表面活性剂对琼式不动杆菌LH-1-1降解溴氰菊酯的影响

旨在探究表面活性剂对菌株降解溴氰菊酯(Deltamethrin,DM)的影响。以前期筛选到具备DM较高降解能力的Acinetobacter junii LH-1-1为目标菌株,通过荧光光谱法测定了3种不同类型表面活性剂(CTAB、AES和Tween-20)的临界胶束浓度(Critical Micelle Concentration,CMC),并探究不同表面活性剂各CMC对A.junii LH-1-1生长、DM增溶作用和菌株降解DM的影响。结果显示,测得CTAB、AES、Tween-20的CMC分别为0.793 mmol/L、0.547 mmol/L和0.031 mmol/L;CTAB对菌株的生长无明显影响,AES对菌株生长有抑制作用,Tween-20对菌株的生长有一定的促进作用;CTAB、AES和Tween-20对DM均具有较强的增溶作用;且CTAB可显著提高A.junii LH-1-1对DM的降解率,当其含量为2 CMC,72 h时DM降解率达到98.20%,较未添加表面活性剂的对照组(阳性)降解率提高了24.31%。阳离子表面活性剂CTAB可显著提高A.junii LH-1-1对DM的降解。

一株同时产OXA-23型碳青霉烯水解酶和PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌

目的 分析多重耐药鲍曼不动杆菌对 β 内酰胺耐药的原因及其耐药基因的转移方式。 方法 用等电聚焦电泳试验和三维试验分析多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株所产 β 内酰胺酶 ,并进行初步分类 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增和产物测序方法确认 β 内酰胺酶基因 ,用PCR扩增整合子全可变区和质粒接合实验来判定其耐药基因的转移方式。结果 该临床菌株产超广谱 β 内酰胺酶 ,经分子生物学方法证实有blaPER 1基因 ,同时还有blaOXA 2 3 基因和aacA4基因。结论 发现一株产OXA 2 3型碳青霉烯酶和可转移的PER 1型超广谱 β 内酰胺酶的鲍曼不动杆菌 ,blaPER

鲍曼不动杆菌启动子突变TEM-1型β-内酰胺酶基因研究

目的 分析浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)耐药基因序列，并确定其亚型。方法 采用微量稀释法对在2001年1月至2002年12月间自临床分离的39株鲍曼不动杆菌进行药敏试验、三维试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEM、SHV、OXA、CTX-M、PER及VEB型BLA耐药基因，并对7株TEM基因型阳性的分离株(编号分别为HZ08、HZ09、HZ17、HZ24、HZ35、HZ37、HZ40)进行耐药基因序列分析。结果 39株鲍曼不动杆菌TEM型BLA耐药基因PCR扩增均呈阳性，其余基因PCR扩增均为阴性。7株TEM基因测序结果表明他们的基因片段全长均含1022个核苷酸，经GenBank网上同源性比较，发现这些序列与广谱酶TEM-1(GenBank注册号：AF188200)的编码区域序列相同，但在启动子区域-47位点处均有1个核苷酸发生突变(G→T)。其中HZ40株的TEM-1序列已在GenBank核酸数据库中成功注册(GenBank注册号：AY263331)。HZ08、HZ09、HZ24、HZ35、HZ37和HZ40株ESBLs均阳性，HZ17株ESBLs阴性。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌携带伴启动子区域核苷酸突变的TEM-1亚型BLA耐药基因，此基因可以导致ESBLs表型阳性。

TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株耐药机制研究

目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和car O基因,选取4株bla_(TEM-1)阳性菌株(A3、A5、1327、C1),对其扩增产物测序,BLAST软件分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术检测2组菌株bla_(TEM-1)和car O基因m RNA转录情况。结果敏感组临床株对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。敏感组未检出bla_(TEM-1),非敏感组中16株临床株扩增出bla_(TEM-1);24株临床菌株全部扩增出car O基因。测序显示4株临床株bla_(TEM-1)基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。BlaTEM-1基因阳性菌株m RNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关(rs=0.551,P=0.027);car O基因m RNA相对表达在敏感组和非敏感组中无差异。结论临床分离鲍曼不动杆菌受试菌株耐药严重,其对舒巴坦的耐药机制与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而bla_(TEM-1)基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。

