携带淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因转基因小鼠的制备及体内表达研究

目的 建立携带人类淀粉样前体蛋白瑞典型突变 (Swedish mutation of amyloid precursorprotein,APPSWE)基因的转基因小鼠模型。方法 采用受精卵原核显微注射法 ,将人类 APPSWE转基因导入C5 7及昆明种小鼠受精卵内 ,然后将注射后保持完整的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管内 ,然后应用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)、荧光原位杂交及逆转录 PCR分析子代小鼠中外源基因的整合及表达情况。结果 注射后卵的存活率和幼子出生率分别为 76 .6 2 %和 10 .38% ;外源基因整合率为 35 .2 9% ;共获得 6只首建小鼠 ,已稳定传 3代 ,PCR检测共 5 5只阳性 ;提取阳性小鼠心、脑、肝、肾组织及骨骼肌以人类 APPSWE基因外显子特异的引物进行逆转录 PCR分析 ,结果发现其心、脑组织及骨骼肌中具有人类APPSWE基因的表达。结论 说明携带淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因的转基因小鼠模型已制备成功。

阿尔茨海默病相关转基因小鼠模型的构建

将人类淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因 (APPSW)与血小板衍生的生长因子 α链 (PDGFα)的顺式调控因子结合 ,构建成 PDGF- APPSW转基因 ;并通过原核显微注射法将之导入 C5 7小鼠受精卵内 ,成功地获得PDAPSW转基因小鼠模型 ,共出生 2 2只仔鼠 ,其中 5只基因组内有

阿尔茨海默病相关PDAP_(SW)转基因小鼠模型的表型研究

目的 探讨淀粉样前体蛋白 (APP)基因瑞典型突变 (APPSW)在Alzheimer病 (AD)发病中的作用。方法 对PDAPSW转基因小鼠的毛发、体重及生殖能力进行观察 ;采用免疫组化方法对转基因小鼠大脑组织进行病理改变分析 ;采用国际通用的Y迷宫分析转基因小鼠的行为学异常。结果 3个月龄时首建鼠平均体重为 (31.0± 3 .7)g ,非转基因小鼠为 (34.0± 2 .9)g ,F1代转基因小鼠平均体重为 (32 .0± 3 .3)g ,阴性同胞鼠为 (31.0± 4.2 )g ,两组体重差异无显著意义 ;两组转基因小鼠毛发及生殖能力差异均无显著意义 ,但发现其中 3只阳性小鼠毛发异常 ,1只雄性小鼠不育 ;转基因小鼠脑组织免疫组化分析发现明显淀粉样蛋白沉积 ;Y迷宫内转基因小鼠进入迷宫各臂均数为 (5 3± 7)次 ,非转基因鼠为 (37± 4)次 ;轮回转向频率分别为 48.2 %和 76 .4% ,两组间差异有显著意义。结论 PDAPSW转基因小鼠脑组织内有淀粉样蛋白沉积并且存在行为学异常 ,能够复制人类AD的主要变化 ,可以作为深入研究AD发病机制的动物模型。

人参皂苷Re对瞬时转染APPswe N2a细胞内β2-肾上腺受体及β-样淀粉蛋白肽的影响

目的:研究人参皂苷Re对瞬时转染瑞典型突变淀粉样前体蛋白(APPswe)cDNA的小鼠神经瘤母细胞(N2a细胞)内β2-肾上腺受体(β2-AR)及β-样淀粉蛋白肽(Aβ)的影响。方法:瞬时转染APPswe质粒入N2a细胞24h后,加入1、10及100μmol/L浓度的人参皂苷Re处理细胞24h后收集细胞。应用点印迹检测4G8(识别Aβ17-24片段)的表达,免疫印迹检测APP、β2-AR、β2-AR丝氨酸346位点磷酸化(pS346-β2-AR)和β2-AR苏氨酸68位点磷酸化(pT68-β2-AR)的表达,并采用免疫细胞化学技术分析统计pS346-β2-ARβ及β2-AR的染色强度。结果:瞬时转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR的表达较pcDNA组增强(P<0.05),pT68-β2-AR的表达较pcDNA组减弱(P<0.05)。与APPswe组比较,1、10、100μmol/L的人参皂苷Re可降低pS346-β2-AR的表达(P<0.01),人参皂苷Re不能逆转pT68-β2-AR的表达水平。免疫细胞化学统计显示,转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR染色强度较对照组显著增强(P<0.05),人参皂苷Re可减弱其表达。β2-AR的表达在各组无显著差异。转染APPswe质粒的N2a细胞内APP及4G8的表达较对照组显著增加(P<0.01);与APPswe组比较,比较,100μmol/L的人参皂苷Re可减少APP蛋白的表达(P<0.05),10μmol/L及100μmol/L的人参皂苷Re降低4G8表达(P<0.05)。结论:人参皂苷Re可降低瞬时转染APPswe质粒的N2a细胞内pS346-β2-AR的表达水平,并显著减少该细胞内APP及Aβ的表达,改善AD的基本病变。