琥珀酸脱氢酶B和丙酮酸脱氢酶激酶1在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨琥珀酸脱氢酶(SDH)B和丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)1在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化法检测78例鼻咽癌组织及35例鼻咽黏膜慢性炎症组织中SDHB和PDK1的表达情况,运用x2检验分析SDHB和PDK1表达与鼻咽癌患者临床病理因素的关系,运用Kaplan-Meter法分析其与预后的关系。结果:SDHB和PDK1在鼻咽癌组织中阳性表达率分别为39.7%(31/78)和53.8%(42/78),而在鼻咽黏膜慢性炎症组织中为62.9%(22/35)和20.0%(7/35),SDHB和PDK1表达均与鼻咽癌复发、颈部淋巴结转移相关(P<0.05),与患者性别、年龄等无显著相关(P>0.05)。K-M生存曲线提示SDHB阳性表达和PDK1阴性表达者的生存率分别高于SDHB阴性表达和PDK1阳性表达者,多因素Cox回归分析显示,T分级、临床分期、复发是影响鼻咽癌患者预后的独立因素,SDHB和PDK1表达不能作为影响鼻咽癌预后的独立因素。结论:SDHB和PDK1表达在鼻咽癌的发展、淋巴结转移、复发中起着重要作用,并可能对预后有影响,但SDHB和PDK1表达不是影响预后的独立因素。

琥珀酸脱氢酶B亚基对卵巢癌细胞线粒体DNA拷贝数影响的研究

目的:探讨琥珀酸脱氢酶B亚基(SDHB)对卵巢癌线粒体DNA(mtDNA)相对拷贝数的影响。方法:Real-time PCR法检测人卵巢良性肿瘤组织、卵巢癌组织中SDHB mRNA水平,检测mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和线粒体转录因子A(TFAM)水平。siRNA干扰SKOV3和A2780中SDHB表达,real-time PCR检测干扰前后mtND2/HBB、TFAM和DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs,也称作PRKDC)水平;CCK-8法检测癌细胞对顺铂的化疗耐药性。Western blot法检测p-p38和DNA损伤标记蛋白γ-H2AX蛋白水平。结果:人卵巢癌组织中SDHB表达低于卵巢良性肿瘤组织,mtND2/HBB和TFAM水平高于卵巢良性肿瘤组织。siRNA干扰SKOV3和A2780中SDHB表达后,mtND2/HBB和PRKDC显著升高,TFAM水平升高不显著。SDHB低表达显著上调p-p38蛋白水平,显著降低γ-H2AX蛋白水平。结论:SDHB在人卵巢癌组织中低表达,SDHB低表达显著增加卵巢癌细胞mtDNA相对拷贝数,提高卵巢癌细胞化疗耐药性,其机制可能与SDHB通过p38 MAPK通路影响DNA损伤修复相关。

