琼脂糖凝胶电泳法测定血清中各种脂蛋白胆固醇

对琼脂糖凝胶电泳法同时测定血清极低密度脂蛋白（ VLDL）、低密度脂蛋白（ LDL）、高密度脂蛋白（ HDL）和脂蛋白 (a)[Lp(a)]的胆固醇 [即 VLDL- C、 LDL- C、 HDL- C和 Lp(a)- C]含量的方法进行评价。方法采用 Helena REP全自动快速电泳系统分离血清 VLDL、 LDL、 HDL和 Lp(a)，然后结合胆固醇酶染色法同时测定 VLDL- C、 LDL- C、 HDL- C和 Lp(a)- C的含量。分析了该法的精密度、准确度和干扰因素，并将该法与传统方法如测定 HDL- C的磷钨酸-镁沉淀法（ PTA- Mg2＋法）、测定 LDL- C的聚乙烯硫酸沉淀法（ PVS法）及测定 Lp(a)的免疫透射比浊法（ ITA法）进行比较。结果电泳法测定 VLDL- C、 LDL- C和 HDL- C的批内 CV分别为 5.16％～ 7.46％、 1.26％～ 3.28％、 3.78％～ 5.86％；批间 CV分别为 8.35％～ 11.25％、 2.78％～ 4.08％、 4.23％～ 6.36％。检测线性范围总胆固醇为 1.04～ 10.35 mmol/L，基本不受溶血、黄疸和脂血干扰。 VLDL- C、 LDL- C和 HDL- C的平均回收率分别为 90.3％、 94.3％和 89.6％。电泳法与传统法测定 LDL- C、 HDL- C的相关系数（ r）分别为 0.9609、 0.9557。电泳法测定 Lp(a)- C与 ITA法测定 Lp(a)的 r为 0.9235。以该法检测北京地区 98例健康人， HDL- C、 VLDL- C、

琼脂糖凝胶电泳法测定糖化血红蛋白及其临床应用

目的 采用琼脂糖凝胶电泳的方法测定糖化血红蛋白 (Hb Alc) ,了解 Hb Alc与空腹血糖的关系。方法 取正常人及糖尿病人 EDTA- K2抗凝全血 2 32例 ,制成血红蛋白溶液 ,使用法国 sebia公司 sebia HYDRASYS电泳仪及光密度计扫描仪 ,用琼脂糖凝胶进行电泳分离和光密度计扫描定量测定 Hb Alc;在全自动生化分析仪上用己糖激酶法测定空腹血糖。结果 对照组的 Hb Alc平均值 (% )为 x± s=5 .4 1± 0 .94 ,血糖的平均值 (mmol/ L )为 x± s=4 .92± 0 .87;糖尿病人的 Hb Alc平均值 (% )为 x± s=11.0 6± 4 .3,血糖的平均值 (mmol/ L )为 x± s=10 .86± 3.0 4 ,P<0 .0 1,血糖值与Hb Alc值有显著相关性 ,r=0 .985 ,回归方程 Y=1.10 15 x+1.815。结论 该方法标本用量少 ,分辨率高 ,重复性好 ,结果不受温度及胎儿血红蛋白的影响 ,Hb

一种基于琼脂糖凝胶电泳法检测SARS-CoV-2的新方法

鉴于琼脂糖凝胶电泳分析方法的准确、快速、简便等特性,优化后可以做为检出COVID-19病原的新方法。在不影响结果判读的情况下,通过对扩增时间及检测样本浓度进行优化,以达到预期目的。结果表明,检测SARS-CoV-2的最优反应程序为94℃预变性3 min;94℃变性时间、56℃退火时间及72℃延伸时间均降至5 s,且进行35个循环;最后72℃孵育5 min,最优模板用量比例(初始值设为4 ng)下限调整在(1:1000)^(1:5000)范围内。阳性样本测试结果符合预期。建立了一种简便、省时,适用于检测低载量病毒样本的新方法,为临床提供诊断参考。

琼脂糖凝胶电泳法测定小麦中长穗偃麦草的基因

为了验证琼脂糖凝胶电泳法检测小麦中长穗偃麦草基因的可行性,选取了小麦品种新春37与长穗偃麦草的杂交后代XC10、XC31、XC35,利用DNA提取、构建PCR体系、PCR扩增以及琼脂糖凝胶电泳等方法来检测其相关基因。并验证该方法对小麦相关基因检测的准确度和重现性。结果显示,该方法操作简单、准确度高,可用于小麦基因的检测分析。