产新德里金属β-内酰胺酶-1醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体碳青霉烯酶、外膜孔蛋白和外排泵相关基因检测

目的研究临床分离的产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)醋酸钙-鲍曼不动杆菌(Acb)复合体耐碳青霉烯类药物的机制。方法通过VITEK-2 compact全自动微生物分析仪鉴定、42℃生长实验、聚合酶链反应(PCR)检测OXA-51-like基因,rpoB基因序列测定对收集的耐碳青霉烯类Acb复合体进行菌种鉴定。利用PCR筛查是否携带NDM基因,通过测序确定NDM型别并进一步检测其他碳青霉烯酶相关基因、外膜孔蛋白基因和外排泵基因。利用DiversiLab细菌DNA指纹图谱分析系统对产NDM-1的Acb复合体进行基因分型。结果共筛选出10株产NDM-1的Acb复合体,其中5株为Pittii不动杆菌,3株为Nosocomialis不动杆菌,2株为鲍曼不动杆菌。在5株Pittii不动杆菌中,2株检出OXA-58-like基因,5株检出外膜孔蛋白oprD基因和外排泵adeI,adeK基因,4株检出adeJ基因。3株Nosocomialis不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO和oprD基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因。2株鲍曼不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因,1株检出外膜孔蛋白oprD基因,1株检出OXA-23-like基因。鲍曼不动杆菌、Pittii不动杆菌和Nosocomialis不动杆菌基因分型结果均分为两型。结论在福建省Pittii不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-58-like基因,在鲍曼不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-23-like基因。本地分离的Nosocomialis不动杆菌与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药可能与AdeIJK外排泵及NDM-1酶作用有关;Pittii不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药则可能是由外膜孔蛋白CarO缺失、AdeIJK外排泵及NDM-1酶共同作用的结果。

气管插管下呼吸道鲍曼不动杆菌感染患者支气管肺泡灌洗液sTREM-1水平检测及临床意义

目的分析气管插管下呼吸道鲍曼不动杆菌感染患者支气管肺泡灌洗液(BALF)可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)水平检测及临床意义。方法收集100例接受气管插管的患者,根据标本培养结果分为感染组、定植组和对照组,分析3组血清IL-6、PCT、sTREM-1及BALF中sTREM-1水平的差异,并采用ROC曲线分析上述指标对区分感染和定植的特异性和敏感性。结果感染组血清PCT、sTREM-1及BALF中sTREM-1水平均高于对照组和定值组(均P<0.05);定植组血清PCT、IL-6、sTREM-1及BALF中sTREM-1水平与对照组差异均无统计学意义(均P>0.05);感染组血清IL-6高于对照组(P<0.05)。血清IL-6、PCT、sTREM-1在鉴别鲍曼不动杆菌感染的AUC分别为0.72、0.67、0.72,特异性和敏感性分别为0.85/0.60、0.80/0.55、0.60/0.75;而BALF中sTREM-1鉴别鲍曼不动杆菌感染的AUC为0.91,特异性和敏感性为0.90、0.94,其特异性和敏感性更高。结论BALF中sTREM-1水平在气管插管下呼吸道鲍曼不动杆菌感染患者的评估中具有较高的价值。

鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶基因的研究

目的调查鲍曼不动杆菌耐药特点及β-内酰胺酶基因类型.方法用Phoenix-100系统对细菌进行鉴定和药敏试验.用琼脂稀释法测定头孢噻肟等6种抗生素的最低抑菌浓度;用PCR法检测β-内酰胺酶基因,并对耐药基因测序分析.结果247株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美洛培南耐药率仅为3.2%和4.1%,而对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦等其余14种抗生素耐药率为31.9%～67.2%.20株多重耐药性鲍曼不动杆菌中17株具TEM基因,任选3株经DNA测序为TEM-1型基因,与GeneBank(χ 54604)比较,共有4处同义突变.未检出SHV、OXA、CTX-M、PER和VEB型β-内酰胺酶基因.结论本地区鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药除与TEM型耐药基因有关外,可能还与其他耐药机制有关.

