猪蛔虫幼虫琼脂胶移行法的建立

本实验首次在国内建立起了线虫的琼脂胶移行法 (Agar- gel Migration Assay,AMA)。通过对影响幼虫活力的某些理化因素 ,如 :琼脂胶的温度、每孔加入的琼脂胶和幼虫混合液的体积、琼脂胶的浓度及幼虫在琼脂胶内移行的时间等研究发现 :加胶的温度和加胶的量对幼虫的移出率有较大的影响。幼虫的移出率随加胶温度的升高而降低 ,当温度达到 70℃时 ,则几乎无虫体从琼脂胶内移出 (移出率仅为 0 .5 % ) ;幼虫的移出率随加入琼脂胶量的增多而减小 ,当每孔加入 10 0 0μl时 ,幼虫的移出率为 16 .6 8% ,当加入 4 0 0μl时幼虫的移出率则能达到2 5 .17%。琼脂胶的浓度对幼虫移出的影响并不明显 ,采用 SAS软件 (for Windows V6 .12 )分析发现 1.2 %、1.0 %、0 .8%、0 .4 %的结果间无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,但琼脂胶的浓度能影响胶液凝固的时间和凝固后的韧性。实验表明 :最适宜的加胶量为 4 0 0μl /孔 ,最适宜的加胶温度为 5 3℃ (Agar- gel,sigm a) ,在琼脂胶中最佳培养移行时间为 2 4 h,琼脂胶液的最适实验浓度为 1.5

猪蛔虫幼虫琼脂胶移行法的建立

本实验首次在国内建立起了线虫的琼脂胶移行法 (Agar- gel Migration Assay,AMA)。通过对影响幼虫活力的某些理化因素 ,如 :琼脂胶的温度、每孔加入的琼脂胶和幼虫混合液的体积、琼脂胶的浓度及幼虫在琼脂胶内移行的时间等研究发现 :加胶的温度和加胶的量对幼虫的移行率有较大的影响。幼虫的移行率随加胶温度的升高而降低 ,当温度达到 70℃时 ,则几乎无虫体从琼脂胶内移出 (移行率仅为 0 .5 % ) ;幼虫的移行率随加入琼脂胶量的增多而减小 ,当每孔加入 10 0 0 μl时 ,幼虫的移行率为 16 .6 8% ,当加入 40 0 μl时幼虫的移行率则能达到 2 5 .17%。琼脂胶的浓度对幼虫移出的影响并不明显 ,采用 SAS软件 (for Windows V6 .12 )分析发现 1.2 %、1.0 %、0 .8%、0 .4%的结果间无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,但琼脂胶的浓度能影响胶液凝固的时间和凝固后的韧性。实验表明 :最适宜的加胶量为 40 0 μl/孔 ,最适宜的加胶温度为 5 3℃ (Agar- gel,Sigma) ,在琼脂胶中最佳培养移行时间为 2 4h,琼脂胶液的最适实验浓度为 1.5

基于琼脂基凝胶电解质体系的系列微型化电解实验设计与改进

利用琼脂基凝胶电解质特殊的结构作用,结合棉柔巾的强吸水能力和强韧性,组成琼脂基凝胶电解质体系,对中学化学中“探究水的组成”“电解饱和食盐水溶液”和“电解氯化铜溶液”3个实验进行了微型化创新设计与实践。改进后的实验现象更显著、易观察,设计的电解体系和装置材料易得、操作简便、适用范围广,可推广到化学实验中。

环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶过程强化及性能评价

环氧氯丙烷的低水溶性和活化过程中环氧基水解制约了高活化效率的获得.通过引入亲水性有机试剂二甲基亚砜,研究了提高Sepharose CL-6B介质环氧基活化密度的方法.研究结果显示,二甲基亚砜溶剂体系消除了琼脂糖凝胶与环氧氯丙烷之间的相界面,形成了均相反应体系,强化了活化反应.在10%(φ)环氧氯丙烷、0.8mol/L氢氧化钠及反应时间2.5h的优化条件下,环氧基活化密度可达100μmol/mL以上.上述活化过程对介质的性能没有明显影响.活化介质对5-氨基吲哚的偶联密度达到95.3μmol/mL,较常规活化方法提高75%以上.