琼脂糖凝胶电泳法检测尿蛋白的临床意义

目的 :用电泳法检测尿蛋白组分变化 ,用于肾脏疾病的诊断与鉴别诊断。方法 :采用法国SEBIAMG 3 0 0半自动电泳分析仪对 2 17例肾脏疾病患者进行尿蛋白分析。结果 :2 17例肾脏疾病患者测得结果分别为 :肾小球性蛋白尿 69 1% ,混合性蛋白尿14 7% ,生理性蛋白尿 13 9% ,肾小管性蛋白尿 2 3 % ,均符合临床诊断的肾病综合征和肾小球等的肾脏疾病。结论 :本法操作简便、易于量化 ,无创伤性 ,灵敏度高 ,且样本可保存 。

高效液相色谱法与琼脂糖电泳法检测β-地中海贫血携带者HbA_2结果的比较

目的比较高效液相色谱法(HPLC)与琼脂糖电泳法检测β-地中海贫血携带者HbA2的结果,探讨二者筛查β-地中海贫血的灵敏性和可靠性。方法产前筛查疑似β-地中海贫血携带者154例,同时检测β-地中海贫血基因、HbA2。HbA2分析采用法国Sebia琼脂糖凝胶电泳系统和HPLC分析系统同时进行分析。β-地中海贫血基因诊断采用反向点杂交法进行17种常见突变基因检测,以基因诊断结果作为金标准分别对HPLC分析仪和琼脂糖电泳的HbA2结果进行评价分析。结果在154份临床样本中,基因诊断为阳性的样本为65例;以HbA2>3.5%作为诊断β-地中海贫血携带者的最佳临界值,琼脂糖电泳共筛查出57例阳性,与基因诊断符合率为87.6%;HPLC分析共筛查出63例阳性,与基因诊断符合率为96.9%;琼脂糖电泳与HPLC分析仪诊断β-地中海贫血的灵敏性、特异性分别为84.6%、97.7%、96.9%及98.9%。HPLC分析仪阳性符合率、灵敏性明显高于琼脂糖电泳,差异有统计学意义(P<0.05);而HPLC特异性也稍高于琼脂糖电泳法,但比较无显著差异(P>0.05)。结论 HPLC筛查β-地中海贫血与基因诊断有较高的符合率,是一种筛查β-地中海贫血灵敏性、特异性和准确度都较高的理想方法。

一种快速鉴定RNA质量的方法

目的 建立一种快速鉴定RNA完整性的方法。方法 在常规琼脂糖凝胶电泳的基础上 ,结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。结果 提取的总RNA用此方法电泳后可得到 2 8S、18S、5 .8S(5S)三条清晰的rRNA条带。结论 此方法可以达到对RNA完整性进行快速鉴定的目的。

细胞凋亡率检测方法的探索

目的探索可用于全面准确评价细胞凋亡率的检测技术。方法选取地塞米松诱导胸腺细胞凋亡模型,用流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法对处于不同凋亡阶段的胸腺细胞凋亡率进行检测分析。结果流式细胞分析对于早期凋亡胸腺细胞的检测不仅具有高度灵敏性,而且可有效区分凋亡与坏死细胞,但对于凋亡晚期细胞膜严重受损乃至破碎的细胞,单纯流式细胞仪检测不能有效反映真实凋亡率;借助琼脂糖凝胶电泳法可检测破碎后释放到胸腺组织或培养基内的DNA碎片;当凋亡严重导致大量细胞破碎降解时,对样本进行细胞计数比较亦有重要参考价值。结论为全面和准确地评估细胞凋亡率,需选择多种检测方法结合分析,细胞学及寡核苷酸片段检测技术是一个相当不错的选择。

改良溴化乙锭染色法快速检测基因组DNA

目的探讨一种耗时少、检出率高的基因组DNA检测方法。方法采用改良的溴化乙锭染色法检测提取到的样本基因组DNA。采用分光光度仪进行敏感性验证,聚合酶链式反应确认该方法能否用来检测PCR产物。结果改良的溴化乙锭染色法显著减少基因组DNA的上样量,提高基因组DNA的检测敏感性,节省操作时间,无需loading buffer,并可粗略估计基因组DNA浓度。结论改良的溴化乙锭染色法只适用于初筛样本基因组DNA,不能用于评估DNA片段的长度。

肿瘤患者血清乳酸脱氢酶及其同工酶电泳图谱的变化

目的 :探讨不同肿瘤患者血清乳酸脱氢酶 (lachicdehydrogenase ,LDH)活性及其升高者同工酶图谱的变化规律。方法 :我们用比色法对 12 97例肿瘤患者的LDH活性进行测定 ,用琼脂糖凝胶电泳法对 2 90例LDH活性升高肿瘤患者和 30例健康者的同工酶进行观察。结果 :2 2 4 %的肿瘤患者血清LDH升高 ,LDH活性升高的肿瘤患者84 4 %的存在着同工酶图谱异常。LDH活性升高的肿瘤患者的同工酶谱异常表现为L3 ↑、L4↑、L5↑、L1↓、L2 ↓的规律。结论

