,寻找突变位点。结果:8例肿瘤组织标本中,在64个外显子中发现8例9个核苷酸改变。其中1例1个核苷酸改变为基因点突变,突变率为12.5%,为第2外显子第64位碱基C突变为T(c.136C>T),导致第2外显子编码的第22位密码子由精氨酸密码子突变为终止子(p.Arg46X)。另外8例8个为单核苷酸多态性改变。结论:散发性副神经节瘤患者中存在SDHB基因突变,可能与副神经节瘤的发生有关。

大鼠肝再生相关基因LRRP1的人同源基因是一种新型琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因

目的:应用分子生物学和生物信息学方法,寻找、克隆大鼠肝再生相关基因LRRP1的人的同源基因,阐明LRRP1 基因的结构和功能,为研究肝脏再生调节的分子生物学机制奠定基础. 方法:利用美国国立卫生研究院建立的核苷酸数据库(GenBank)以及相应的核苷酸序列同源性搜索分析软件(BLASTN),以大鼠的LRRP1的cDNA序列作为参照,对于人的同源性cDNA序列进行搜索分析,寻找人的LRRP1 的同源基因序列.利用蛋白质一级结构序列的势据库以及相应的同源蛋白序列的搜索分析,阐明人LRRP1蛋白质一级结构与已知蛋白序列的同源性,从而根据蛋白质一级结构的相似性,对于新克隆基因进行功能方面的预测分析.应用在线软件的分析,对于人LRRP1蛋白质一级结构序列进行分析预测,分析其氨基末端序列是否具有信号肽序列,以判断人LRRP1蛋白是否是一种可以分泌表达的蛋白;同样对人LRRP1蛋白质一级结构序列进行在线软件的分析,对于人LRRP1蛋白质分子结构中的潜在的糖基化位点以及其他类型的修饰位点进行预测. 结果:人的LRRP1的编码基因由480 nt组成,编码产物由159 aa组成.人LRRP1的蛋白质一级结构序列与人琥珀酸脱氢酶亚单位D、牛琥珀酸脱氢酶亚单位D高度同源,同源性分别为79%(126/159),78%(123/156).人LRRP1是一种分泌蛋白,在其分子结构中具有N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点和豆蔻脂化修饰位点. 结论:人LRRP1蛋白是一种新型的琥珀酸脱氢酶的亚单位编码基因.

变形链球菌乳酸脱氢酶与霍乱毒素B亚单位嵌合基因植物表达质粒的构建及转化烟草研究

目的构建含变链菌乳酸脱氢酶(LDH)和霍乱毒素B亚单位(CTB)嵌合基因的植物表达质粒并以根癌农杆菌介导法转化烟草,获得转基因烟草。方法应用PCR技术扩增嵌合基因,并与植物中间表达载体p2355双酶切连接,构建植物表达载体p2355-ldh-ctxB,电击法导入根癌农杆菌EHA105,根癌农杆菌叶盘转化法转化烟草,对抗性植株进行PCR、GUS组织染色、RT-PCR检测。结果载体p2355-ldh-ctxB经双酶切及PCR证实均能得到与预期相符的片段,农杆菌介导转化烟草得到的抗性植株GUS组织染色呈阳性,PCR扩增nptⅡ基因和目的基因部分片段,均获得了与预计相符的片段,部分样品RT-PCR能扩增出与预期一致的片段。结论成功构建植物表达质粒p2355-ldh-ctxB,经根癌农杆菌介导转化烟草后获得了转基因烟草植株。

变异链球菌乳酸脱氢酶与霍乱毒素B亚单位嵌合表达质粒的构建和表达

目的:构建含变异链球菌乳酸脱氢酶(LDH)和霍乱毒素B亚单位(CTB)嵌合原核表达质粒,并诱导表达融合蛋白。方法:应用PCR技术扩增LDH编码基因ldh和CT编码基因ctxB,定向克隆至原核表达质粒pET32a(+)上,通过限制性内酶切、PCR和序列测定分析鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达融合蛋白。结果:PCR扩增得到了ldh和ctxB;构建的质粒pET-LDH/CTB经KpnⅠ、XhoⅠ双酶切和目的基因PCR检测,均得到1.4 kb大小的片段,与预计目的基因片段大小相同;质粒pET-LDH/CTB中插入的ldh序列与GeneBank中ldh比较同源性为98%,ctxB的同源性达99%,插入的相位正确;经IPTG诱导表达了约70×103的蛋白。结论:成功构建了变异链球菌LDH和CTB嵌合表达质粒pET-LDH/CTB,并正确表达融合蛋白。

乳酸脱氢酶A亚单位基因变异与临床

乳酸脱氢酶Ａ亚单位基因变异与临床第三军医大学西南医院刘泽军一、ＬＤＨ－Ａ的基因结构［１，２］人ＬＤＨ－Ａ功能基因从转录起始信号ＡＴＧ开始到ｐｏｌｙ（Ａ）结束，约１２ｋｂ长，位于１１号染色体上，其蛋白质编码序列被６个内含子隔开，形成７个外显子，长度分别...

