血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳综合实验设计

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验是生物化学实验课程中的经典实验,但因其操作单一、等待时间过长,学生的收获感不强,有必要进行综合设计。把上课时间分为三个时段,在各个时段设计多种学习活动:串讲原理、做练习题使相关知识融会贯通;阅读文献,提出疑问;设置试误样品组、做相关实验,启发学生顿悟。通过这些学习活动,学生不仅学会了电泳技术的基本操作,还深刻理解了实验原理,强化了勇于探索的科学精神,体会了顿悟的快乐。

琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳在SSR鉴定杂交油菜种子纯度中的比较

对3对候选引物SR85、SR332、SR407所扩增的秦优33杂交种及其父母亲本的DNA-SSR片段进行琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。两种电泳检测结果比较表明,(1)利用琼脂糖凝胶电泳分离后,3对候选引物对杂交种所扩增的SSR条带均为父母亲本条带的互补。其中引物SR332所获的两条互补条带的迁移率相差大,电泳图谱能清晰鉴别出父本、母本及杂种植株。引物SR85和SR407杂交种的互补条带迁移率相近,在鉴定中易出现人为误差。(2)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,引物SR332所扩增条带未能区别杂交种与父本植株。引物SR85和SR407对杂交种所扩增的条带均为父母亲本所扩增条带的互补,相互差异显著,条带清晰稳定。可见,琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳都是SSR技术鉴定种子纯度的有效途径,种子纯度分析应根据区别材料的遗传关系和引物分析表现来选择不同的电泳介质。

全自动琼脂糖凝胶电泳检测地中海贫血7500例结果分析

目的:探讨全自动琼脂糖凝胶电泳仪在地中海贫血(简称地贫)筛查中的应用。方法:采用全自动琼脂糖凝胶电泳仪对7500例标本进行Hb电泳,测定异常Hb、HbA2及HbF含量,其中439例同步做地贫基因检测。结果:7500例中检出β地贫615例,异常Hb245例;439例电泳对比基因检测结果显示β地贫、HbH病的电泳检测结果与基因检测结果完全吻合,HbCS的检测结果吻合率达99.77%。以HbA2≤2.55%诊断α1地贫,敏感度和特异度分别为88.9%和73.3%,以HbA2≤2.65%诊断α2地贫敏感度和特异度分别为81.3%和66.3%。结论:全自动琼脂糖凝胶电泳分辨率高,能准确分析出HbA2、HbH、HbCS、HbF异常增高及其它异常Hb,能很好诊断β地贫、HbH病和HbCS。

尿蛋白SDS琼脂糖凝胶电泳方法建立及临床应用

目的 建立应用于临床的尿蛋白十二烷基硫酸钠 (SDS) 琼脂糖凝胶 (AGE)电泳方法。方法 分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型 4种琼脂糖、不同的缓冲对、电压和电泳时间进行实验 ,确定最佳的分离条件 ,建立测定方法。结果 当Ⅳ型琼脂糖凝胶浓度为4 0g/L ,SDS含量为 1g/L ,在pH 7.0的AMP 咪唑 HCl缓冲体系下进行电泳 ,可以有效地将尿蛋白按分子量大小进行分离。 5 7份临床尿蛋白阳性标本电泳结果表明 ,生理性蛋白尿 2 4例 ,中、高分子蛋白尿 5例 ,小分子蛋白尿 11例和混合型蛋白尿 17例。结论 本法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点 ,可以将尿蛋白按分子量大小分为小分子、中分子以及混合型 ,对肾脏疾病的受损部位和损伤程度的判断具有较高的价值 ,适于基层实验室的常规开展。

影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素

在不同的电压与载样量下,分别使用溴化乙锭(EB)与新型核酸染料GoldViewna II及GoldView对凝胶中的DNA进行染色,观察电泳条带扭曲程度,了解电压、载样量与核酸染料对琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的影响。使用GoldViewna II染色,当电压≥10V/cm时,DNA条带的扭曲程度随载样量增大而加剧;当DNA载样量≥10ng时,DNA条带的扭曲程度随电压升高而加剧。使用EB染色,仅当载样量≥50ng时,条带出现轻微扭曲,扭曲程度与电压无明显关系。结果表明使用GoldView染色,当电压不超过20V/cm或载样量不超过100ng时,DNA条带不扭曲。在琼脂糖凝胶电泳中,若要避免DNA条带扭曲干扰实验结果,使用GoldViewna II染色,若DNA载样量≥10ng,应控制电压≤5V/cm;使用EB染色,载样量应≤50ng;使用GoldView染色,可以使用20V/cm的电压缩短实验时间。

