琼脂扩散法用于放线菌源生防菌剂筛选的活性影响因素

以灰霉病菌(Botrytis cinerea)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)为模式靶标,探讨了放线菌源生防杀菌剂筛选的活性特征、影响活性稳定性和敏感度的因素。采用琼脂扩散法,测试了模式靶标、化合物标准样品和放线菌标准菌株的发酵液样品对杀菌活性测试的影响。结果表明,靶标的处理过程、靶标菌的含量、样品的类型以及样品的加入量与活性反应有直接关联。不同模式靶标菌对破碎处理的耐受程度不同,必须针对不同模式靶标进行个性化处理,以保证模式靶标菌在测试中的稳定生长状态。在琼脂扩散法中,不仅可以检测样品的杀菌活性强度,而且活性成分与靶标菌的不同作用方式也可以呈现。保留活菌的放线菌发酵液样品在加入量较宽的范围内都显示活性,而经过滤除菌处理的放线菌发酵液样品和标准化合物都只在样品加入量比较大时才显示出活性。

基于琼脂扩散法的抗菌肽定量测定方法优化

抗菌肽在试验室研究、生产实践以及安全性评价过程中,存在定量测定方法不统一,结果重复性差,缺乏比较依据等问题。以硫酸多粘菌素B为代表,以铜绿假单胞菌为指示菌,采用琼脂扩散法建立抗菌肽浓度对数值与抑菌圈直径之间的线性关系,以重复性和精密度为指标,对指示菌菌龄、菌浓、琼脂浓度和培养基厚度等影响因素进行优化,确定琼脂扩散法测定抗菌肽效价的最佳测定条件为:指示菌的最佳培养时期为稳定期,浓度为10~6 cfu/mL,培养基厚度为3.15 mm(Φ90 mm,20 mL),琼脂浓度为1.5%。在此条件下,选用其它抗菌肽和指示菌进行验证,结果重复性好,精密度高(R^2=0.997),该研究将为抗菌肽在试验和生产过程中的定量测定提供参考和依据。

温度对琼脂扩散法测定Nisin效价的影响

4℃预扩散和培养温度是影响琼脂扩散法测定Nisin效价的两个重要因素。4℃预扩散可明显改进Nisin在琼脂中的扩散效果,提高效价测定的精确度。30℃培养时,Nisin效价测定的精确度和灵敏度最高。

改良琼脂扩散法鉴定麦卢卡蜂蜜

目的改良Allen等提出的测定麦卢卡蜂蜜非过氧化氢抑菌活性的琼脂扩散法。方法参照Allen等提出的琼脂扩散法,研究以下3个方面对琼脂扩散法的影响:使用恒温箱或在杂交炉中混匀蜂蜜水溶液,使用不同代的金黄色葡萄球菌菌株和培养基的倾斜程度。结果麦卢卡蜂蜜样品溶液使用恒温箱和杂交炉静置法混匀,测得样品的独麦素(Unique Manuka Factor,)UMF值没有显著差异;随着金黄色葡萄球菌传代数的增加,样品的UMF值也没有显著差异;培养基倾斜后同一麦卢卡蜂蜜位于中间样孔的样品UMF值明显高于边际样孔。结论杂交炉混匀蜂蜜的方法操作简单,更有利于麦卢卡蜂蜜非过氧化氢活性的检测,25代以内的任何1代菌株均可用于测定麦卢卡蜂蜜样品的非过氧化氢活性,培养基倾倒时要尽量避免过度倾斜。

实验教学中双向琼脂扩散法的改进

目的:探讨改进后的双向琼脂扩散试验的可行性。方法:在含0 .1μg/ml的溴酚蓝的凝胶琼脂板上,以鸡卵白蛋白为抗原,鸡卵白蛋白免疫血清为抗体进行双向琼脂扩散试验。结果:出现典型的沉淀线且与凝胶背景之间的反差明显。结论:加一定浓度的溴酚蓝可提高双向琼脂扩散试验的敏感性;鸡卵白蛋白及其免疫血清既经济又安全,可作为教学实验中双向琼脂扩散试验的实验材料。

试纸条法与琼脂扩散法检测IBDV抗体的比较(英文)

[目的]比较分析IBDV抗体的试纸条与琼脂糖扩散两种检测方法。[方法]用自行研制的试纸条法检测鸡血清中的鸡传染性法氏囊病毒抗体,并与传统的琼脂扩散法检测结果进行比较。[结果]试纸条较琼脂凝胶扩散试验敏感8倍,在216份临床样品测定试验中,检出率更高,同时其又具有特异性强、易保存、操作简单快速等优点,故试纸条更适合于临床抗体监测。[结论]该研究结果表明试纸条可替代现有的血清学方法,在抗体监测方面具有极大的推广应用价值。

纸片琼脂扩散法检测AmpC酶的探讨

目的建立一种简便、快速适用于普通临床微生物室的AmpC酶表型检测方法。方法分别采用纸片琼脂扩散法和三维实验检测244株试验菌中产AmpC酶的情况。结果三维实验检测244株试验菌中,产AmpC酶的有67株,产酶率为27.45%(67/244),其中阴沟肠杆菌46.67%(21/45),铜绿假单胞菌35.09%(20/57),嗜麦芽寡养假单胞菌33.33%(2/6),鲁民不动杆菌20.0%(1/5),鲍曼不动杆菌26.83%(11/41),产气肠杆菌28.6%(4/14),大肠埃希菌10.0%(5/50),肺炎克雷伯菌11.54%(3/26)。纸片琼脂扩散法检测产酶率24.59%(60/244),经统计学处理得出两者检测无显著性差异。结论纸片琼脂扩散法是一种简便快速的AmpC酶表型检测方法,易在普通实验室推广。

琼脂扩散法测定软膏基质对NMT乳膏释前的影响

目的 对比不同类型的软膏基质对NMT软膏中新霉素、硝酸咪康唑抑菌效果的影响.方法 采用管碟扩琼脂扩散法进行抑菌对比实验.结果 以水溶性基质的软膏对细菌及真菌的抑菌作用最强.结论 水溶性软膏基质对新霉素等主药的释前效果好.

