血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳综合实验设计

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验是生物化学实验课程中的经典实验,但因其操作单一、等待时间过长,学生的收获感不强,有必要进行综合设计。把上课时间分为三个时段,在各个时段设计多种学习活动:串讲原理、做练习题使相关知识融会贯通;阅读文献,提出疑问;设置试误样品组、做相关实验,启发学生顿悟。通过这些学习活动,学生不仅学会了电泳技术的基本操作,还深刻理解了实验原理,强化了勇于探索的科学精神,体会了顿悟的快乐。

琼脂糖微球凝胶制备、物理化学特性及其注射效果

为了解决目前市面上填充剂填充周期短以及注射风险高的问题,以琼脂糖为原料,采用乳化固化法制备出粒径均匀的琼脂糖微球凝胶,并探讨了上述微球凝胶的物理化学特性,评价其作为面部注射填充凝胶的可行性。在高频作用下,进行琼脂糖水溶液与油相的双相均质,得到小粒径琼脂糖微球,碱性条件下与固化剂进行固化反应得到可注射琼脂糖微球凝胶。利用平均粒径在25~40μm之间的小粒径微球进行凝胶制备,正交试验确认反应温度50℃,水浴振荡速率150 r/min,反应时间8 h为最优制备工艺。在30 mm/min条件下检测得到凝胶最大推挤力小于20 N,粘弹性测试结果表明凝胶形成了较为稳定的三维网络结构。同时,细胞毒性和家兔皮下植入后局部反应证明该凝胶作为填充剂具有良好的生物相容性,且降解速率慢,较透明质酸钠凝胶具有更长的填充周期。综合表明,琼脂糖微球凝胶作为一种新型的注射凝胶有望应用于整形美容领域。

琼脂糖粉的质量对PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳的影响

目的:研究琼脂糖粉的质量对聚合酶链式反应(PCR)产物琼脂糖凝胶电泳的影响。方法:PCR产物琼脂糖凝胶电泳中分别使用不同牌子的琼脂糖粉,同时跑胶图像。结果:质量差的琼脂糖粉电泳结果有明显弥散现象,而更换高质量的琼脂糖粉,未见弥散现象。结论:琼脂糖粉质量在分子生物学PCR产物琼脂糖凝胶电泳实验中扮演重要角色,使用高质量的琼脂糖粉对实验的成功至关重要。

单克隆抗体的超薄琼脂糖等电聚焦

单克隆抗体(McAb)lgG和IgM都具有各自不同的等电点(PI)所以测定它们的PI是鉴定和研究McAb性质不可缺少的项目之一。进行等电聚焦(IEF)最常用的抗对流介质虽是聚丙烯酰胺胶,但因该胶的适合分子量超过400KD以上的样品,而McAblgM的分子量约为800KD。

琼脂糖醋酸酯的制备方法与表征

以浓硫酸为催化剂,琼脂糖与醋酸酐反应制备出琼脂糖醋酸酯。研究了反应温度等参数对取代度的影响,结果表明,50℃时取代度最大。接触角测试结果表明,琼脂糖醋酸酯较琼脂糖接触角增大,疏水性明显增强。傅里叶变换红外光谱、核磁共振碳谱证实形成了琼脂糖醋酸酯。热重分析测试表明,琼脂糖醋酸酯具有不同于琼脂糖的热特性。琼脂糖醋酸酯可作为疏水性新型可纺丝材料,可望应用于组织工程支架。

羧甲基琼脂糖微球的制备及其在国产碱性蛋白酶纯化中的应用

以琼脂糖粉末为原料,利用反相悬浮原理制备琼脂糖凝胶微球。所得琼脂糖微球的粒径分布在45～165μm范围内,并对其进行了交联。以自制交联琼脂糖微球为基质,对其进行了羧甲基化反应。依据离子交换容量进行键合量的表征,综合考察了各种反应试剂的用量、反应温度、反应时间等条件对键合量的影响。将所得的羧甲基键合微球用于碱性蛋白酶粗品的分离纯化,结果表明,自制羧甲基弱阳离子交换填料对国产碱性蛋白酶具有较好的分离纯化、除色以及除味等作用,可以达到国外同类产品的效果。

琼脂糖凝胶大分子在陶瓷原位凝固成型中的应用

研究了一种新的陶瓷原位凝固成型方法，其原理是依据琼脂糖凝胶大分子在水溶液中加热时溶解，冷却时凝固这一物理变化．对于固相体积分数大于５０％陶瓷悬浮体中引入约１％（质量分数）琼脂糖大分子，即可凝胶注模进行各种形状复杂的陶瓷部件成型，获得表面光洁、内部孔隙尺寸和密度分布均匀的陶瓷坯体，并烧结出均匀致密内部无明显缺陷的涡轮转子等异型部件．

