利用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体

目的:采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法:使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果:获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论:应用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体是一种简单、有效的方法。

重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究

目的比较两种方法纯化rhIL-31的效果。方法将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coli.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析。结果镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高。结论比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好。

蛋白A的固定及在抗体亲和纯化中的应用

目的以蛋白A作配基偶联活化的Sepharose 4FF后纯化兔免疫蛋白IgG。方法以环氧氯丙烷(ECH)活化凝胶,正交试验确定最佳活化条件;以纯化数据确定抗体兔免疫蛋白IgG纯化最佳缓冲液盐浓度。结果 Sepharose 4FF最佳活化条件:ECH浓度20%(v/v),0.8 mol/L NaOH添加量为1 mL/1 g Sepharose 4FF湿胶,活化时间2.5 h,反应温度40°C。结论建立将活化琼脂糖凝胶Sepharose 4FF与蛋白A偶联的条件,可应用于纯化兔免疫蛋白IgG。

抗IL-4R单链抗体原核表达载体的构建与表达

目的通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗白细胞介素-4受体(IL-4R)鼠抗人单链抗体(scFv)。方法在前期研究结果的基础上优化抗IL-4R scFv序列,优化后分析scFv序列,构建重组质粒pET-32a-scFv,将该重组质粒酶切鉴定,将其转入BL21(DE3)原核表达菌进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析检测,对表达蛋白进行纯化和复性,通过SDS-PAGE分析抗IL-4R单链抗体的分子质量,运用Western blot检测融合蛋白的特异性。结果插入pET-32a载体的scFv序列长度761 bp,抗IL-4R单链抗体的分子质量在45 ku左右,重组蛋白具有较高的特异性。结论本实验成功构建pET32a-scFv原核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫反应性,为进一步研究抗IL-4R单链抗体作为药物靶点提供了工作基础。