质粒DNA构型分离和分析方法研究进展

作为基因传递的载体,质粒DNA已被广泛应用于DNA疫苗和基因治疗。质粒DNA存在不同的构型,其中超螺旋构型的质粒在细胞中的转染和表达效率最高。美国食品与药品监督管理局在2007年发布了质粒DNA疫苗的工艺指导原则,建议超螺旋构型的比例大于80%,因此建立高灵敏度和高分辨率的方法用于质粒DNA构型分离和分析具有重要意义。就近年来质粒DNA构型的分离和分析方法进行了综述,主要包括琼脂糖凝胶电泳法、液相色谱法和毛细管凝胶电泳法,并对未来质粒DNA构型分离和分析方法的发展提出了展望。

安宫牛黄散中的朱砂雄黄对感染性脑水肿大鼠乳酸脱氢酶及其同工酶的影响

目的研究生理、病理状态下安宫牛黄散中的朱砂、雄黄对机体作用的不同特点,探讨复方中朱砂、雄黄的药理作用机制。方法将SD大鼠随机分成6组(8～10只/组) :正常组,正常加安宫牛黄散(下简称整方)组(2 78mg/kg) ;正常加除去朱砂、雄黄的安宫牛黄散(下简称拆方)组(2 2 2. 7mg/kg) ;脑水肿模型组(一侧大鼠颈总动脉注射百日咳杆菌2 50亿/kg) ;模型加整方组(造模前1h给药2 78mg/kg) ;模型加拆方组(造模前1h给药2 2 2 . 7mg/kg)。一次给药后5h(模型组注菌后4h)采血、制备脑匀浆。用比色法测定脑组织、血清中乳酸脱氢酶(LDH)总活力,琼脂糖凝胶电泳法测定血清中乳酸脱氢酶同工酶LDH1 -5 百分酶活力。结果与正常组比较,模型组LDH总活力、LDH1 、LDH2 百分酶活力显著升高(P <0 .0 1) ;正常加整方组、正常加拆方组LDH总活力升高(P <0 . 0 5) ,LDH1 、LDH2 百分酶活力均显著升高(P <0 . 0 1)。LDH4、LDH5 百分酶活力下降(P <0. 0 1) ,但除LDH5 外,整方组和拆方组各项酶活力组间差异无显著性。与模型组比较,模型加整方组、模型加拆方组LDH总活力显著下降(P <0 . 0 1) ,LDH5 百分酶活力显著升高(P <0 .0 1) ,但两组间差异无显著性;模型加整方组LDH2 、LDH3 百分酶活力显著下降(P <0 . 0 1) ,LDH1 。

土壤细菌DNA的抽提及分析

应用不同的方法从土壤中分离细菌DNA ,以紫外分光光度法及琼脂糖凝胶电泳法分析所得细菌DNA的纯度与得率 ,比较不同的细菌收集缓冲液、细菌裂解缓冲液、细菌裂解过程及不同的抽提修饰步骤对土壤细菌DNA抽提结果的影响 ,确定了最佳的土壤细菌DNA抽提方案 .以该方案对土壤细菌DNA进行了大规模的抽提 ,所得产物的A2 60 /A2 80 为 1.6 8,A2 60 /A2 3 0 为 0 .87,得率w(DNA/干土 )为 1.90 μg/g .在土壤细菌中加入 1μg标准λDNA进行了 3次回收实验 ,平均回收率为 82 .33%.

吴茱萸碱诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制研究

目的 研究吴茱萸碱 (evodiamine)诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子生物学机制。方法 用结晶紫法和琼脂糖凝胶电泳法以及用两种caspase的蛋白酶抑制剂测定细胞凋亡过程中caspase的信号传导路径。结果 吴茱萸碱可诱导HeLa细胞的细胞膜皱缩、细胞质浓集及凋亡小体的形式 ,并清晰可见以 1 80bp倍数裂解的DNA梯形电泳带的出现。抑制剂VAD fmk(caspase家族总抑制剂 )和DEVD fmk(caspase 3抑制剂 )能部分抑制HeLa细胞的凋亡。结论 Evodiamine诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡 ;