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位缺陷导致Leigh综合征

Leigh综合征是由于线粒体呼吸链能量代谢障碍所导致的遗传性疾病,丙酮酸脱氢酶E1浕亚单位(pyruvate dehydrogenase complex E1 alpha subunit,PDHA1)缺陷是导致Leigh综合征的常见原因之一。该研究通过PDHA1基因分析首次确诊了1例中国患者。该患儿1岁后运动发育落后,无力,肌张力低下,肌腱反射消失,发热、感冒时间歇性加重,智力发育正常。肌电图检查、腓肠肌病理活检结果提示神经性损害。3岁时脑MRI扫描未见异常,5岁时脑MRI呈现双侧苍白球对称性损害,符合Leigh综合征表现。经基因分析证实患者及其母亲PDHA1基因外显子3存在C214T突变,导致丙酮酸脱氢酶复合物活性下降。经过维生素B1、辅酶Q10、左旋肉碱及低碳水化合物饮食治疗后,患儿运动能力显著改善,现在8岁,正常就学。PDHA1缺陷为X连锁遗传性疾病,表型复杂,临床诊断困难,该患儿以无力为主要表现,经基因诊断确诊。

Sdha基因敲低对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的探讨琥珀酸脱氢酶复合物亚单位A(SDHA)对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法用慢病毒载体介导的sh RNA敲低BNL CL.2细胞中sdha基因的表达。流式细胞仪检测慢病毒的感染效率;实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹法分别检测sdha m RNA和SDHA蛋白表达水平;细胞计数法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果无相关sh RNA对照组和sdha sh RNA组慢病毒的感染效率均>80%。与无相关sh RNA对照组相比,感染sdha sh RNA慢病毒载体的BNL CL.2细胞sdha m RNA水平降低20倍左右(P<0.01),蛋白表达水平降低10倍左右(P<0.01);细胞增殖速度减慢,为无相关sh RNA对照组的70%左右(P<0.05);细胞周期发生改变,G0/G1期细胞百分率是无相关sh RNA对照组的1.17倍(P<0.01),G2/M期细胞百分率为1.37倍(P<0.01),S期细胞百分率为73.8%(P<0.01);但细胞凋亡率无明显差异。结论降低SDHA表达对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用与细胞周期阻滞相关,与细胞凋亡无明显关系。

线粒体NDUFB6基因单核苷酸多态与2型糖尿病关系的研究

目的:通过对线粒体基因NDUFB6[NADH dehydrogenase(ubiquinone)1 beta subcomplex]进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的检测,对高频率SNP进行基因分型,研究NDUFB6基因与2型糖尿病的相关性。方法:使用PCR+测序方法,以15个2型糖尿病患者和9个正常人为样本,对NDUFB6基因的启动子、外显子以及临近的内含子进行测序以确定该基因的SNP;对高频率的SNP,仍使用PCR+测序方法分别在192个2型糖尿病患者与正常人中进行基因分型。结果:总共发现NDUFB6基因的6个SNP,其中3个SNP出现频率较高。NDUFB6基因启动子的1个SNP(-1211C>T)在2型糖尿病人群与正常人群有显著差异(P<0.05)。结论:NDUFB6基因启动子的-1211C>T多态性可能与2型糖尿病的发病有关。

