海南两头活体搁浅瑞氏海豚的血检指标及死因分析

近几年,瑞氏海豚(Grampus griseus)在中国海南搁浅的案例较多。瑞氏海豚(A、B)分别搁浅于海南省万宁和乐镇大花角海域和文昌市铺前镇木兰湾海域,均因伤势和病情过重死亡。本研究检测了2头瑞氏海豚的血常规和血液生化指标,并通过解剖对其死亡原因进行分析。检测结果显示,2头海豚皮下脂肪较薄,均有营养不良的表现,并且2头海豚血液中红细胞总数、血红蛋白含量与红细胞平均体积均高于正常范围。尸检结果显示,瑞氏海豚内脏炎症出血严重,呼吸系统和消化系统存在大量寄生虫,并且消化系统内无食物以及其他异物。瑞氏海豚A是由于体表外伤感染引发并发症而导致死亡;瑞氏海豚B呼吸系统和消化系统被大量寄生虫寄生,并且搁浅时间久表现严重高渗性脱水,多器官病变,最终全身败血而亡。本研究通过检测搁浅瑞氏海豚的血常规和血液生化指标,同时进行病理解剖分析其死因,为搁浅海豚的救助工作提供参考数据,具有较高的理论参考价值和科研价值。

阴道分泌物瑞氏法与悬浮法检查结果比较

目的对比瑞氏染色法和悬浮法阴道分泌物(白带)常见疾病信息的检出率,以证明瑞氏染色法替代悬浮法的可行性。方法用悬浮法、瑞氏染色法对396份阴道分泌物标本同时进行镜检,检查清洁度、滴虫、真菌、线索细胞、淋球菌,对比分析两种方法的检测结果。结果悬浮法检出清洁度(Ⅲ～Ⅳ)、滴虫、真菌、线索细胞的阳性率分别为60.10%、5.56%、25.51%、21.97%,瑞氏染色法检出其阳性率分别为70.70%、5.81%、32.32%、29.04%,瑞氏法对清洁度、真菌、线索细胞的检出率明显高于悬浮法(P<0.05)。结论瑞氏法白带常规阳性检出率高且易于进行质量控制,建议采用该法以提高其临床诊治水平。

附红细胞体病瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法及PCR检测法的比较研究

目的比较瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法以及PCR法对附红细胞体的检出率,探索比较可靠的检测附红细胞体的方法。方法以瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法以及PCR法检测附红细胞体病的方法的建立为基础,对20例病例用四种方法进行检测,并比较其检出率。结果瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法以及PCR法的检出率分别为20%、30%、85%、80%,PCR与三种染色法的符合率分别为35%、50%、95%。结论吖啶橙及PCR法优于瑞氏及姬姆萨氏染色法。

网构软件的Wright-Fisher多策略信任演化模型

网构软件是开放网络环境中软件系统基本形态的一种抽象,其信任关系本质上是最复杂的社会关系之一.为了增强信任演化模型的自适应性,提高预测的准确性以及有效地抑制自私节点的产生,结合差异化服务和演化博弈理论,提出了一种符合开放网络特征的信任演化模型:(1)建立基于差异化服务的实体全局收益函数,以增强信任演化模型的自适应性;(2)以演化博弈理论作为分析工具,借助Wright-Fisher模型的特点,提出了一种WrightFisher多策略信任演化模型,以增强对信任演化预测的准确性;(3)根据"公平规范"原则建立了基于博弈的激励机制,激励信任策略的演化,从而有效地抑制自私节点的产生.实验结果表明:该模型能够更准确地反映开放网络中实体信任行为的复杂性特点;在激励机制的作用下,网构软件的信任演化能够更快地达到稳定状态,从而有效地提高网络的效率,使网构软件系统的信任收益达到最优.

瑞氏-姬姆萨与巴氏染色法对精子形态染色效果比较

目的比较瑞氏-姬姆萨染色法和巴氏染色法对精子形态染色的效果,寻找可替代巴氏染色法的简单、有效的精子形态染色方法。方法随机选取21份精液标本,每份标本同时采用瑞氏-姬姆萨染色法和巴氏染色法对精液涂片进行染色,分析两种染色方法的结果。结果两种染色方法对精子形态的评估结果无显著性差异(P>0.05);且对正常形态精子和异常形态精子的评估分别具有正相关性,r值为0.984、0.986(P均<0.01)。结论瑞氏-姬姆萨染色法是一种简单有效的精子形态染色方法,可替代巴氏染色法。

