改良琼脂纸片扩散法检测AmpC酶的可行性探讨

目的探讨改良琼脂纸片扩散(K-B)法检测AmpC酶的可行性,并分析其与三维确认试验的相关度。方法K-B法按美国国家临床实验室标准委员会(CLSI)规定检测,用头孢西丁敏感试验初筛AmpC酶,头孢西丁耐药再做三维确认试验,改良K-B法检测方法见正文。结果改良K-B法检测AmpC酶与三维确认试验结果基本一致。结论基层医院细菌室检测AmpC酶用改良K-B法可取代三维确认试验及其他确认试验。

纸片琼脂扩散法检测AmpC酶的探讨

目的建立一种简便、快速适用于普通临床微生物室的AmpC酶表型检测方法。方法分别采用纸片琼脂扩散法和三维实验检测244株试验菌中产AmpC酶的情况。结果三维实验检测244株试验菌中,产AmpC酶的有67株,产酶率为27.45%(67/244),其中阴沟肠杆菌46.67%(21/45),铜绿假单胞菌35.09%(20/57),嗜麦芽寡养假单胞菌33.33%(2/6),鲁民不动杆菌20.0%(1/5),鲍曼不动杆菌26.83%(11/41),产气肠杆菌28.6%(4/14),大肠埃希菌10.0%(5/50),肺炎克雷伯菌11.54%(3/26)。纸片琼脂扩散法检测产酶率24.59%(60/244),经统计学处理得出两者检测无显著性差异。结论纸片琼脂扩散法是一种简便快速的AmpC酶表型检测方法,易在普通实验室推广。

K-B纸片琼脂扩散法检测细菌药物敏感试验的影响因素分析

细菌药物敏感试验的结果是临床合理用药的重要依据,确保其结果的准确性,必须了解试验中培养基种类及质量、试验用药的纯度和菌液的浓度、药物的含量及孵育时间等诸多因素的影响。本文主要探讨K-B纸片琼脂扩散法中的影响因素。

药敏试验-纸片扩散法影响因素的探讨

原卫生部于2004年颁布了《抗菌药物临床应用指导原则》，指出医院应尽早明确病原菌和药敏试验结果，根据药敏结果制定治疗方案。及时、准确的药物敏感试验结果是临床进行抗菌药物合理应用的重要参考指标之一，对防止滥用抗生素引起的耐药菌株出现具有指导意义。纸片琼脂扩散法因其操作简便、成本不高、灵活性强，是目前临床上最为常用的药敏试验方法。但是药敏试验-纸片扩散法由于手工比重较大，技术人员的经验、抗菌药物的稳定性、细菌接种量等诸多因素直接影响着药敏试验准确性和可重复性。根据多年实践经验，笔者认为要获得精确的药敏试验结果必须重视以下环节。

氮杂尿苷对三株腐败菌抑菌活性的测定

目的:以二酮哌嗪为母核,对其结构修饰得到的30种化合物进行抑菌活性筛选,找到对大肠杆菌(E.coli)、腐败希瓦氏菌(Shewanella spp.)和铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)抑菌效果理想的化合物。方法:首先采用紫外吸收光谱法定期测定放入光照振荡培养箱中菌悬液和营养肉汤的吸光度,得到三株腐败菌的生长曲线。其次采用纸片琼脂扩散法对药物的抑菌活性进行筛选,从30种化合物中筛出有抑菌效果的化合物。最后采用肉汤稀释法结合紫外分光光度计测定最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration, MIC)。结果:氮杂尿苷对三株腐败菌的MIC均为3.42 mg/mL,且抑菌效果随着药物浓度的增大而增大。结论:氮杂尿苷对三种腐败菌具有较为显著的抑菌作用,这为后期防腐保鲜剂的研发提供了一定数据参考和理论支持。

