应用软琼脂培养法筛选抗癌药物及获得耐药克隆细胞的研究

目的 :探寻可靠的诱导细胞分化剂和筛选有效抗癌药物的最佳剂量及配伍 ,并获得耐药克隆细胞。方法 :向软琼脂糖培养基内添加促分化剂全反式维甲酸 (RA)和 /或免疫制剂抗人Fas抗体 ,在评估不同处理因素下 ,对人胶质母细胞瘤系LN 4 2 8的细胞克隆形成能力影响的同时 ,获得耐药克隆细胞。结果 :在不同处理条件下 ,LN 4 2 8细胞克隆形成能力有明显差异。获得正常对照组和含 10 μmol/LRA的LN 4 2 8克隆细胞 ,在形态学上明显不同。同时含有 10 μmol/LRA +10 0ng/ml抗Fas抗体的培养基内 ,则无细胞克隆形成。 结论 :应用软琼脂培养 ,能有效检测化学制剂对肿瘤细胞的杀伤或促分化效应。探寻针对抗LN 4 2 8肿瘤的最佳药物剂量和配伍 ,同时进一步分离出耐药的克隆细胞 。

改良琼脂培养基稀释法在抗真菌药物体外敏感性试验中的应用研究

目的:初步观测改良琼脂培养基稀释法和微量液体培养基稀释法在测定白色念珠菌对伊曲康唑体外敏感性上的差异。方法:采用CLSI M27-A2推荐的微量液体培养基稀释法和改良琼脂培养基稀释法同时测定20株临床近期分离无重复白色念珠菌对伊曲康唑的体外敏感性。结果:两种方法对检测的20株真菌的体外最小抑菌浓度一致。结论:改良琼脂培养基稀释法有可能成为一种评价抗真菌药物体外敏感性的一种直观、简单、快速的方法。

琼脂培养MTT法测定卵巢癌对顺铂的体外敏感性与临床疗效观察

目的：观察琼脂培养ＭＴＴ法测定卵巢癌对顺氯氨铂（ＤＤＰ）体外敏感性与临床疗效的关系。方法：用琼脂培养ＭＴＴ法对２６例卵巢癌患者的癌组织标本行药敏测定，同时观察ＤＤＰ对卵巢癌治疗的临床疗效。结果：卵巢癌接种活细胞数与光密度（ＯＤ值）在一定范围内呈线性相关（ｒ＝０．９７２８，Ｐ＜０．０１）。临床缓解组ＤＤＰ对卵巢癌细胞的相对抑制率（７３±５）明显较临床无效组（３６±９）高（Ｐ＜０．０１）。卵巢癌对顺铂体外敏感性与临床疗效相关，体内外阳性符合率是８８％（１６／１８），阴性符合率为１００％（８／８），总符合率是９２％（２／２６）。

利用改良后的脾内免疫和半固体培养基法制备单克隆抗体

旨在利用改良后的脾内免疫和半固体培养基法制备单克隆抗体,节约免疫原用量、简化试验操作、一步法筛选和克隆杂交瘤细胞、缩短单抗制备周期。通过局部麻醉小鼠脾脏区域皮肤,切开后透过腹膜直接向脾脏内注射微量抗原,使小鼠的脾细胞在短时间内产生免疫反应,尾静脉注射强化免疫后进行细胞融合;选取半固体培养基(甲基纤维素、软琼脂)法,以有限稀释法作对照筛选分泌高效价抗体的杂交瘤细胞。结果显示,与传统的单抗制备方法相比,改进后的脾内免疫操作更简单,联合尾静脉注射,使用微量免疫原在短时间内产生高效价抗体;半固体培养基甲基纤维素浓度在1.1%条件下,获得克隆团较多,阳性率较高。本研究方法适用于大规模制备单克隆抗体。

琼脂块培养法应用于林可霉素菌种选育

以林可霉素产生菌林肯链霉菌２－８９号菌株为实验对象，选用多种诱变剂处理。实验证明，琼脂块培养法在简化选育工艺、缩短时间上明显优于常规方法。

胡萝卜花粉生活力测定方法筛选

采用染色法、琼脂培养基法、液体培养基法对胡萝卜花粉生活力进行测定,在对胡萝卜花粉形态进行初步了解的同时,筛选出较适合胡萝卜花粉生活力测定的方法。结果表明,本试验条件下,较适宜胡萝卜花粉萌发的方法为PEG+BK培养基离体培养法。

人员对室内微生物(沉降菌)的影响及杀菌办法

在室内环境中,空气、声音、光线、温度、湿度及微生物等都成为影响室内环境品质的重要因素。室内微生物的多少直接影响着人们身体的健康,如引起感冒、结核病、化脓型感染等。因此,研究人对室内微生物的影响显得尤为重要。试对室内沉降菌进行了检测,通过菌落计数法研究人员对室内微生物的影响并提出初步的解决办法。

凝固酶阴性葡萄球菌胞外多糖检测的临床意义

目的 用粘液多糖的产生作为毒力指标鉴别临床分离的凝固酶阴性葡萄球菌 (CNS)的感染与污染情况。方法 用刚果红琼脂培养法检测CNS产生的粘液多糖 ,将粘液多糖 β 内酰胺酶的产生及细菌多重耐药进行多因素相关性分析。结果 CNS的临床检出以表皮葡萄球菌为主 ,该菌种粘液多糖的产生率为 71.4 % ;临床分离的CNS粘液多糖的检出率为 5 3.3% ,如果将其作为毒力指标判断感染 ,临床检出的CNS存在严重的污染 ;产生粘液多糖的CNS ,92 .9%产生β 内酰胺酶 ,85 .7%对苯唑西林耐药 ,71.4 %同时对 5种抗生素耐药。 结论 粘液多糖可以作为毒力因素对临床分离的CNS的致病性进行评价 ,但作为唯一因素判断感染的真实性 ,尚缺乏大样本的观察数量和足够的临床证据 ;粘液多糖的产生和耐药性共同作为毒力因素同时进行多因素分析 ,可以作为实验室的判断依据。