超高压对含有琼脂猪肉凝胶特性影响的试验

多糖作为脂肪替代物可用于开发低脂肉制品,而超高压可对低脂肌肉凝胶产生改性作用。该研究将超高压引入含琼脂0.4%猪肉糜凝胶(PMGA)的加工,在压力100～600 MPa、保压时间10～40 min、加压介质温度10～40℃范围内,单因素试验考察各因素对PMGA持水性、色泽与硬度的影响。研究结果表明:与未受压的对照组相比,200～400 MPa压力导致PMGA的蒸煮损失率显著降低(p<0.05);100～600 MPa压力可不同程度地提高PMGA的保水性,并显著降低彩度指数b*值(p<0.05);400～600 MPa压力引起PMGA亮度L*值显著增加和彩度指数a*值明显下降(p<0.05);100～400 MPa压力可显著提高PMGA的硬度,而500～600 MPa压力则显著降低其硬度(p<0.05);保压时间与介质温度对PMGA持水性、色泽与硬度的影响相对有限。因此,200～400 MPa的超高压处理可获得较高的产品出品率;且改变工作压力可调控受压PMGA的硬度。

回收琼脂糖凝胶中DNA的简便方法

多年来国内分子生物学实验室所采用的几种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法不同程度地存在着各种问题。现介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA的简易方法,采用实验室常用的吸附柱中的吸附膜对DNA进行拦截、纯化和回收。实验证明这种方法回收DNA具有简便快捷、成本低和效率高等优点,是一种切实可行的方法。

琼脂糖凝胶的制备及化学改性研究

以琼脂糖为原料,用喷射法制得琼脂糖凝胶,用柱管式液流分级装置进行粒度分级,90%的粒度为50μm～150μm。分别以环氧氯丙烷及丁二醇双缩水甘油醚为交联剂,制得交联琼脂糖凝胶P和B,与二乙氨基氯乙烷(DEAE)盐酸盐偶联,制得交联DEAE 琼脂糖凝胶P和B,离子交换容量分别为22mmol/L和40mmol/L,对人血白蛋白的吸附量分别为110mol/L和160mol/L。

琼脂糖凝胶中DNA片段的挤压回收法

为了简化琼脂糖凝胶中DNA片段的回收,该文报道一种新的挤压回收法。将含有DNA片段的凝胶块放在折叠的封口膜之间,然后用一小塑料平板将凝胶块中的DNA溶液用力挤出,用移液枪把所有挤压出的DNA溶液放入effendorf管中,然后用常规的苯酚抽提法进行纯化。DNA回收率达到40-60%(w/w)。该方法简单而有效,且回收的DNA能够直接应用于酶切、连接及PCR等各种分子生物学操作。

环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶及其动力学分析

[目的]探索环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶的最佳反应条件,建立活化反应动力学模型。[方法]研究了活化反应中氢氧化钠、环氧氯丙烷和硼氢化钠的浓度以及反应温度、时间和溶剂对活化反应的影响。通过测定活化反应中环氧基的浓度,计算反应的活化度,以确定环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶的最佳反应条件。对影响活化反应的主要因素进行分析,建立活化反应动力学模型。[结果]环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶的最佳反应条件为:5g琼脂糖、7.5mL0.8mol/L氢氧化钠、2mL环氧氯丙烷以及10mg硼氢化钠于25℃反应8h。根据活化反应动力学模型推导出了反应过程的宏观动力学公式。[结论]对影响活化反应的主要因素进行了分析,确定了环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶的反应条件。将琼脂糖凝胶活化实验结果与动力学公式计算结果相比较,发现二者基本一致。

无水体系中环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶制备高载量固定化金属亲和层析介质

在以二甲基亚砜为溶剂的无水体系中,利用环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶Sepharose6FastFlow进行活化,并偶联亚氨基二乙酸和Cu2+制备了固定化金属亲和层析介质.结果表明,该体系中环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶的活化效率大幅度提高,在40%(φ)环氧氯丙烷、0.02g/mLNaOH及50℃、反应时间4h的优化条件下,环氧基活化密度最高达165μmol/mL,较目前报道的最高值提高50%以上.最终所制介质的Cu2+螯合密度为128.3μmol/mL,对BSA的平衡吸附容量达2.05mmol/L.以0.5mol/L咪唑为洗脱剂,被吸附的BSA洗脱率可达90%以上.

SDS-琼脂糖凝胶电泳分析蛋白尿来源的临床意义

目的分析尿蛋白成分来鉴别蛋白尿来源。方法应用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶进行非浓缩尿蛋白电泳分析49例蛋白尿患者的尿蛋白成分。结果在肾后性蛋白尿中往往可以检测到巨球蛋白等一类大分子蛋白,而在肾性则往往缺乏。并且以巨球蛋白作为鉴别蛋白尿的标准,其敏感性和特异性均达到95.8%。结论该方法客观性强,诊断符合率高,重复性好,简便快速,值得临床应用。

琼脂糖凝胶电泳实验技巧

琼脂糖凝胶电泳是核酸分析常用的实验技术。虽然很多参考书上均有该方法的介绍[1,2],但实际操作中的一些技巧是无法从书本上获得的,本文介绍了琼脂糖凝胶电泳的实验技巧,这些经验源自多年的研究生教学实践,对初涉分子生物学实验者有一定的指导意义。