用免疫琼脂扩散法对仔猪水肿病病原血清型的鉴定

仔猪水肿病是当前危害养猪业发展较为严重的疾病。目前尚缺乏有效的预防和治疗措施。一般认为,仔猪水肿病与某些致病的溶血性大肠杆菌有关,最常见的即O138、O139、O141,我省以O139K82(B)为主。由于溶血性大肠杆菌血清型的不同,其毒性物质的理化性质也有不同,因此,研究仔猪水肿病,首先要鉴定仔猪水肿病病原的血清型,这样才能更好地对仔猪水肿病的免疫、预防和治疗开展研究。

应用琼脂扩散法测定饲料中木聚糖酶含量

本实验研究了应用琼脂扩散法测定饲料中所含木聚糖酶的活性。结果表明,该方法标准曲线制作线性良好;应用淀粉稀释木聚糖酶进行验证性实验,检测酶活测定值和实际理论值之间差异不显著(P>0.05),说明该方法准确率很高;应用饲料稀释木聚糖酶进行验证性实验,检测酶活值低于理论值,但这并不影响该方法对饲料中酶活的判定。综合整个实验结果表明,此方法可以很好的检测饲料中含有的微量木聚糖酶。

K-B琼脂扩散法与微量稀释法两种药敏试验方法的比较

用Ｋ—Ｂ琼脂扩散法和微量稀释法两种方法同时测定标准菌株对６种抗生素的敏感性，以此来评价微量稀释法的可靠性。结果表明，微量稀释法和Ｋ—Ｂ琼脂扩散法具有相同的准确性。但Ｋ—Ｂ琼脂扩散法测定细菌对抗生素的敏感性仅限于定性；而微量稀释法既可定性也可以定量。

新型琼脂扩散法检测食品中天然防腐剂ε-聚赖氨酸含量

为分析食品中ε-聚赖氨酸(ε-poly-L-lysine,ε-PL)含量,建立一种新型琼脂扩散法,并对分析条件进行优化,验证在检测食品中ε-PL含量时的有效性。结果表明,质量分数0.002%亚甲基蓝、0.75%琼脂、ε-PL溶液pH值为2.0、牛津杯加液量750μL时检测结果最佳。本方法允许检测橙汁中ε-PL最低含量为2 mg/kg、糕点和猪肉火腿中最低为10 mg/kg。这种新型琼脂扩散法具有操作简便、使用成本低、专一性高等优点,可以广泛应用于ε-PL生产企业和食品工业。

应用琼脂扩散法检测小鹅瘟抗原抗体

近年来,养鹅业在我省发展十分迅速,但由于鹅种蛋来源复杂,使小鹅瘟在我省呈流行趋势,造成了严重的经济损失。为了更好地防制本病,建立快速、准确、方便的诊断方法十分重要。过去常以病毒分离鉴定和剖检的病理变化进行确诊,需要较长时间,操作也较复杂。另外,检测小鹅瘟免疫...

琼脂扩散法定量测定多黏菌素对霉菌的抑菌活力

本文研究抗菌肽抑制霉菌的活力定量测定方法,选用多黏菌素B和产黄青霉作为研究对象,采用琼脂扩散法优化指示菌浓度、抗菌肽添加量、培养时间等影响活力定量测定的条件,进一步以黑曲霉为指示菌进行方法验证;通过建立抗菌肽浓度对数值与抑菌圈直径之间的线性方程进行抗菌肽抑菌活力的计算。研究结果显示,琼脂扩散法测定多黏菌素B抑制霉菌活力的最佳条件:90mm平板添加PDA培养基15mL,指示菌孢子浓度(1~5)×10^6个/mL,多黏菌素B添加量100μL,4℃预扩散时间6~10h,28℃培养时间24h。以黑曲霉为指示菌进行方法验证时发现方法重复性好、精密度高。在此条件下,多黏菌素B对产黄青霉和黑曲霉的抑菌活性分别为524.81U/mg和605.76U/mg。该研究为抗菌肽在试验和生产过程中的活力测定提供参考和依据。

K-B纸片琼脂扩散法检测细菌药物敏感试验的影响因素分析

细菌药物敏感试验的结果是临床合理用药的重要依据,确保其结果的准确性,必须了解试验中培养基种类及质量、试验用药的纯度和菌液的浓度、药物的含量及孵育时间等诸多因素的影响。本文主要探讨K-B纸片琼脂扩散法中的影响因素。

琼脂扩散法检测卵黄抗体效价影响因素的分析

抗体琼脂扩散试验是当前卵黄抗体效价测定的主要方法之一,该方法简洁、快速非常适合于临床中应用,但是该方法容易受到多种因素的影响而导致试验结果判断的不准确。本文就琼脂扩散试验中抗原抗体本身性质、反应特点、最适比例、可逆性、总量以及琼脂、水等所有能影响试验结果的因素进行了逐一分析。

免疫琼脂扩散法检测肉制品中的掺假蛋白

制备肌肉冻融水浸液为兔体免疫抗原,28天后获得特异性的高滴度抗血清。运用免疫琼脂扩散法检测掺假蛋白,以标准抗原与抗血清的沉淀线为比较基准,将样品与抗血清所生的沉淀线与之比较,根据琼脂板上二种沉淀线距中心孔(抗血清孔)的距离,判断样品掺假的程度。