环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶过程强化及性能评价

环氧氯丙烷的低水溶性和活化过程中环氧基水解制约了高活化效率的获得.通过引入亲水性有机试剂二甲基亚砜,研究了提高Sepharose CL-6B介质环氧基活化密度的方法.研究结果显示,二甲基亚砜溶剂体系消除了琼脂糖凝胶与环氧氯丙烷之间的相界面,形成了均相反应体系,强化了活化反应.在10%(φ)环氧氯丙烷、0.8mol/L氢氧化钠及反应时间2.5h的优化条件下,环氧基活化密度可达100μmol/mL以上.上述活化过程对介质的性能没有明显影响.活化介质对5-氨基吲哚的偶联密度达到95.3μmol/mL,较常规活化方法提高75%以上.

琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳在SSR鉴定杂交油菜种子纯度中的比较

对3对候选引物SR85、SR332、SR407所扩增的秦优33杂交种及其父母亲本的DNA-SSR片段进行琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。两种电泳检测结果比较表明,(1)利用琼脂糖凝胶电泳分离后,3对候选引物对杂交种所扩增的SSR条带均为父母亲本条带的互补。其中引物SR332所获的两条互补条带的迁移率相差大,电泳图谱能清晰鉴别出父本、母本及杂种植株。引物SR85和SR407杂交种的互补条带迁移率相近,在鉴定中易出现人为误差。(2)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,引物SR332所扩增条带未能区别杂交种与父本植株。引物SR85和SR407对杂交种所扩增的条带均为父母亲本所扩增条带的互补,相互差异显著,条带清晰稳定。可见,琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳都是SSR技术鉴定种子纯度的有效途径,种子纯度分析应根据区别材料的遗传关系和引物分析表现来选择不同的电泳介质。

全自动毛细管电泳与琼脂糖电泳检测血红蛋白的比较

目的比较全自动毛细管电泳与琼脂糖电泳的血红蛋白电泳检测结果,探讨全自动毛细管电泳仪在地贫筛查中的价值。方法使用法国Sebia公司Capillarys2全自动毛细血管电泳仪及配套试剂,在9.8kV电压、pH9.4的缓冲液条件下,在8条并联的石英毛细管内进行血红蛋白电泳,用415nm波长直接检测血红蛋白各组分的百分比;毛细管电泳发现的异常标本同时采用SebiaHydrasys LC琼脂糖凝胶电泳系统进行电泳、染色、脱色、烘干,用Hyrys扫描系统扫描,得出血红蛋白各组分的百分比,与毛细管电泳检测结果进行对比。结果在2400份临床标本中,Capillarys2全自动毛细管电泳仪共检出β地贫262例,其中HbA2增高161例,HbF增高28例,HbA2+HbF同时增高73例;用HydrasysLC琼脂糖凝胶电泳系统对262例异常标本进行复检对照,结果基本一致;仅在HbF≤3.0%时,琼脂糖凝胶电泳无法将其与HbA区分,而毛细管电泳可以准确分辨。α地贫筛查中,Capillarys2全自动毛细管电泳仪共检出HbH13例、HbBart’s1例、HbCS3例;而琼脂糖凝胶电泳系统仅检出HbH10例、HbBart’s1例、HbCS1例,漏检HbH3例、HbCS2例。结论全自动毛细管电泳能比琼脂糖电泳更准确区分HbA、HbA2、HbF、HbH、HbBart’s、HbCS等条带,对地贫筛查效果更佳。

磁性琼脂糖亲和吸附剂的合成与应用

采用反相悬浮包埋技术合成了粒径在 43～ 2 95μm之间的磁性琼脂糖微球。磁性琼脂糖微球经环氧氯丙烷活化后 ,分别键合 6-氨基己酸、氨基乙酸和乙二胺为间隔臂 ,用水溶性碳二亚胺为缩合剂 ,分别偶联对氨基苯甲脒、l-精氨酸甲酯和胍基己酸 ,制备了 3种磁性亲和吸附剂 ,并用于尿激酶粗品的分离纯化。测定了活性回收率和比活提高倍数 。