PDHA1基因新发变异致丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺陷女性患儿遗传学分析

目的对1例临床拟诊丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺乏症(PHD)患儿及家系成员进行临床及基因突变分析,为早期诊断及遗传咨询提供依据。方法对就诊于柳州市妇幼保健院的1例PHD患儿的临床特点及基因检测进行回顾分析。以“丙酮酸脱氢酶复合物”“丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症”“PDHA1基因”“Pyruvate dehydrogenase complex”“Pyruvate dehydrogenase complex deficiency”“PDHA1”为关键词查阅在线人类孟德尔遗传数据库、PubMed数据库、中国知网及万方数据库从建库至2020年6月相关文献,对中国人PHD病例进行汇总分析。结果先证者女性,以运动发育落后为主要临床表现,实验室检查血乳酸5.62 mmol/L(参考值0.5~2.2 mmol/L),丙酮酸430μmol/L(参考值30~100μmol/L),血氨66μmol/L(参考值0~54μmol/L),头颅MRI检查提示双侧基底节区异常信号,伴脑萎缩、脑室增宽,符合Leigh综合征影像学改变。患儿PDHA1基因检出未报道变异位点c.508C>T(p.R170X),变异位点导致蛋白质合成提前终止,经致病性预测分析软件及ACMG变异分类为1类致病变异,父母双方未检测到相应的变异位点。共检索到中国人PHD病例15例,相关文献18篇,包括本次报道1例共16例,其中男性14例,女性2例。多数患者以神经肌肉系统疾病为首发症状,实验室检查提示乳酸、丙酮酸增高,影像学检查可见基底节区信号改变。中国人PDHA1基因检测共发现14种变异类型,以R378C和R126C突变为主。结论通过临床表现结合PDHA1基因诊断确诊1例丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位缺乏症女性患儿,新变异位点的发现丰富了PDHA1基因突变谱。

中国朝鲜族2型糖尿病患者颈动脉硬化斑块与线粒体ND4基因12026A→G突变的关系及其影响因素分析

目的探讨中国朝鲜族2型糖尿病患者(T2DM)颈动脉硬化斑块(CAP)与线粒体ND4基因12026A→G突变的关系及其影响因素。方法回顾性选取2018年1月至2022年2月在延边大学附属医院内分泌科住院的744例朝鲜族T2DM患者作为研究对象,采用多态链式反应(PCR)技术对其进行线粒体DNA呼吸链复合物NADH脱氢酶第四亚单位(ND4)区域基因突变筛查。彩色多普勒超声(CDUS)观察患者CAP形成情况,筛选出CAP患者335例,无颈动脉硬化斑块(NCAP)患者409例。记录分析全部T2DM患者空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、C反应蛋白(CRP)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)。结果CAP与NCAP两组线粒体DNA 12026 A→G突变率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CAP组病程长于NCAP组,吸烟率、饮酒率、FBG、HbA1c、UA均高于NCAP组,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析显示,吸烟(OR=0.49,95%CI:0.20~0.79)、FBG(OR=8.79,95%CI:2.45~38.66)和HbA1c(OR=9.01,95%CI:3.10~43.71)是CAP发生的独立危险因素(P<0.05)。结论线粒体DNA 12026 A→G突变与中国朝鲜族T2DM患者CAP形成有关。吸烟、FBG和HbA1c是CAP发生的独立危险因素。

黄瓜低霜霉威残留性相关基因SDH克隆及表达

通过Solexa技术和比较基因组学方法鉴定霜霉威胁迫下黄瓜果实差异表达基因,筛选黄瓜低霜霉威残留性相关基因SDH。研究利用PCR克隆获得SDH基因全长,命名为Cs SDH。构建亚细胞定位表达载体,利用农杆菌浸润法注射烟草叶片后激光共聚焦显微镜下观察;分别用荧光定量RT-PCR方法和酶联免疫法研究高、低农残品系D9320和D0351中Cs SDH基因在农药霜霉威处理后,不同时间点、不同组织部位时空表达特征和琥珀酸脱氢酶活性。结果表明,Cs SDH基因在烟草叶片细胞中被定位在细胞膜上。黄瓜低农残品种D0351中,Cs SDH基因在果实受霜霉威胁迫后反应迅速,主要在处理前期响应表达强烈,琥珀酸脱氢酶活性显著增加,且该基因表达量显著高于其在高农残品种D9320中表达量。Cs SDH果、叶中表达量较茎中高,且各组织部位表达量高低顺序稳定,为叶>果>茎。黄瓜高农残品种D9320中,Cs SDH基因表达量在0.5、1、3、12 h呈现上调表达,6、9 h基因表达量差异不显著,48 h出现上调表达高峰。说明克隆得到的Cs SDH基因属农药处理前期响应基因,且该基因可能在降低黄瓜农药残留过程中发挥重要作用。试验通过研究黄瓜琥珀酸脱氢酶基因(SDH)在霜霉威胁迫下表达情况,为挖掘黄瓜低农药残留性功能基因以及探明其作用分子机制奠定基础。