鲍曼不动杆菌PER型超广谱β-内酰胺酶耐药基因研究

目的探讨某院产PER型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鲍曼不动杆菌分子流行病学特点及耐药机制。方法选取该院2009年1—5月临床分离的非重复鲍曼不动杆菌129株,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增PER基因并测序,肠杆菌科基因间重复一致序列(ERIC)-PCR进行同源性分析。结果 78株鲍曼不动杆菌携带PER-1型基因,阳性率60.47%(78/129)。PER-1阳性鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为46.15%、44.87%、38.46%、10.26%和8.97%,对其余10种抗菌药物的耐药率均>60%;PER-1阳性菌株对头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率明显高于PER-1阴性菌株(均P<0.05)。78株PER-1阳性菌株包括7型,分别为A型(1株)、B型(1株)、C型(55株)、D型(18株)、E型(1株)、F型(1株)、G型(1株),C和D型为主要克隆型。结论 C和D型PER-1阳性鲍曼不动杆菌为该院最主要的流行株。产PER-1型ESBLs鲍曼不动杆菌呈多重耐药,米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦可作为该院鲍曼不动杆菌感染治疗的最佳选药。

复合诱变抗性筛选法选育高转化甘油产1,3-二羟基丙酮菌株

在测定不动杆菌(Acinetobacter sp.)Asp16菌株链霉素最低杀菌浓度的基础上,对菌株进行UV和60 Co诱变处理后,利用链霉素抗性平板筛选获得1株遗传性能稳定、高转化甘油产1,3-二羟基丙酮的突变株Asr168,将突变株在5.0g·L-1酵母膏、140.0g·L-1甘油、7.0g·L-1 CaCO3组成的发酵培养基中于30℃、250r·min-1摇床培养50h,1,3-二羟基丙酮的产量达到136g·L-1,比出发菌株提高200%。表明通过UV和60 Co诱变,结合链霉素抗性平板筛选,可大幅提高不动杆菌转化甘油产1,3-二羟基丙酮的能力。

不动杆菌Acinetobacter sp.TAC-1利用聚(3-羟基丁酸酯-co-3-羟基戊酸酯)的碳代谢机理

为阐明异养硝化-好氧反硝化(heterotrophic nitrification-aerobic denitrification,HN-AD)菌株不动杆菌(Acinetobactersp.)TAC-1利用聚(3-羟基丁酸酯-co-3-羟基戊酸酯)[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate),PHBV]的碳代谢途径,以乙酸钠(sodium acetate,SOA)为对照,考察TAC-1菌株基因水平上存在的碳水化合物代谢通路。全基因组测序结果表明,TAC-1菌株中存在gltA、icd、sucAB、acs和pckA等碳水化合物代谢酶编码基因;KEGG通路数据库注释进一步证实TAC-1菌株存在糖酵解途径(glycolyticpathway,EMP)、磷酸戊糖途径(pentosephosphate pathway,PPP)、乙醛酸循环(glyoxylate cycle,GAC)和三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA cycle)等碳水化合物代谢通路;不同碳源的代谢物差异表达,进一步证实TAC-1菌利用PHBV的碳代谢途径为:PHBV(通过磷酸戊糖途径)→葡萄糖酸盐(通过糖酵解途径)→乙酰辅酶A(进入三羧酸循环)→CO_(2)+H_(2)O(产生电子供体并释放能量)。本研究有望为基于HN-AD和固体碳源的脱氮新工艺的开发和应用提供理论依据。

中药黄芩对NDM-1乙酸钙不动杆菌的抑菌及质粒消除的研究

目的探讨中药黄芩不同提取部位对NDM-1乙酸钙不动杆菌的抑菌效果及质粒消除作用。方法测定黄芩醇提剂和水煎剂对NDM-1乙酸钙不动杆菌的最小抑菌浓度(MIC);观察亚抑菌浓度下对NDM-1乙酸钙不动杆菌生长曲线的变化;利用亚抑菌浓度黄芩醇提剂和水煎剂对乙酸钙不动杆菌NDM-1质粒进行消除,用平板影印法筛选质粒消除株,并比较质粒的消除率及表型变化。结果黄芩醇提剂对NDM-1乙酸钙不动杆菌的MIC值为1.56 mg·m L^(-1),水煎剂MIC值为6.25 mg·m L^(-1)。生长曲线实验结果表明,醇提剂对细菌的繁殖抑制作用更强。黄芩醇提剂和水煎剂均有不同程度的质粒消除作用,以醇提剂传代消除作用更为明显,消除率最高可达61.27%,水煎剂亦能达到49.78%。结论黄芩能够抑制NDM-1乙酸钙不动杆菌的生长并有效消除其耐药质粒,且醇提组分作用效果更佳,可用于控制超耐药不动杆菌的传播或临床感染的辅助治疗。