螺旋藻多糖的琼脂糖凝胶电泳鉴别

目的用琼脂糖凝胶电泳对螺旋藻多糖进行定性鉴别。方法利用螺旋藻多糖与肝素、硫酸软骨素、标准硫酸化的葡聚糖之间电荷密度及分子量的差异 ,在巴比妥缓冲液中进行琼脂糖凝胶电泳。结果根据电泳迁移率 ,可明显区分螺旋藻多糖与其他多糖。结论该法重现性较好 ,操作简单 。

琼脂糖凝胶电泳操作中值得注意的几个问题

针对琼脂糖凝胶电泳中经常出现的电泳图谱条带模糊、弯曲 ,图谱背景荧光较强 ,凝胶胶面不平以及重复性差等问题 。

琼脂糖性质对凝胶电泳法分离金属性和半导体性单壁碳纳米管的影响

利用琼脂糖凝胶电泳分离单壁碳纳米管(SWCNTs)技术,考察了MB,Agarose,Agarose B和LRU 4种琼脂糖对SWCNTs分离效率的影响.紫外-可见-近红外(UV-Vis-NIR)吸收光谱研究结果表明,不同的琼脂糖对SWCNTs中s-SWCNTs的分离效率影响较小,而对m-SWCNTs的分离效率影响较大.分析4种琼脂糖凝胶的凝胶强度和凝胶网孔尺寸等发现,影响SWCNTs中m-SWCNTs分离效率的主要因素是琼脂糖的凝胶强度和琼脂糖凝胶形成的网孔尺寸,小的凝胶网孔尺寸有利于m-SWCNTs富集,高凝胶强度则不利于其富集.

对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识

目的 探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法 将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果 第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分子 ;再次电泳回收的单一目的片段中 ,肉眼已看不见其它DNA分子 ,其纯度已大为提高 ;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段。结论 琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开 ,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子。

琼脂糖凝胶电泳法测定血清中各种脂蛋白胆固醇

对琼脂糖凝胶电泳法同时测定血清极低密度脂蛋白（ VLDL）、低密度脂蛋白（ LDL）、高密度脂蛋白（ HDL）和脂蛋白 (a)[Lp(a)]的胆固醇 [即 VLDL- C、 LDL- C、 HDL- C和 Lp(a)- C]含量的方法进行评价。方法采用 Helena REP全自动快速电泳系统分离血清 VLDL、 LDL、 HDL和 Lp(a)，然后结合胆固醇酶染色法同时测定 VLDL- C、 LDL- C、 HDL- C和 Lp(a)- C的含量。分析了该法的精密度、准确度和干扰因素，并将该法与传统方法如测定 HDL- C的磷钨酸-镁沉淀法（ PTA- Mg2＋法）、测定 LDL- C的聚乙烯硫酸沉淀法（ PVS法）及测定 Lp(a)的免疫透射比浊法（ ITA法）进行比较。结果电泳法测定 VLDL- C、 LDL- C和 HDL- C的批内 CV分别为 5.16％～ 7.46％、 1.26％～ 3.28％、 3.78％～ 5.86％；批间 CV分别为 8.35％～ 11.25％、 2.78％～ 4.08％、 4.23％～ 6.36％。检测线性范围总胆固醇为 1.04～ 10.35 mmol/L，基本不受溶血、黄疸和脂血干扰。 VLDL- C、 LDL- C和 HDL- C的平均回收率分别为 90.3％、 94.3％和 89.6％。电泳法与传统法测定 LDL- C、 HDL- C的相关系数（ r）分别为 0.9609、 0.9557。电泳法测定 Lp(a)- C与 ITA法测定 Lp(a)的 r为 0.9235。以该法检测北京地区 98例健康人， HDL- C、 VLDL- C、