琥珀酸脱氢酶B和核增殖指数MIB-1在嗜铬细胞瘤／副神经节瘤中表达的意义

目的 探讨嗜铬细胞瘤/副神经节瘤（PHEO/PGL）中琥珀酸脱氢酶（SDH）B突变和核增殖指数MIB-1表达情况，以及二者作为预测恶性嗜铬细胞瘤指标的意义。方法 回顾性分析2008年8月至2016年4月收治的93例PHEO/PGL患者的临床资料，男57例，女36例。年龄34岁（8-73）岁。有高血压病史者79例，查体发现肾上腺肿瘤14例。PHEO 68例，PGL 25例。有典型高儿茶酚胺分泌症状者66例，功能静止性PHEO/PGL 27例。良性PHEO/PGL 77例，恶性PHEO/PGL 16例。肿瘤位于左侧39例，右侧32例，多发22例。肿瘤直径（6.8 ±2.7）cm。术前24 h尿儿茶酚胺测定：肾上腺素（42.6±5.1）μg/24 h，去甲肾上腺素（167.5±13.5）μg/24 h，多巴胺（246.4±71.2）μg/24 h。选取6例泌尿系统非肿瘤、非遗传性疾病患者作为对照组。所有患者留取外周血分别行SDHB、SDHAF2、SDHC、SDHD、VHL及RET基因突变检测。采用免疫组化染色法检测93例PHEO/PGL组织标本中SDHB、MIB-1、EPAS1、血管内皮生长因子-1受体（VEGF-1R）和嗜铬粒蛋白A（CgA）的表达情况。阳性颗粒状细胞质染色〉50%为强阳性（＋＋＋），11%-50%为中度阳性（＋＋），1%-10%为弱阳性（＋），〈1%为阴性（－）。结果 93例PHEO/PGL患者中，SDHB、SDHAF2、SDHC、SDHD、VHL及RET基因突变27例（29.5%），其中SDHB基因突变9例，RET原癌基因突变8例，VHL基因突变3例。免疫组化染色检测示，9例SDHB基因突变者组织标本中MIB-1阳性表达7例。对照组行基因检测及MIB-1、EPAS1、CgA和VEGF-1R免疫组化染色检测均为阴性。EPAS1在PHEO/PGL中为中度阳性表达，在恶性PHEO/PGL中高表达。9例SDHB基因突变者中，7例EPAS1呈阳性染色，EPAS1阳性表达与CgA、MIB-1及VEGF-1R密切相关。结论 SDHB基因突变者常表现为PGL，9.8%的PGL与SDHB基因突变相关，其恶性危险性增加。SDHB突变者的组织标本中MIB-1表达增高，EPAS1、VEGF-1R阳性表达，与恶性PHEO/PGL侵袭和转移相关。

琥珀酸脱氢酶基因B亚单位在散发性副神经节瘤中的突变

目的:探讨人线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)基因B亚单位(SDHB)基因突变与散发性副神经节瘤之间的关系。方法:取8例散发性副神经节瘤患者的肿瘤石蜡标本,提取基因组DNA,对SDHB基因的8个外显子进行PCR扩增和测序分析,与Genebank中人类SDHB基因序列及SNP数据库比对,寻找突变位点。结果:8例肿瘤组织标本中,在64个外显子中发现8例9个核苷酸改变。其中1例1个核苷酸改变为基因点突变,突变率为12.5%,为第2外显子第64位碱基C突变为T(c.136C>T),导致第2外显子编码的第22位密码子由精氨酸密码子突变为终止子(p.Arg46X)。另外8例8个为单核苷酸多态性改变。结论:散发性副神经节瘤患者中存在SDHB基因突变,可能与副神经节瘤的发生有关。

膀胱副神经节瘤组织中SDHB、EPAS1及Ki-67表达的研究

目的:探讨膀胱副神经节瘤临床病理特征以及琥珀酸脱氢酶B(succinate dehyrogenase B,SDHB)、内皮PAS区域蛋白1(EPAS1)及Ki-67在膀胱副神经节瘤中的表达情况,以及三者作为预测恶性副神经节瘤指标的意义。方法:回顾性分析本院收治的43例膀胱副神经节瘤患者的临床病理资料,对43例标本行SDHB、EPAS1、CgA、Ki-67免疫组化检测,并分析其作为预测恶性副神经节瘤指标的意义。结果:43例中,男24例,女19例;年龄26~81岁,中位年龄68岁;随访时间2~84个月,中位随访时间51.3个月;3例死亡,9例术后转移,4例术后反复复发,无转移;其余无复发及转移。良性30例,镜下表现为肿瘤细胞呈经典的巢状排列,核分裂及坏死罕见,瘤细胞巢周围有支持细胞包绕。SDHB阴性(-)4例,EPAS1强阳性(+++)14例,CgA强阳性(+++)18例,2例Ki-67≥3%。恶性13例,镜下表现为肿瘤细胞呈弥漫浸润性生长或大巢状分布,核分裂多见,可见肿瘤性坏死及脉管内瘤栓。SDHB阴性(-)8例,EPAS1强阳性(+++)9例;CgA强阳性(+++)10例;11例Ki-67≥3%。SDHB阴性(-)肿瘤中66.7%为恶性,SDHB阳性(+)的肿瘤中16.1%为恶性,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。SDHB阴性(-)肿瘤中EPAS1、CgA表达强度以及Ki-67≥3%的比例明显高于SDHB阳性(+)肿瘤。恶性膀胱副神经节瘤中EPAS1、CgA、Ki-67阳性表达率明显高于良性膀胱副神经节瘤。结论:恶性膀胱副神经节瘤组织中SDHB免疫组化阴性率为66.7%,SDHB阴性的膀胱副神经节瘤组织中EPAS1过表达,EPAS1阳性表达强度与CgA及Ki-67高表达呈正相关。SDHB、EPAS1、Ki-67是预测恶性膀胱副神经节瘤的生物学指标。