散发性嗜铬细胞瘤与SDHD基因突变关系研究

目的:了解重庆地区散发性嗜铬细胞瘤(Pheochromocytoma,PHEO)与琥珀酸脱氢酶复合物DⅡ单位(Succtnate dehydro-genaes complex,subunitD,SDHD)基因第1、2外显子突变的关系。方法:采用多聚酶联反应结合单链构像多态性分析(Polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)对32例病理确诊的散发性PHEO患者(其中21例为肾上PHEO,11例为肾上腺外PHEO即副神经节瘤)和80例健康体检者对SDHD基因1、2外显子进行突变分析。结果:32例嗜铬细胞瘤患者中未发现SDHD基因第1、2外显子的突变。结论:在本研究中未发现重庆地区散发PHEO存在SDHD基因第1、2外显子的突变。

一氧化氮合酶在大鼠杏仁基外侧核传入神经元内的分布

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)在大鼠杏仁基外侧核(BLA)传入投射神经元中的分布。方法:采用霍乱毒素B亚单位(CTb)逆行追踪和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学双重染色相结合的方法。结果:双标神经元(NADPH-d/CTb)主要分布在孤束核、蓝斑、臂旁内侧核、中缝背核、中央灰质背侧部、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、下丘脑室周核、下丘脑腹内侧核以及杏仁内侧核等神经核团。结论:NOS在大鼠BLA传入投射神经元中主要分布于上述核团,并且提示NO参与BLA的功能调节。

NOS在大鼠杏仁皮质核传入神经元内的分布

目的研究一氧化氮合酶(NOS)在杏仁皮质核传入投射神经元中的分布。方法采用霍乱毒素B亚单位(CTb)逆行追踪和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学双重染色相结合的方法。结果双标神经元(NADPH/CTb)主要分布在孤束核(Sol)、蓝斑(LC)、臂旁内侧核(MPB)、中缝背核(DR)、中央灰质外侧部(CGL)、中央灰质背侧部(CGD)、丘脑室旁核(PV)、下丘脑室旁核(Pa)、下丘脑室周核(Pe)、下丘脑腹内侧(VMH)核以及杏仁内侧核(ME)等神经核团。结论NOS在大鼠杏仁皮质核传入投射神经元中主要分布于上述核团,并且提示NO参与杏仁皮质核的功能调节。

胃肠道间质瘤的诊断进展

胃肠道间质瘤(GIST)作为最常见的胃肠道间叶源性肿瘤,经常规方法及病理手段可诊断大部分病例,而大部分对酪氨酸激酶抑制剂(如伊马替尼)敏感,部分病例对伊马替尼不敏感,致病机制至今仍不明确。基本的诊断不能满足目前治疗的需要,通过基因突变及表达情况检测可进一步明确诊断,在判定GIST对小分子酪氨酸激酶抑制剂苯磺酸伊马替尼的敏感性方面有指导意义,从而指导靶向治疗。

妊娠合并双侧嗜铬细胞瘤1例报告

嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PCC)是一种神经内分泌性肿瘤,可作为散发病例或遗传性常染色体显性综合征发生,其中遗传性常染色体显性综合征约占所有病例的30%[1-2]。妊娠合并嗜铬细胞瘤(PCC in pregnancy,PIP)少见,尤其是妊娠合并双侧嗜铬细胞瘤(bilateral PCC in pregnancy,BPIP)更为罕见,该类疾病因临床表现与妊娠期高血压疾病(pregnancy-induced hypertension,PIH)相似,因此常常会导致误诊。到目前为止报道的BPIP仅有30例左右,其中未经治疗的孕妇和胎儿的死亡率为40%~50%[2-4]。

线粒体DNA3243、3316点突变与2型糖尿病

目的 研究2型糖尿病患者中线粒体t RNAL eu( UUR)基因32 4 3A/ G突变和NADH脱氢酶亚单位1基因(ND1)基因3316 G/ A突变的发生频率及其与2型糖尿病的相关性。方法 应用聚合酶链反应及限制性片段长度多态性技术检测2 2 5例中国云南2型糖尿病患者和195名无糖尿病家族史的健康对照者有无32 4 3A/ G突变和3316 G/ A突变,并经DNA直接测序确证。结果 2型糖尿病患者中3316 G/ A突变者5例(2 .2 2 % ) ,195例对照者中突变者2例(1.0 3% ) ,突变发生率在两组间差异无统计学意义(P=0 .4 5 76 ) ;两组中无线粒体32 4 3A/ G突变。结论 线粒体t RNALeu( UUR) 基因32 4 3A/ G突变在中国云南2型糖尿病人群中发生频率低,可能不是云南人群中2型糖尿病的常见病因。线粒体ND1基因3316 G/ A突变可能仅为人群中线粒体基因组的正常多态。其他的遗传、环境及子宫内因素需要进一步研究。