肝病患者血清酸性α-醋酸萘酯酶及其同工酶的变化

目的:探讨肝病患者血清酸性α-醋酸萘酯酶(acid alpha naphthyl aetate esterase,α-ANAE)及其同工酶的临床应用价值. 方法:通过比色法测定血清ANAE总活性.ANAE同工酶的检测采用琼脂糖凝胶电泳法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法. 结果:肝病患者包括肝炎、肝硬化及肝癌血清ANAE含量均低于对照组,肝硬化组及肝癌组明显低于肝炎组.通过琼脂糖凝胶电泳法可以在肝病患者血清中检出两种ANAE同工酶异常谱形.聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出更多ANAE同工酶谱带. 结论:血清ANAE含量测定可作为评价肝细胞变性坏死、肝脏合成功能异常的一项血清学指标.肝病患者血清中检出的异常ANAE同工酶谱带性质、组成及在临床应用上的价值还有待于进一步探讨.

Fas转导大肠癌细胞诱导其凋亡的实验研究

目的:观察Fas转导大肠癌细胞株诱导大肠癌细胞凋亡效应,可望为进一步研究大肠癌的Fas基因治疗提供实验依据。方法:以流式细胞术(FCM)及琼脂糖凝胶电泳法检测Fas转导大肠癌细胞凋亡效应。实验分四组;a.LoVo细胞组b.LoVo细胞+Fas抗体组c.LoVo转导细胞组d LoVo转导细胞+Fas抗体组。结果:Fas转导大肠癌细胞株+Fas抗体组(d)细胞凋亡率明显高于a、b、c组。结论:Fas表达细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径。

颈型颈椎病患者血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶及其同功酶的含量变化分析

目的：探讨颈型颈椎病患者血清肌酸激酶（CK）、肌型肌酸激酶（CK-MM）、乳酸脱氢酶（LDH）及其同功酶的水平。方法应用病例对照研究，选择颈型颈椎病患者80例，对照组80例，均取静脉血，应用琼脂糖凝胶电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法和酶动力学法测定两组人群血清中总CK及其肌型同功酶、总LDH及其同功酶的活力。结果观察组血清CK总活力[（l54.93±58.76）IU/L]高于对照组[（l30.13±55.89）IU/L]，差异有统计学意义（P〈0.01）；观察组血清CK-MM同功酶中CK-MM1活力[（46.32±5.21）IU/L]低于对照组[（54.78±7.13）IU/L]（P〈0.05），CK-MM2活力[（33.11±5.02）IU/L]与对照组[（31.30±5.43）IU/L]比较无明显差异（P〉0.05）， CK-MM3活力[（23.12±4.32）IU/L]高于对照组[（12.78±3.32）IU/ L]（P〈0.01）；观察组CK-MM3/CK- MM 1比值（0.51±0.62）高于对照组（0.22±0.19）（P〈0.01）。观察组血清肌型同功酶LDH5虽高于对照组，但无明显差异（P〉0.05）。结论颈型颈椎病患者血清CK、LDH及其同功酶发生变化，说明此类患者肌肉有损伤，CK是其血清中变化较敏感的指标。

铁对过氧化氢诱导细胞凋亡的保护作用研究

铁是机体必需元素之一,同时又参与机体活性氧介质的生成。本文探讨了铁对过氧化氢诱导细胞凋亡的影响。方法是以细胞系Ｋ５６２为对象,采用流式细胞仪、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳和形态学的方法检测细胞凋亡的发生和细胞周期的改变。结果显示,０．００１μＭ的Ｈ２Ｏ２作用Ｋ５６２细胞２４小时,能明显地诱导细胞发生凋亡,作用持续至４８小时;１ｍｇ/ｍｌ的ＦｅＳＯ４单独作用对细胞的增殖没有明显作用,也不诱导细胞凋亡;同时加入Ｈ２Ｏ２和ＦｅＳＯ４作用４８小时,细胞凋亡比例明显低于Ｈ２Ｏ２作用组(Ｐ＜０．０１),并伴有细胞周期Ｇ２/Ｍ期的阻滞。结论:在本文培养体系中,铁不能诱导Ｋ５６２细胞凋亡,相反还对过氧化氢诱导的细胞凋亡具有保护作用,其作用机制可能是延长了细胞在Ｇ２/Ｍ期阻滞的时间,以利于受损细胞恢复,从而降低了凋亡比例。

唾液乳酸脱氢酶同工酶的探讨

唾液乳酸脱氢酶同工酶的探讨南国华，黄南洁，熊丽萍（南昌生物化学教研室南昌３３０００６）唾液类同血清，属一种体液。近年来，唾液的研究已日趋重视，并发现唾液有其特异成分及功用￣［１～５］。本文用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳两法检测人体唾液，发现...