瑞氏综合征的临床特点及预后分析

目的 探讨小儿瑞氏综合征的临床特点以提高诊治水平。方法 回顾27例小儿瑞氏综合征的临床表现、辅助检查、治疗及预后情况,进行分析总结。结果 均急性起病,3岁以下多见,主要表现为发热、呕吐、惊厥及不同程度的意识障碍,肝脏轻至中度肿大,且质地较韧或硬;血清谷丙转氨酶明显增高;颅脑CT示脑水肿。早期昏迷、去大脑强直、反复惊厥、血氨在300μg/dl以上者预后不良。结论 应注意小儿瑞氏综合征的早期识别和诊断,加强监护,及时治疗可改善预后,另外要特别注意排除与瑞氏综合征临床类似的其他疾病如感染、中毒和遗传代谢疾病。

瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

采用刚果红染色法从瑞氏木霉cDNA文库中分离到一株具有CMCase活性的阳性克隆 ,测序结果显示该基因所编码的蛋白质为瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ (EGⅢ )。对重组酿酒酵母所产生的EGⅢ进行了酶学性质分析 ,其最适pH为 5 0 ,最适温度为 60℃。检测了酿酒酵母蛋白质分泌系统组分SSO2和SEB1对EGⅢ分泌的影响。结果表明 ,在可过量表达蛋白质分泌系统组分SSO2的酿酒酵母H837中 ,EGⅢ的分泌量最高。由此分析 ,酿酒酵母SSO2蛋白可能在EGⅢ的分泌中 ,是一个限速步骤。通过PCR方法删除EGⅢ基因 5′端非翻译区的 98bp核苷酸序列使EGⅢ表达量提高了 5 3倍。这提示我们 ,瑞氏木霉的EGⅢ基因在酿酒酵母细胞中表达时 ,其mRNA 5′端先导序列中可能存在影响该基因表达水平的调控序列。

5DF血球分析仪检测白细胞分类计数与瑞氏染色镜检结果对比研究

目的 探讨5DF血球分析仪白细胞分类计数与传统的瑞氏染色镜检计数结果之间的差异。方法 用5分类血球分析仪和瑞氏染色法同时对10 0份血样进行分类计数,并用统计学分析研究。结果 中性粒细胞、嗜酸、嗜碱性细胞和淋巴细胞分类计数两法无明显差异(P均>0 .0 5 ) ,但单核细胞分类计数仪器法比镜检法结果偏高(P <0 .0 0 1)。结论 对于一般血液常规检查可选用仪器法筛查,而血液系统疾病或某种原因引起的细胞结构改变应选用镜检法。

瑞氏木霉分子生物学研究进展

瑞氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）是自然界中普遍存在并有重要经济意义的一种丝状真菌。从瑞氏木霉的转化系统、基因克隆、基因表达调控、过量产生同源和异源重组蛋白等方面对瑞氏木霉分子生物学研究进展情况进行了综述。

丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建

采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 .

瑞氏木霉纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达研究

从瑞氏木霉(Trichoderma reesei)cDNA文库中克隆到外切葡聚糖纤维二糖水解酶I(CBHI)cDNA基因,将该基因分别连接到酿酒酵母(Saccharom yces cerevisiae)表达载体pAJ401和pV T100_U上,构建了重组质粒pA J401-cbh1和pV T100_U-cbh1。分别电转化2个重组质粒转移至酿酒酵母H158中,得到重组酵母HPC和HAC,实现了CBHI的分泌型表达。再将质粒pA J401-cbh1转入已含有瑞氏木霉内切葡聚糖酶I基因eg1的重组酵母H 1m中,构建了同时表达cbh1和eg1的重组酵母菌株HMEPC。比较HMEPC和H1m对纤维素底物的降解,前者滤纸酶活比后者提高14.3%,表明CBHI与EGI对滤纸降解有协同作用。

瑞氏染液混配机的设计

目的设计一种可替代传统人工操作的瑞氏染液混配机。方法瑞氏染液混配机由混配罐、水箱、电机、电控箱和基座等构成。工作模式采用动力电机减速驱动混配罐翻转,借助于混配罐内壁摩擦撞击和研磨材料碰撞,使粉粒状瑞氏色素粉碎分散溶解成均一的极细小的微粒以至混配成瑞氏染液。通过实际配液和染色比较瑞氏染液混配机配液与人工配液的差异。结果瑞氏染液混配机混配的染液色素颗粒微细,质量优良,染色效果好,便于标本片的会诊和图像采集,避免了人工配制造成的染液质量不稳定和甲醇的毒副作用。结论该设计装备结构简单,设计合理,配液效率高,是一种特别适宜配制瑞氏染液的实验室实用新型设备。