琼脂糖凝胶电泳及SSCP法在淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排检测中的应用

目的比较琼脂糖凝胶电泳和单链构象多态性分析(SSCP)法对淋巴瘤克隆性T细胞受体(TCR)γ基因重排的检测结果,探讨TCRγ基因重排的有效检测方法。方法从T、B细胞淋巴瘤及反应增生性淋巴组织中提取DNA,分别用两组TCRγ基因重排通用引物进行PCR扩增,扩增产物分别进行琼脂糖凝胶电泳和SSCP。结果T、B细胞淋巴瘤均出现克隆性TCRγ基因重排。SSCP法两组PCR产物在T细胞淋巴瘤中的阳性率分别为77.6%和75.9%,B细胞淋巴瘤均为10%;与SSCP相比,琼脂糖凝胶电泳中两组PCR扩增产物的假阳性率分别为15.3%和14.4%,所有反应增生性淋巴组织均出现假阳性。结论T、B细胞淋巴瘤中都存在克隆性TCRγ基因重排,仅用琼脂糖凝胶电泳检测可能出现假阳性,SSCP灵敏性较高。

用Helena SPIFE琼脂糖凝胶电泳系统进行血清蛋白电泳

目的 :评价HelenaSPIFE琼脂糖凝胶电泳 (AGE )系统进行血清蛋白电泳的方法。方法 :用HelenaSPIFE全自动快速电泳系统进行血清蛋白电泳 ,确立了该法的参考值范围 ,分析了该法的精密度和干扰因素 ,同时将该法与传统的醋酸薄膜电泳方法 (CAE)进行了比较。结果 :AGE测定了 72例正常人血清中白蛋白 ,α1球蛋白 ,α2球蛋白 ,β球蛋白 ,γ球蛋白的浓度 ,确立其参考值范围分别为 3 3 2～ 49 8g/L ,1 8～ 3 8g/L ,4 6～ 9 3g/L ,7 3～12 3g/L ,9 5～ 19 4g/L。批内、批间精密度在 1 2 1%～ 2 77%和 3 70 %～ 5 5 7%之间。基本不受黄疸、血脂和溶血的干扰。与CAE比较 ,5个蛋白区带中 ,除肾病综合征的 β球蛋白、急性时相反应的α2 球蛋白外 (相关系数r分别为 0 788和 0 769) ,其他区带的相关性好 ,r值在 0 82 3和 0 975之间。结论 :电泳法 (AGE)测定值与传统法基本一致 ,AGE且自动化 ,操作简便 ,精密度高 。

血清α-醋酸萘酯酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法及临床应用

为简化α－醋酸萘酯酶同工酶检查技术，建立琼脂糖凝胶电泳法。１０ｇ／Ｌ琼脂糖－ＰＶＰ和ｐＨ７．４０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液，泳池ｐＨ８．６，μ＝０．０６巴比妥缓冲液，滤纸刺槽加样，电压１５０Ｖ，电流２ｍＡ／ｃｍ电泳４０ｍｉｎ，搭桥填充染色。染色液由α－醋酸萘酯ｐＨ６．２０．１ｍｏｌ／ＬＰＢ液和固蓝Ｂ盐组成，３７℃染色２０ｍｉｎ，醋酸漂洗比色。结果对照组（ｎ＝３０）α－ＡＮＥ同工酶谱带３～４条（Ｅ１、Ｅ１ａ、Ｅ２、Ｅ３）着色强度Ｅ３＞Ｅ１＞Ｅ１ａ＞Ｅ２，ｘＥ３占８８％，Ｅ１～Ｅ２１２％左右，相对电泳位置Ｅ１：ｐｒｅＡｌ／Ａｌ，Ｅ１ａ：Ａｌ／α１，Ｅ２：ｐｒｅ－α２，Ｅ３：α２／β，Ｒｆ分别为０．５４５、０．５２７、０．４３６、０．３６４。Ｅ３区组成复杂，用ＮＡＮＡ酶水解和ＷＧＡ亲加试验证明它富含ＳＡ和ＧｌｃＮＡＣ的一组不均一的糖蛋白。谱形异常的典型病例有Ⅰ型在症糖尿病和部分肝癌患者，它除有正常谱带外，前者多Ｅ４和Ｅ５，其色度比（％）Ｅ４０．１１４，Ｅ５０．１９８，相对电泳位置在β和β与Ｐｒｅ－γ之间，Ｒｆ＝０．２５４，０．１８２。肝癌病人谱带也多１～２条（Ｅ５和Ｅ６）位于Ａ／ｐｒｅ－γ和ｐｒｅ－γ，?

