新课标生物实验室新增实验与试剂盒介绍——琼脂糖凝胶电泳试剂盒

本试剂盒依据琼脂糖凝胶电泳实验原理，提供琼脂糖、50×电泳缓冲液和核酸荧光染料、6×Loading Buffer。本产品提供的核酸荧光染料是一种新型核酸荧光染料，对人体无毒害。使用时用适量电泳缓冲液将琼脂糖溶解制胶，然后将样品与Loading Buffer、核酸荧光染料混匀后上样，即可进行琼脂糖凝胶电泳实验。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。

盐酸黄连素作为脱氧核糖核酸荧光染料染色效果的研究

考察了盐酸黄连素(berberine hydrochloride)的荧光强度与双链DNA的相关性;优选盐酸黄连素在琼脂糖凝胶电泳中的最佳条件;将其染色效果与溴化乙锭(EB)进行比较;并从相对迁移率角度研究盐酸黄连素对DNA凝胶电泳的影响。结果显示,双链DNA对盐酸黄连素有明显的荧光增强作用,荧光强度与dsDNA的浓度正相关;凝胶中10 mg/L的盐酸黄连素可分辨出10 ng的100 bp DNA条带,在完全相同的操作条件下,对于小片段dsDNA,其灵敏度略低于EB。因盐酸黄连素在碱性溶液中带正电荷,使DNA相对迁移率减小,但较染料EB的影响小。该研究为盐酸黄连素在日常分子生物学研究中的应用提供了理论依据。盐酸黄连素可以作为琼脂糖凝胶电泳中DNA的荧光染料,其荧光强度能够满足常规应用,可以替代强致癌性染料EB。

高灵敏度荧光染料SYBR的性质及应用

随着聚合酶链反应（PCR）仪的大量普及，PCR产物检测成为临床实验室和科研试验的常规过程。这些产物一般是通过电泳（琼脂糖凝胶电泳或PAGE）后再进行DNA和（或）RNA染色来判断，但传统的核酸染料存在一些不可克服的缺点，如溴乙啶（EB）具强致癌性、硝酸银（AgNO，）染色过程复杂繁琐等。

DNA显示中三种染色方法的比较

目的 比较聚丙烯酰胺凝胶 -银染 (简称银染 )、SYBRGreenⅠ及溴化已锭 (EB)染色方法在定量聚合酶链反应 (Q -PCR)检测DNA的敏感性。方法 分别用聚丙烯酰胺凝胶 -银染、琼脂糖电泳 -SYBRGreenⅠ染色及EB染色方法检测相同条件下PCR产物 ,进行光密度定量分析及比较。结果 2 4个循环PCR检测DNA产物 :SYBRGreenⅠ染色与银染均见清晰带并可定量分析 ,而EB染色在 2 8个循环次数尚可清晰带型 ;SYBRGreenⅠ及EB染色历时 30min ,而银染则历时 4h～ 5h。结论 在检测DNA时 ,SYBRGreenⅠ染色敏感性同银染 ,但比EB强 ;而且比银染更简单、省时、经济。

小檗碱和溴化乙锭与DNA的光谱学作用研究

利用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、圆二色谱、琼脂糖凝胶电泳方法研究了小檗碱(berberine)和溴化乙锭(EB)与ct-DNA的光谱学作用.在ct-DNA存在时,berberine和EB的荧光强度都有较大的提高,pH的改变对二者荧光光谱的发射峰位与强度影响不大;紫外-可见吸收光谱随ct-DNA浓度的增加,表现出减色效应;二者都使ct-DNA的圆二色谱正负峰的吸收强度有所增加;琼脂糖凝胶电泳实验表明,EB-DNA体系的发光强度高于berberine-DNA体系.在DNA的定量测定中,可用无毒、副作用的小檗碱代替有致癌性的溴化乙锭,为安全、无环境污染、定量测定DNA提供了新试剂使用基础.

复方苦参注射液与5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨复方苦参注射液与5氟尿嘧啶对大肠癌LoVo细胞生长抑制及诱导凋亡的影响。方法台盼蓝染色法测定药物对LoVo细胞抑制作用与时间和剂量的关系,用荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳对细胞凋亡进行检测。结果台盼蓝实验表明,经40μg/L复方苦参注射液单独处理细胞,LoVo细胞增殖的抑制率24h,12.8%;48h,25.4%;72h,42.2%。12.5mg/L5Fu单独处理的LoVo细胞,其增殖抑制率24h,16.3%;48h,23.1%;72h,29.3%;而当两者合用时,对LoVo细胞增殖的抑制率24h,26.8%;48h,72.3%;72h,84.6%。复方苦参注射液和5Fu对LoVo细胞的生长均有抑制作用,并诱导发生凋亡。实验范围内其细胞凋亡成时间与剂量依赖关系。并且复方苦参注射与低浓度的化疗药物有协同作用,可产生较强的抑制细胞增殖的作用。结论复方苦参注射具有直接的抗肿瘤作用,并且具有增强5Fu化疗药物作用的功效。

Cu(phen)_2^(2+)与6-巯基嘌呤及DNA间的相互作用

在TrisNaCl(pH=7.2)缓冲溶液中,应用伏安法、电子吸收光谱分析、溴化乙锭荧光分析、粘度测量和琼脂糖凝胶电泳等技术研究了Cu(phen)22+(phen=1,10邻菲咯啉)与6巯基嘌呤(6MP)及DNA间的相互作用。结果表明,Cu(phen)22+与6MP发生了明显的相互作用,其作用产物不仅与小牛胸腺DNA具有更强的相互作用,并且在H2O2和抗坏血酸存在下对质粒pBR322DNA具有更强的断裂能力,与DNA的作用模式可能为部分插入模式。