多主棒孢SdhB-H278R突变位点AS-real-time PCR定量检测体系的建立

【目的】建立一种快速、高效、定量检测黄瓜多主棒孢(Corynespora cassiicola)琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB)H278R突变的实时荧光定量PCR(AS-real-time PCR)检测方法,并进行效果验证。【方法】从北京市大兴区采集、分离纯化病原菌,获得24株多主棒孢的单孢菌株,采用菌丝生长速率法测定其对啶酰菌胺的EC50,随机选取4株敏感(S)和8株抗性(R)菌株测其菌丝生长速率、产孢量和致病性。采用引物对Cc-SdhB-F/R测定多主棒孢SdhB基因序列,检测SdhB的碱基变化。基于多主棒孢SdhB的相同核酸序列和SNP位点设计内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14,建立并优化AS-real-time PCR定量检测体系,并对引物的特异性、熔解曲线和灵敏度进行评价。利用该体系分别检测含有H278R不同突变比例的DNA和孢子悬浮液。【结果】测定的24个菌株中,敏感菌株占66.7%,EC50值为0.057—0.563μg·mL^(-1);抗性菌株占33.3%,EC50值为5.395—11.710μg·mL^(-1)。抗性和敏感菌株仅在菌丝生长速率方面存在显著性差异,且菌丝生长速率与EC50之间存在显著负相关。在产孢量和致病性方面不存在显著性差异。测序分析发现抗性菌株均携带SdhB-H278R突变。本研究设计的引物B-H278R-2F和B-H278R-2F2R14特异性强,仅对多主棒孢SdhB-H278R突变菌株的DNA有扩增条带,对其余供试菌株均无条带扩增。普通AS-PCR检测的灵敏度为91 pg·μL^(-1),而AS-real-time PCR的灵敏度可达9.1 pg·μL^(-1),灵敏度为普通AS-PCR的10倍。以基因组DNA为标准品,构建的AS-real-time PCR标准曲线ΔCT值与相对模板浓度的对数有良好的线性关系,相关系数为0.9857,扩增效率为92.59%。熔解曲线吸收峰单一,内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14分别在87.81℃和91.62℃处出现单一特异性峰。用DNA和孢子悬浮液对标准曲线进行验证,结果表明随着相对模板浓度逐渐降低,该检测体系的准确性逐渐升高且检测下限为5%,同时预期值与试验值呈线性相关(R^2=0.9998和R^2=0.9922)。【结论】建立了一种高效、定量、快速的AS-real-time PCR检测体系用于SdhB-H278R突变位点的检测,可为杀菌剂的抗性治理提供理论依据。