四联药敏纸片同步检测ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶

目的建立一种简便、实用的方法,同步检测临床分离菌株的ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶,为临床选择抗生素提供依据。方法用亚胺培南、阿莫西林/棒酸、头孢他定、头孢噻肟(或头孢曲松、氨曲南)四纸片琼脂扩散法,根据各纸片间抑菌的协同、拮抗作用及耐药谱判断结果。结果200株革兰阴性杆菌中有55株单产ESBLs(27.5%),33株诱导高产AmpC酶(16.5%),19株同时产ESBLs和诱导高产AmpC(9.5%),有20株去阻遏突变高产AmpC酶(10.0%)。四纸片同步法分别与双纸片增效法、头孢西丁三维试验比较,检测ESBLs、高产AmpC酶的总符合率分别为94.7%和93.6%。增加头孢曲松和氨曲南两种基质,ESBLs、诱导高产AmpC、ESBLs/诱导高产AmpC的检出率分别提高了16.3%、12.1%、15.8%。结论此方法不需任何特殊设备,能准确、简便、快速检测革兰阴性杆菌的ESBLs或AmpC酶,并能检测出同时携带两种酶的菌株。

超广谱β-内酰胺酶快速检测方法研究

目的 寻找一种快速、准确、实用、价廉的ESBLs检测法。方法 增加培养基的营养 ,促进细菌繁殖 ,提高菌悬液浓度 ,利用TTC作为显色剂配制出新型的培养基 (简称TTC法 ) ,并与NCCLS推荐使用的ESBLs检测法 -标准纸片扩散确认法相比较。结果 两法符合率均达 98%以上 ,而TTC法在时间上缩短了 10h左右 ,仅需 6～ 8h。结论 本法快速、准确、实用、价廉 ,极适用于各大、小医院临床微生物实验室。

2006年度临床常见细菌分布及耐药性监测分析

目的了解2006年度本院细菌分布及对抗菌药物耐药情况,为临床抗感染治疗提供依据。方法药物敏感性试验采用琼脂纸片扩散法,耐药性分析采用WHONET 5.4软件。结果2006年度我院共收集患者首次分离株细菌1 497株,革兰阴性菌878株,革兰阳性菌400株,真菌219株。铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌是最常见菌,检出率分别为17.0%、13.2%、8.9%、7.0%、6.9%、4.7%、3.7%、3.2%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的比例分别为63.9%、82.1%,未发现对万古霉素和替考拉宁耐药的葡萄球菌。肠球菌对万古霉素耐药率为1.0%,对替考拉宁耐药率为3.8%。革兰阴性菌对亚胺培南-西拉司丁钠的敏感性最好,产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和克雷伯菌株的检出率分别为26.1%和34.2%。在痰标本中铜绿假单胞菌检出率最高,为22.2%,对亚胺培南-西拉司丁钠和头孢他啶敏感性最好;在血标本中大肠埃希菌检出率最高,共9株,占血标本阳性率的18.4%,对万古霉素敏感性最好,耐药率为0。结论加强细菌耐药性监测,以推动临床抗菌药物的合理使用。

局麻药与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星联用的抑菌效果

目的:探讨口腔科4种常用局麻药分别与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星联合的抑菌效果。方法:采用琼脂纸片扩散法,检测局麻药以0、5%、10%、15%、20%体积比例与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星液混合制备的药敏纸片所形成的抑菌环直径变化(每张滤纸片所含奥硝唑-甲磺酸培氟沙星纯药物总量一致)。结果:所有药敏纸片形成的抑菌环相互间无统计学差异(P>0.05)。结论:4种局麻药的分别与奥硝唑-甲磺酸培氟沙星联合的抑菌效果无影响,可以混合应用。

参菊洗剂体外抑菌作用

目的研究参菊洗剂的体外抑菌作用。方法采用琼脂扩散纸片法测定抑菌圈直径,采用液体培养液连续稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),采用琼脂培养液平板法测定最低杀菌浓度(MBC),并与市售某妇科洗液比较抑菌作用。结果参菊洗剂对5种病原菌株的抑菌作用明显优于相同浓度的市售某妇科洗液,差异有统计学意义(P<0.05);参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MIC分别为33.75,67.50,67.50,67.50,33.75 mg·m L-1;参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MBC分别为33.75,67.50,67.50,135.00,33.75 mg·m L-1。结论参菊洗剂具有较明显的抑菌和杀菌作用。