支气管肺泡灌洗液可溶性髓样细胞触发受体-1在下呼吸道鲍曼不动杆菌感染与定植中的鉴别诊断价值

目的评价支气管肺泡灌洗液(BALF)中可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)水平在下呼吸道鲍曼不动杆菌感染与定植中的鉴别诊断价值。方法选择2016年7月至2018年7月在湖南省人民医院各危重监护病房的接受气管插管或气管切开的患者,根据下呼吸道分泌物培养结果纳入鲍曼不动杆菌感染组(20例)、定植组(20例)和对照组(20例)。测定三组患者血清降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)和sTREM-1以及BALF中sTREM-1水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PCT、IL-6、sTREM-1以及BALF中sTREM-1区分鲍曼不动杆菌感染与定植的诊断价值。结果对照组、感染组和定植组的性别构成和年龄差异、格拉斯哥昏迷评分差异无统计学意义(P>0.05),感染组临床肺部感染评分(CPIS)显著高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,定植组血清PCT、IL-6及sTREM-1水平升高差异无统计学意义(P>0.05),BALF中水平升高差异有统计学意义(P<0.05);感染组血清PCT、IL-6、sTREM-1及BALF中sTREM-1水平显著升高(P<0.001)。与定植组比较,感染组血清PCT、IL-6、sTREM-1及BALF中sTREM-1水平显著升高(P<0.05)。ROC曲线分析血清PCT、IL-6、sTREM-1及BALF中sTREM-1对鲍曼不动杆菌感染与定植的诊断价值:血清PCT曲线下面积(AUC)为0.67,敏感性为0.55,特异性为0.90,95%CI 0.52~0.82;血清IL-6的AUC为0.72,敏感性为0.60,特异性为0.95,95%CI0.58~0.85;血清sTREM-1的AUC为0.72,敏感性为0.75,特异性为0.60,95%CI 0.55~0.85;BALF中sTREM-1的AUC为0.92,敏感性为0.95,特异性为0.70,95%CI 0.79~0.98。鉴别鲍曼不动杆菌感染与定植准确性比较:血清PCT、IL-6及血清sTREM-1三者之间差异无统计学意义(P>0.05);BALF中sTREM-1的诊断准确性高于血清PCT、IL-6及血清sTREM-1,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BALF中sTREM-1可能作为鉴别下呼吸道鲍曼不动杆菌感染与定植的指标,其敏感性和特异性高于血清PCT、IL-6、sTREM-1。

泛耐药鲍曼不动杆菌PBP1A、CarO及β-内酰胺酶的编码基因分析

目的了解一株泛耐药鲍曼不动杆菌（js01株）可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法对自2011年12月宁波市第一医院住院患者的痰样本js01株分离，用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种。用PCR法分析33种β-内酰胺酶基因（13种A类酶基因、10种B类酶基因、2种C类酶基因、8种D类酶基因）和插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测以及CarO膜孔蛋白编码基因。再用分段PCR法扩增PBP1A编码基因，双向测序后拼接成全长序列。结果js01株检出β-内酰胺酶TEM-1、ADC-30、OXA-23和OXA-66编码基因。插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示ISabal-ADC-30和ISabal—OXA-23为阳性。js01株carO基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株（SDF）相比存在有义突变，氨基酸序列一致率为76．0％（189／249），存在3个氨基酸缺失。is01株PBP1A编码基因序列与SDF株相比存在有义突变，氨基酸序列的一致率为99．6％（848／851），存在3个氨基酸变异，但js01株PBP1A蛋白分子立体结构比SDF株丢失2个螺旋结构。结论本株鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与该菌株管家基因（PBP1A、CarO编码基因）突变与可移动遗传元件介异的β-内酰胺酶编码基因有关。