抑制线粒体复合体Ⅱ诱导线粒体自噬影响细胞增殖的研究

线粒体复合体Ⅱ,也被称为琥珀酸脱氢酶,参与线粒体呼吸作用及代谢重编程的调控过程.复合体Ⅱ由4个亚基构成,其突变与肿瘤的发生密切相关.本文探讨复合体Ⅱ与线粒体自噬调控及细胞增殖之间的关系.实验采用复合体Ⅱ的特异性抑制剂TTFA或敲除复合体Ⅱ的B亚基(SDHB)使其功能缺失.结果发现,复合体Ⅱ功能的缺失显著引起线粒体形态的片段化进而发生线粒体自噬,导致线粒体蛋白水平减少,抑制ATP生成;由于线粒体功能受到抑制,细胞葡萄糖消耗及乳酸产生水平增加,并显著抑制细胞的细胞的增殖.综上所述,复合体Ⅱ功能缺失可能通过调控线粒体自噬而影响细胞增殖,从而在肿瘤发生中起重要作用.

胃肠道间质瘤的诊断进展

胃肠道间质瘤(GIST)作为最常见的胃肠道间叶源性肿瘤,经常规方法及病理手段可诊断大部分病例,而大部分对酪氨酸激酶抑制剂(如伊马替尼)敏感,部分病例对伊马替尼不敏感,致病机制至今仍不明确。基本的诊断不能满足目前治疗的需要,通过基因突变及表达情况检测可进一步明确诊断,在判定GIST对小分子酪氨酸激酶抑制剂苯磺酸伊马替尼的敏感性方面有指导意义,从而指导靶向治疗。

妊娠合并双侧嗜铬细胞瘤1例报告

嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PCC)是一种神经内分泌性肿瘤,可作为散发病例或遗传性常染色体显性综合征发生,其中遗传性常染色体显性综合征约占所有病例的30%[1-2]。妊娠合并嗜铬细胞瘤(PCC in pregnancy,PIP)少见,尤其是妊娠合并双侧嗜铬细胞瘤(bilateral PCC in pregnancy,BPIP)更为罕见,该类疾病因临床表现与妊娠期高血压疾病(pregnancy-induced hypertension,PIH)相似,因此常常会导致误诊。到目前为止报道的BPIP仅有30例左右,其中未经治疗的孕妇和胎儿的死亡率为40%~50%[2-4]。

SDHB、EPAS1和MIB-1在Zuckerkandl体副神经节瘤中的表达

目的探讨Zuckerkandl体副神经节瘤中琥珀酸脱氢酶B（SDHB）突变和内皮PAS区域蛋白1（EPAS1）的过度表达与其恶性浸润和转移的关系。方法选取北京协和医院2008年3月至2011年7月诊断的16例Zuckerkandl体副神经节瘤患者的肿瘤组织标本做成组织芯片，行SDHB、EPAS1、嗜铬素A（CgA）和核增殖抗原MIB-1的免疫组织化学染色。将SDHB、EPAS1和CgA阳性确定为颗粒状染色，〉50％为强阳性（＋＋＋），1％-10％为弱阳性（＋）。MIB-1核增殖指数≥3％预示分化较差。结果7份SDHB阳性的肿瘤标本中，EPAS1均阳性；9份SDHB阴性肿瘤标本中，6份EPAS1阳性，SDHB阳性标本中EPAS1阳性率高于SDHB阴性标本（P〈0．05）。12份良性Zuckerkandl体副神经节瘤中，有9份EPAS1阳性，11份CgA阳性，12份MIB．1均〈1％；而在4份恶性Zuckerkandl体副神经节瘤中，4份EPAS1均为强阳性，4份CgA均为强阳性，4份MIB-1均〉3％，恶性Zuckerkandl体副神经节瘤中EPAS1、CgA与MIB-1阳性表达率高于良性Zuckerkandl体副神经节瘤（均P〈0．05）。结论SDHB突变引起Zuckerkandl体副神经节瘤EPAS1的过度表达，EPAS1阳性表达与CgA、MIB-1呈正相关，这与恶性Zuckerkandl体副神经节瘤侵袭和转移有关。