白色念珠菌拮抗菌株的筛选

目的筛选对白色念珠菌具有明显拮抗作用的菌株。方法通过纸片琼脂扩散法(KB法)观察各菌株对白色念珠菌的拮抗作用;再利用试管法观察有拮抗作用菌株对白色念珠菌的抑菌效果。结果KB法表明大肠埃希菌、甲型链球菌和卡他球菌对白色念珠菌无抑菌作用,表皮葡萄球菌、微球菌有抑菌作用,但抑菌环小;枯草杆菌有明显抑菌作用。试管法表明表皮葡萄球菌和枯草杆菌对白色念珠菌均有生物拮抗作用,其抑菌率分别为97%和897%。结论枯草杆菌是白色念珠菌的理想拮抗菌株。

紫茎泽兰提取液的抑菌活性研究

采用纸片琼脂扩散法、平板培养基连续稀释法对紫茎泽兰石油醚提取物进行了抑菌试验.结果表明,紫茎泽兰提取液对供试金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的生长均有一定程度的抑制作用,抑菌效果的顺序为金黄色葡萄球菌>大肠肝菌>枯草芽孢杆菌.因此,紫茎泽兰提取液在抑菌方面有一定的开发利用价值.

壳聚糖及其单体体外抑菌作用研究

[目的]主要研究食品级壳聚糖、水溶性壳聚糖、N 乙酰氨基葡萄糖、氨基葡萄糖硫酸氯化钾复盐的抑菌作用 [方法]利用纸片琼脂扩散法(K B法)观察对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、新型隐球菌有无抑菌作用,利用试管稀释法对有抑菌作用壳聚糖进行最小抑菌浓度(MIC)的测定 [结果]N 乙酰氨基葡萄糖、氨基葡萄糖硫酸氯化钾复盐无抑菌作用,食品级壳聚糖、水溶性壳聚糖有抑菌作用;食品级壳聚糖对大肠杆菌的MIC为2.5%,而对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、新型隐球菌的MIC为1.25%;水溶性壳聚糖对大肠杆菌的MIC为1.25%,而对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、新型隐球菌的MIC为0.625% [结论]氨基单糖及盐无抑菌作用,壳聚糖有一定的抑菌作用。

16种中药颗粒剂对5种耐药菌株的体外抑菌效果比较

目的 探讨黄芩等16种中药颗粒剂对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）等5种临床常见耐药菌的体外抑菌效果.方法 通过对中药药源的深入调查,选用16种具有消炎抗菌作用的中药颗粒剂,采用K-B纸片琼脂扩散法分别测量5种临床常见耐药菌的抑菌圈大小,同时各选用一种广谱抗生素作阳性对照,采用t检验与颗粒剂进行比较.结果 黄芩抑菌效果最好,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对其高度敏感,其他4种菌敏感度较低,抑菌圈直径在6～ 19mm之间;连翘、薄荷抑菌效果次之;板蓝根、金银花、菊花、土茯苓、大青叶、地丁、知母7种颗粒剂对这5种耐药菌没有抑菌效果;对于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,黄芩与万古霉素比较差异无统计学意义（P＞0.05）,其余颗粒剂均差于万古霉素（P＜0.05）;对于耐药绿脓杆菌,连翘与亚胺培南比较差异无统计学意义（P＞0.05）,其余颗粒剂均差于亚胺培南（P＜0.05）;对剩下的3种耐药杆菌,颗粒剂均差于亚胺培南（P＜0.05）.结论 部分中药颗粒剂对5种临床常见耐药菌有抑菌效果.

牛角瓜根的抑菌活性研究

以牛角瓜根为实验材料,采用索氏提取法,以4种不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇)对牛角瓜的根进行提取,并采用纸片琼脂扩散法对粗提物的抑菌活性进行了评价,供试菌包括白色念珠菌等6种真菌和金黄色葡萄球菌等7种细菌。结果表明:石油醚粗提物对枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、大肠埃希氏菌都表现出良好的抑菌活性,且抑菌效果接近或优于阳性对照氟康唑,对尖孢镰刀菌和鲍曼不动杆菌也表现出良好的抑菌活性;氯仿粗提物对白色念珠菌及粪链球菌表现出良好的抑菌活性;乙酸乙酯粗提物对粪链球菌表现出最好的抑菌活性;甲醇粗提物的抑菌活性较弱。