琼脂糖-透明质酸共聚物作为胰岛素载体

本文主要研究了一种新型的多肽药物载体材料的制备方法及其释药特征。首先氧化降解成小分子量、低凝胶温度的琼脂糖,用环氧氯丙烷活化后,与透明质酸共混接枝制备成琼脂糖-透明质酸共聚物,再用该共聚物包载胰岛素,并观察所形成微粒的形态及其释药行为。红外光谱及元素分析结果显示成功制备了琼脂糖接枝透明质酸共聚物;释药实验表明包载的胰岛素有缓释行为。因此,琼脂糖接枝透明质酸有望成为胰岛素的缓释载体。

用普通琼脂糖代替低熔点胶回收DNA片段

为了建立一种直接从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简便实用的方法 ,采用聚合酶链式反应扩增人P53基因外显子7、8和其间的内含子7序列 ,用普通琼脂糖凝胶电泳,直接从凝胶中切下产物带 ,用加热熔化法回收DNA ;紫外比色法测定回收率 ;用测序法鉴定回收产物质量。并用QIAquickSpin纯化柱对照。结果表明 ,本法回收的产物质量明显优于用QIAquickSpin柱回收 ,本法回收的产物用于测序效果极佳 ,回收率达80% ,用QIAquickSpin柱回收率不到20% ,差异非常显著(P<0 01)。证明这种方法回收PCR产物质量可靠 ,能代替低熔点胶回收DNA 。

蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的条件优化

目的:建立一种以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列制备的优化方法,比较琼脂糖修饰玻片和醛基修饰玻片及氨基修饰玻片对蛋白质固定效率的优劣。方法:将羊IgG固定在载体表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3标记的兔抗羊IgG,孵育,洗涤后用共聚焦激光扫描仪获取图像,检测各点的荧光强度,根据荧光强度确定最佳琼脂糖浓度,最佳NaIO4浓度,最佳固定时间以及封闭时间等实验条件。结果:琼脂糖浓度为1.2％、NaIO4浓度为20mmol／L、固定时间为1h、孵育时间为45min时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高。在固定的抗体浓度相同的情况下,琼脂糖修饰玻片荧光强度是醛基修饰玻片的2.6倍,是氨基修饰玻片的9倍。结论:确立了蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的优化条件,用该优化条件制备的琼脂糖玻片更适合用于蛋白质微阵列载体。

全自动琼脂糖凝胶电泳检测地中海贫血7500例结果分析

目的:探讨全自动琼脂糖凝胶电泳仪在地中海贫血(简称地贫)筛查中的应用。方法:采用全自动琼脂糖凝胶电泳仪对7500例标本进行Hb电泳,测定异常Hb、HbA2及HbF含量,其中439例同步做地贫基因检测。结果:7500例中检出β地贫615例,异常Hb245例;439例电泳对比基因检测结果显示β地贫、HbH病的电泳检测结果与基因检测结果完全吻合,HbCS的检测结果吻合率达99.77%。以HbA2≤2.55%诊断α1地贫,敏感度和特异度分别为88.9%和73.3%,以HbA2≤2.65%诊断α2地贫敏感度和特异度分别为81.3%和66.3%。结论:全自动琼脂糖凝胶电泳分辨率高,能准确分析出HbA2、HbH、HbCS、HbF异常增高及其它异常Hb,能很好诊断β地贫、HbH病和HbCS。

琼脂糖凝胶的制备及化学改性研究

以琼脂糖为原料,用喷射法制得琼脂糖凝胶,用柱管式液流分级装置进行粒度分级,90%的粒度为50μm～150μm。分别以环氧氯丙烷及丁二醇双缩水甘油醚为交联剂,制得交联琼脂糖凝胶P和B,与二乙氨基氯乙烷(DEAE)盐酸盐偶联,制得交联DEAE 琼脂糖凝胶P和B,离子交换容量分别为22mmol/L和40mmol/L,对人血白蛋白的吸附量分别为110mol/L和160mol/L。

抗菌肽琼脂糖孔穴扩散法与比浊法测活比较及其相关性

以大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１为标准菌株，采用琼脂糖孔穴扩散法和比浊法相结合，对抗菌肽活力进行测定．通过细菌浓度的变化和抑菌圈大小来确定样品的活力单位．生物统计结果表明：活力单位（ｕ）与抑菌圈直径（ｄ）两者之间存在定量的正相关（ｕ＝０．０６ｄ）．

回收琼脂糖凝胶中DNA的简便方法

多年来国内分子生物学实验室所采用的几种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法不同程度地存在着各种问题。现介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA的简易方法,采用实验室常用的吸附柱中的吸附膜对DNA进行拦截、纯化和回收。实验证明这种方法回收DNA具有简便快捷、成本低和效率高等优点,是一种切实可行的方法。