氧化型琼脂糖凝胶基片结合酶免疫反应的蛋白质分子微阵列

目的 研制适于常规免疫学检验的蛋白质分子微阵列。方法 利用分子组装技术 ,以琼脂糖凝胶为基质 ,于玻片表面制成自组装膜 ,经过碘酸钠氧化后再与戊二醛分子偶联 ,而成为具有双功能分子层的薄膜。基片表面衍生的醛基可与各类抗原 (如重组多肽、磷脂和DNA)、辣根过氧化物酶及抗体分子中的氨基形成Schiff′s碱共价连接。结果 基于上述原理 ,制作生物分子微阵列 ,优选出IgG分子的最佳点样浓度为 10 0 μg/ml,点样量以 5 0nl为宜。通过不同的实验模式 ,成功地在基片表面建立了酶免疫检测体系 ,可敏感特异地检出抗原、抗体分子及酶与底物之间的相互作用。结论 该法最突出的优点在于减少了样本和试剂用量 ,可对多种自身抗体实施高通量的平行分析 ,以酶 底物 (HRP DAB H2 O2 )作为芯片信号显示系统 ,结果较为直观 。

蔗糖共溶质对琼脂-魔芋胶共混体系溶胶-凝胶转变过程流变学性质及结构形成动力学的影响

以琼脂-魔芋胶溶液共混体系为研究对象,考察添加蔗糖共溶质(质量分数0%、5%、10%、15%)对溶胶-凝胶转变过程弹性模量(G’)和黏性模量(G”)变化的影响,并通过对凝胶结构平均形成速度(average structuredevelopment rate,SDRa)、即时凝胶化速度(vg)、凝胶化加速度(αg)分析,探讨凝胶结构形成动力学。结果表明:低质量分数(0%~5%)蔗糖共溶质存在时可显著提高共混体系的G’、SDRa、vg及αg(P<0.05),共溶质质量分数高于5%后,此4 个特征值被降低。低质量分数蔗糖共溶质通过增加共混体系中琼脂分子间的氢键作用,促进琼脂分子形成双螺旋结构,显著降低高温区的活化能,进而交联形成细密、平整的网络结构,改善了共混体系凝胶的流变及质构凝胶特性。

玻璃筛柱从琼脂糖凝胶中分离DNA片段的快速方法

在含有各种不同大小的ＤＮＡ片段混合物中，利用琼酯糖凝胶电泳分离，并进一步回收不同大小片段的ＤＮＡ，是分子生物学基因工程技术中常用的方法之一。已经有许多相关技术问世，如ＤＥＡＥ纤维素纸插片电泳法、玻璃粉末洗脱ＤＮＡ法、低溶点琼酯糖凝胶挖块回收法及蔗糖梯...

不同因素对琼脂三元复配凝胶质构特性的影响

以琼脂为主,选择卡拉胶、黄原胶进行三元复配,研究不同因素对复配凝胶质构特性的影响.结果表明:最佳三元复配比为琼脂∶卡拉胶∶黄原胶=1∶1∶0.4;复配胶适宜pH值范围为5～9,最佳pH为7;适当添加蔗糖可以增加复配胶的硬度和胶粘性,添加量为12g时复配胶凝胶特性整体较好,适当乙醇添加可以提高复配胶的硬度、胶粘性和弹性;添加Na+和Mg2+可增加凝胶整体的质构特性,添加K+可明显增加凝胶硬度,添加Ca2+有助于凝胶弹性的增加.

简便实用的琼脂糖凝胶回收DNA片段方法

介绍一种简便实用的DNA片段回收方法,与以前所报道的DEAE-纤维素膜电泳法、透析袋电洗脱法、低融点琼脂糖凝胶法、凝胶冻融法等相比,所需器材简单、操作简便、回收率高、成本低。回收的DNA片段在进一步克隆和测序中表现出较好的效果。

交联琼脂糖凝胶表面修饰对其性状影响的研究

采用活化剂羰基二咪唑(CD I)活化琼脂糖凝胶并对其进行表面修饰,考察活化密度与CDI用量的关系和修饰前后凝胶耐压能力、粒径、外观形态、含水率等的变化。结果显示,琼脂糖表面70%的羟基可被CDI活化,最大活化密度可达4.4 mmol/g干胶,且在一定范围内活化密度与活化剂的加入量成正比。连接了不同分子的凝胶因为氮元素或芳环的引入导致凝胶内部以及凝胶与水分子所形成氢键的强度的变化,使其耐压能力有所提高,平均粒径增大,孔径普遍缩小,固形物的含量有所增加。且上述变化与修饰密度相关,较高的修饰密度下凝胶的各项参数都会发生较大改变。