嗜血杆菌的分离及耐药性分析

目的了解衡阳市中心医院2010年10月至2011年11月嗜血杆菌的分离率、产酶率,并对其耐药性进行分析,指导临床合理用药,控制嗜血杆菌的流行。方法用嗜血杆菌选择性培养基对来自不同科室的607份临床标本(痰、咽拭子、支气管分泌物)进行分离培养,用卫星现象鉴定流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae,Hi)与副流感嗜血杆菌(H.parainfluenzae,Hp)、头孢硝基噻吩纸片进行β-内酰胺酶测定,采用琼脂纸片扩散(K-B)法检测Hi和Hp对10种抗菌药物的耐药性。结果共分离培养出嗜血杆菌136株,检出率为22.4%(136/607),其中流感嗜血杆菌31株,检出率为5.1%(31/607),副流感嗜血杆菌105株,检出率为17.3%(105/607);各科室中以呼吸内科检出率最高,检出率为9.7%(59/607),其次为儿科和心内科,分别为2.6%、2.8%。136株嗜血杆菌对青霉素普遍耐药,耐药率高达90.4%,对洛美沙星和氧氟沙星的耐药率较高,分别是68.4%、48.5%,对头孢噻肟、头孢他啶、头孢呋肟的耐药率分别是9.6%、11.8%、22.1%,对四环素类如:四环素、强力霉素的耐药率分别为38.2%、8.8%,对壮观霉素、头孢曲松全部敏感,共检出产β-内酰胺酶菌株32株,产酶率为23.5%(32/136)。结论该院呼吸道嗜血杆菌感染以副流感嗜血杆菌为主,以呼吸内科感染最为严重,其次为儿科和心内科,临床上治疗嗜血杆菌感染的有效药物是头孢曲松、壮观霉素。

复方咳喘灵抑菌作用初步研究

目的 :研究复方咳喘灵的抑菌活性。方法 :纸片琼脂扩散 (K B)法检测药物抑菌效应。结果 :复方咳喘灵能抑制葡萄球菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌的生长繁殖。结论 :复方咳喘灵在体外具有抑制葡萄球菌、大肠埃希菌、痢疾志贺菌生长繁殖的作用 ,对白念珠菌的生长无抑制作用。

上海铁路医院1999～2001年痢疾杆菌耐药分析

目的 :分析目前上海地区痢疾杆菌耐药情况以及不同菌型间耐药性差异。方法 :应用纸片琼脂扩散法 (K B法 )对上海铁路中心医院 1999～ 2 0 0 1年 15 0株痢疾杆菌进行药敏试验。结果 :痢疾杆菌对庆大霉素、呋喃唑酮、头孢唑啉、妥布霉素、阿米卡星等较敏感 ,而对氨苄西林、复方磺胺甲唑、诺氟沙星耐药率较高 ,分别为 77.3 3 %,75 .3 3 %,18.0 0 %。结论 :对菌痢患者进行分型监测和药敏试验 ,定期及时公布本地区和全国细菌抗菌药物耐药监测情况 。

双醋瑞因对眼表常见病原菌的体外抑制作用

目的研究双醋瑞因对眼表常见病原菌的体外抑菌作用。方法采集于河南省立眼科医院就诊的眼表感染患者中分离培养的革兰阳性球菌和杆菌、革兰阴性杆菌、丝状真菌及念珠菌。采用K-B琼脂纸片扩散法测定双醋瑞因对病原菌的体外抑菌活性,采用微量液基稀释法进行最低抑菌浓度(MIC)定量测定。以左氧氟沙星和伏立康唑分别为抗细菌药物和抗真菌药物对照。结果双醋瑞因对眼表分离的42株革兰阳性球菌和10株革兰阳性杆菌均有明显抑菌活性,双醋瑞因与左氧氟沙星对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌和革兰阳性棒状杆菌抑菌圈直径比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。双醋瑞因对眼表分离的23株革兰阴性杆菌,10株丝状真菌和3株念珠菌均无抑制作用。双醋瑞因对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌及其他葡萄球菌的MIC范围为1~32μg/ml,MIC90分别为16、8、16、32μg/ml。结论双醋瑞因对眼表分离的革兰阳性葡萄球菌和棒状杆菌具有体外抑菌活性,对致病革兰阴性杆菌和真菌无抑菌活性。