携带bla_(NDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中的适应度代价

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒丢失的10621衍生菌株,利用生长曲线、生物被膜、无营养生存时间等体外适应度测量实验,分析10621NDM-1(+)及质粒缺失的10621NDM-1(-)之间的适应度差异。【结果】pNDM-BJ01在10621菌株中不稳定,连续传代11次即在群体中完全丢失。在26℃和37℃下,10621NDM-1(-)与10621NDM-1(+)菌株的生长曲线无显著性差异。在26℃条件下,10621NDM-1(-)菌株形成生物被膜的能力明显强于10621NDM-1(+),而在37℃条件下,10621NDM-1(+)强于10621NDM-1(-)。在无营养的PBS缓冲液中,10621NDM-1(-)菌株生存能力明显高于10621NDM-1(+)。【结论】编码blaNDM-1的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中具有较大的适应度代价,缺失这一质粒的菌株在外界环境中的生存能力强于抗性菌株,pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌存续与扩散的能力有限。

多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因及插入序列ISAba1的检测

检测分析鲍曼不动杆菌的耐药性,了解多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因的流行特征,探究插入序列ISAba1与其耐药性的关系。采用琼脂二倍稀释法检测83株多重耐药鲍曼不动杆菌的药物敏感性;采用PCR检测β-内酰胺酶基因及ISAba1-OXA-23-like、ISAba1-OXA-51-like、ISAba1-ADC的基因连锁。83株多重耐药鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物的耐药率非常高。β-内酰胺酶基因TEM、SHV、NDM-1、ADC、DHA、OXA-23-like、OXA-51-like、OXA-58-like,检出率分别为83.1%(69株),91.6%(76株),2.4%(2株),100%(83株),1.2%(1株),95.2%(79株),100%(83株),4.8%(4株);ISAba1-OXA-23-like,ISAba1-OXA-51-like,ISAba1-ADC的连锁检出率分别为92.8%(77株),22.9%(19株),80.7%(67株)。多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药十分严重,携带多种β-内酰胺酶及插入序列ISAba1是本组测试菌耐药的主要原因。

产新德里金属β-内酰胺酶-1鲍氏不动杆菌的流行情况调查

目的筛查厦门部分医院鲍氏不动杆菌产新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)基因,了解产NDM-1鲍氏不动杆菌的流行情况。方法收集厦门部分医院2013年1月-2014年12月鲍氏不动杆菌341株,采用VIKET COMPACT 2全自动细菌鉴定仪进行鉴定和药敏实验,改良Hodge实验、MBL E-test法进行NDM-1表型确认,PCR方法进行NDM-1基因扩增,并将基因扩增产物进行测序比对。结果筛选出5株产NDM-1的鲍氏不动杆菌,表型确证实验结果为阳性,PCR扩增产物BLAST比对为99%以上同源性。结论厦门地区已出现产NDM-1鲍氏不动杆菌,应加强携带blaNDM-1菌株的监测与预防控制。

多底物协同-拮抗法同时检测超广谱β-内酰胺酶和AmpC β-内酰胺酶

目的 建立一种能同时检测超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)和AmpCβ 内酰胺酶 (AmpCs)的简便、实用的方法。方法 应用“多底物协同 拮抗法”(MSSAT)检测 30株阴沟杆菌 (E .cl)和 4 2株不动杆菌 (Aci)的ESBLs和AmpCs。结果 MSSAT法检出各种ESBLs产酶株 5 3株 (E .cl2 5株 ,Aci 2 8株 ) ;各种AmpCs产酶株 5 2株 (E .cl 1 9株 ,Aci 33株 ) ,其中高诱导型 1 0株 (E .cl8株 ,Aci2株 ) ,部分去阻遏型 1 2株 (E .cl5株 ,Aci 7株 ) ,完全去阻遏型 30株 (E .cl 6株 ,Aci 2 4株 ) ;同时产ESBLs+AmpCs产酶株 37株 (E .cl 1 5株 ,Aci 2 2株 ) ,其中ESBLs +高诱导型 4株(均为E .cl) ,ESBLs+部分去阻遏型 6株 (E .cl 5株 ,Aci 1株 ) ,ESBLs+完全去阻遏型 2 7株 (E .cl 6株 ,Aci 2 1株 )。结论 MSSAT法能同时检测ESBLs+AmpCs及其不同型 ,且准确、简便、实用。在同时产ESBLs +AmpCs的细菌中 ,E .cl以产诱导型AmpCs为主 ,Aci则以产非诱导型AmpCs为主。同时产ESBLs+AmpCs的细菌大部分取自痰标本。