辽宁新宾人参根腐病病原真菌的分离与鉴定

分离和鉴定辽宁人参主产区根腐病致病真菌,为人参抗病育种、开展根腐病绿色防治提供理论支撑。本研究采用组织分离法,对辽宁新宾人参根腐病重发生地块2~5年生病株开展植物病原真菌的分离和纯化。采用琼脂培养法,对分离菌株进行致病性测定。结合形态学观察和rDNA-ITS、EF-1α序列分析,对菌株开展形态学和分子生物学鉴定。最终,分离得到2株菌落形态不同的致病真菌,编号为JS64-1和JS64-3,经鉴定,分别为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。本研究采用琼脂培养法,开展人参根腐病致病性测定,操作简便,省时高效,结果准确,可为其他植物根部病害研究提供参考。

不同花型芍药的花粉生活力测定和比较研究

对芍药单瓣型、金环型、台阁型、皇冠型和菊花型等不同花型的10个品种,采用TTC法和琼脂培养基发芽法分别进行花粉生活力的测定和比较研究。显微观察结果表明,单瓣型品种的花粉形态和其他几种花型芍药的花粉有所不同。TTC染色法结果表明,单瓣型品种的花粉生活力与金环型、台阁型、皇冠型、菊花型品种间存在极显著差异,菊花型与台阁型、金环型间有显著差异,金环型、台阁型和皇冠型之间均无显著差异;单瓣型品种花粉生活力最强,菊花型的最弱。琼脂培养基发芽法结果表明,以蔗糖10%、琼脂0.5%、硼酸10 mg/L培养基为佳;花粉生活力测定值较TTC法低,数据更为准确。

17种梅(桃)属观赏树木花粉生活力的比较

用琼脂培养基发芽法,对梅(桃)属(Prunus)观赏树种中的梅(P.mume)、红梅(P.mume f.rubriflo ra)、杏(P.armeniace)、李(P.saliciua)、紫叶李(P.cerasifera var.atropupura)、郁李(P.japonica)、东京樱花(P.yedoensis)、毛樱桃(P.tomentosia)、榆叶梅(P. triloba)、桃(P.persica)、白花桃(P.persica f.alba)、蟠桃(P.persica f.compressa)、紫叶桃(P.persica f.atropurpurea)、红碧桃(P.persica f.rubro plena)、白碧桃(P.persica f.albo plena)、红寿星桃(P.persica f.rubro densa)、白寿星桃(P.persica f.albo densa)计 17 份种质,进行花粉生活力测定研究。统计结果表明:供试梅(桃)属观赏树种中,种(变种)间花粉生活力存在显著性差异,桃种若干栽培变型间也大都存在显著性差异。琼脂培养基 pH处理(5.4,5.8,6.2)间具显著性差异,且以pH 5.8为最佳;琼脂培养基蔗糖处理(质量分数10%,15%)间无显著性差异。

参菊洗剂体外抑菌作用

目的研究参菊洗剂的体外抑菌作用。方法采用琼脂扩散纸片法测定抑菌圈直径,采用液体培养液连续稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),采用琼脂培养液平板法测定最低杀菌浓度(MBC),并与市售某妇科洗液比较抑菌作用。结果参菊洗剂对5种病原菌株的抑菌作用明显优于相同浓度的市售某妇科洗液,差异有统计学意义(P<0.05);参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MIC分别为33.75,67.50,67.50,67.50,33.75 mg·m L-1;参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MBC分别为33.75,67.50,67.50,135.00,33.75 mg·m L-1。结论参菊洗剂具有较明显的抑菌和杀菌作用。

花生酱制品中黄曲霉毒素B_1及霉菌污染调查

为分析和评价我国花生酱制品的安全性,随机采集全国不同地区商业化生产的10个品牌的花生酱产品,采用ELISA法检测黄曲霉毒素B_1,采用琼脂培养法检测霉菌含量,结果表明:10个样品中的黄曲霉毒素B_1含量在1.02~19.93μg/kg之间,均低于我国食品安全标准限量(20.0μg/kg),但仅有1个样品达到欧盟食品安全标准限量(2.0μg/kg);有1个样品的霉菌总数超过我国食品安全标准限量(25cfu/mL)。

入侵植物紫茎泽兰叶内生真菌多样性研究

外来入侵植物通常要和当地的生物发生相互关系并对当地生态系统产生影响。为表明叶内生真菌是否有利于紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum)的入侵力,首次调查了其叶内生真菌多样性。利用过夜冰冻组织法和常规的麦芽汁琼脂平板培养法,分别于3、6月份从昆明西山、金殿种群分离得到312个菌株,根据其ITS基因差异,分为77个可操作分类单元(OTUs),系统发育地位分布在Agaricomycetes、Dothideomycetes、Sordariomycetes和Pezizomycetes 4个纲。在低阶分类上这些真菌可分为19个属,优势属为链格孢属(Alternaria)(25.09%)和炭疽菌属(Colletotrichum)(10.80%)。有2.09%的菌株属于未知真菌。相比较,6月份的紫茎泽兰种群比3月份具有较高的内生真菌多样性。结果表明,入侵植物紫茎泽兰叶内生真菌非常丰富,这些真菌是否对紫茎泽兰的入侵力具有影响值得今后深入研究。