琼脂糖凝胶电泳测定天门冬氨酸氨基转移酶同工酶

目的建立琼脂糖凝胶电泳法检测人类血液中天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)同工酶。方法我们自制琼脂糖凝胶板 ,加入血清样本 ,在电泳缓冲系统中进行电泳 ,通过摸索一系列测定条件 ,能快速、简便地把血清中AST分成二条区带 ,即 ASTs和 ASTm ,然后进行底物孵育、显色、扫描 ,可对 ASTs和 ASTm定量分析。结果我们测定了 30例肝癌病人 ASTm ,其范围为 18.8～ 10 8.1U / L ,2 2例急性肝炎病人 ASTm其范围为 2 9.5～ 2 5 8.4U / L ,2 0例心肌梗塞病人 ASTm其范围为 2 2 .8～ 135 .4U / L。结论 AST同工酶测定对进一步了解肝细胞、心脏细胞结构损伤的程度 ,估价其损伤的预后和对病人病程的监护具有一定帮助意义。

琼脂糖凝胶电泳的条件优化——质粒DNA重组片段的限制性内切酶谱鉴定

随着质粒构建,转染,扩增等基因表达相关的分子生物学技术在科研中的广泛开展,DNA的琼脂糖凝胶电泳技术由于其操作简单、快速、灵敏等优点,已成为分离和鉴定生物大分子（核酸）的重要手段和常用方法。影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素很多,包括DNA分子大小和构象,琼脂糖浓度,所加电压,电泳缓冲液的离子浓度,

琼脂糖凝胶电泳检测尿粘多糖方法的建立

目的 建立一种简便、快速、准确、易于推广应用的粘多糖贮积症的诊断方法。方法 采用琼脂糖凝胶电泳，以硫酸皮肤素（ＤＳ）及硫酸软骨素（ＣＳ） 为标准对照，检出患者尿中的粘多糖。结果 在３２３ 名疑诊病人中检出阳性者９６ 例，与临床相符合。结论 本法可作为临床上粘多糖贮积症的初步诊断及初步分型的方法。

琼脂糖凝胶电泳法测定糖化血红蛋白及其临床应用

目的 采用琼脂糖凝胶电泳的方法测定糖化血红蛋白 (Hb Alc) ,了解 Hb Alc与空腹血糖的关系。方法 取正常人及糖尿病人 EDTA- K2抗凝全血 2 32例 ,制成血红蛋白溶液 ,使用法国 sebia公司 sebia HYDRASYS电泳仪及光密度计扫描仪 ,用琼脂糖凝胶进行电泳分离和光密度计扫描定量测定 Hb Alc;在全自动生化分析仪上用己糖激酶法测定空腹血糖。结果 对照组的 Hb Alc平均值 (% )为 x± s=5 .4 1± 0 .94 ,血糖的平均值 (mmol/ L )为 x± s=4 .92± 0 .87;糖尿病人的 Hb Alc平均值 (% )为 x± s=11.0 6± 4 .3,血糖的平均值 (mmol/ L )为 x± s=10 .86± 3.0 4 ,P<0 .0 1,血糖值与Hb Alc值有显著相关性 ,r=0 .985 ,回归方程 Y=1.10 15 x+1.815。结论 该方法标本用量少 ,分辨率高 ,重复性好 ,结果不受温度及胎儿血红蛋白的影响 ,Hb

血红蛋白全自动琼脂糖凝胶电泳在β地中海贫血中的应用及评价

目的 评价全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳在 β地中海贫血中的应用。方法 采用全自动琼脂糖凝胶进行血红蛋白 (Hb)电泳 ,测定 Hb- A2 及 Hb- F含量 ,同时采用 Hb- F碱变性试验对同一标本进行Hb- F含量测定 ,比较二种方法对 Hb- F含量的检测结果。结果 检测临床标本 80 0例 ,发现 Hb- A2 增高者 (含量 >4% ) 1 3 0例 ,阳性率为 1 6 .3 %。测定 Hb- A2 的批内 CV<5 % ,批间 CV<8%。同时伴有 Hb- F增高者 5 0例。对于 Hb- F碱变性试验测得 Hb- F含量异常高者 (含量 >3 .1 % ) ,琼脂糖凝胶电泳可以分辨出Hb- F区带 ,且可进行扫描定量 ,测出的 Hb- F含量与 Hb- F碱变性试验基本一致 ;如 Hb- F碱变性试验测定 Hb- F含量在正常范围者 (1 .0 %～ 3 .0 % ) ,电泳便分辨不出 Hb- F区带 ,与 Hb- A一起组成 Hb- (A+F)区带。结论 全自动血红蛋白琼脂糖凝胶电泳法能够分辨出 Hb- A2 及 Hb- F异常增高者 ,为 β地中海贫血的诊断提供重要数据。

肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法

为保证肿瘤电泳标本的拍摄质量 。