细胞学瑞氏染色涂片褪色后免疫组化染色

在临床病理工作中,多数涂片常规染色后,依据镜下形态学特点做出诊断,但也经常遇到一些细胞学涂片因无备用白片而需要褪色后改做其他免疫组化来进行鉴别诊断。本文探讨细胞学瑞氏染色涂片褪色后免疫组化染色操作方法与体会。

瑞氏色素褪色分光光度法测定啤酒酵母中铬含量

取啤酒酵母样品0.200 0g,用硝酸及过氧化氢微波消解,所得透明溶液蒸发至近干,冷却,加水溶解盐类。在pH 12的条件下滴加高锰酸钾溶液将铬(Ⅲ)氧化至六价,过量高锰酸钾滴加乙醇使还原褪色,用稀硝酸调节酸度到近中性。过滤,滤液定容至50mL。取此溶液2.0mL,置于25mL容量瓶中,随后依次加入50g·L^(-1)硫脲溶液2 mL,5 mol·L^(-1)磷酸溶液1.0 mL,0.2mol·L^(-1)碘化钾溶液4.0mL,10g·L^(-1)聚乙烯醇溶液3.5mL和0.5g·L^(-1)瑞氏色素溶液4.0mL,加水定容并摇匀。同时按相同操作制备试剂空白,但不加样品溶液。避光反应20min,试样溶液中的铬(Ⅵ)在此体系中反应后导致瑞氏色素褪色。于波长662nm处分别测得试样和空白溶液的吸光度A和A0,并计算ΔA(A0-A)。结果表明:ΔA与铬(Ⅵ)的质量浓度在0.40mg·L^(-1)以内呈线性关系,检出限(3s/k)为0.005 5mg·L^(-1)。实样的分析结果与原子吸收光谱法所测结果一致。测定值的相对标准偏差(n=5)在1.4%~2.3%之间,加标回收率在99.1%~102%之间。

瑞氏木霉木糖醇脱氢酶基因的分离与鉴定

将在木聚糖上生长的瑞氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｓｅｉ）ＲｕｔＣ３０的ｃＤＮＡ文库全部质粒转化已携带有毕赤氏酵母（Ｐｉｃｈｉａｓｔｉｐｉｔｉｓ）木糖还原酶基因的重组酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）菌株Ｈ４７５，在Ｈ４７５中构建了瑞氏木霉的ｃＤＮＡ表达亚文库。在以木糖为唯一碳源的选择性酵母合成培养基上，从该亚文库中筛选到瑞氏木霉木糖醇脱氢酶ｃＤＮＡ基因，该基因片段长为１３ｋｂ。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交分析和蛋白质凝胶电泳结果表明该基因确实来源于瑞氏木霉，所编码蛋白质分子量约为４０ｋＤａ。携带有毕赤氏酵母木糖还原酶和瑞氏木霉木糖醇脱氢酶基因的重组酵母能够在以木糖为唯一碳源的培养基上生长，并能将９０％以上的木糖转化为木糖醇、乙醇和其它副产品。

瑞氏木霉表达黑曲霉葡萄糖氧化酶

利用高表达分泌纤维素酶的真菌瑞氏木霉表达重组的黑曲霉葡萄糖氧化酶。在大肠杆菌DH5α中构建瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因黑曲霉葡萄糖氧化酶基因瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因构巢曲霉色氨酸C终止子pUC19(命名为pCBHGOD)质粒,线性化后用瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因黑曲霉葡萄糖氧化酶基因瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因构巢曲霉色氨酸C终止子(命名为CBHGOD)核酸片段转化瑞氏木霉QM9414原生质体。用PCR扩增方法筛选出同源重组葡萄糖氧化酶基因的瑞士木霉突变株。用麦杆诱导瑞氏木霉突变株,生产黑曲霉葡萄糖氧化酶,Westernblot分析重组的葡萄糖氧化酶分子量与Sigma公司的天然黑曲霉葡萄糖氧化酶一致,生产的重组酶活性25umL,相当于Sigma公司葡萄糖氧化酶标准品的产量为0.5gL。瑞氏木霉可用于生产黑曲霉葡萄糖氧化酶。

瑞氏木霉内切-β-1,4葡聚糖酶基因Egl1的分子改造

为了提高瑞氏木霉（Trichoderma reesei）的纤维素酶活力,用分子改造的方法改造其内切-β-1,4葡聚糖酶基因Egl1。用DNaseⅠ消化Egl1,回收50~200bp的片段,用T4 DNA连接酶连接回收的片段,进行PCR反应,将PCR产物转入瑞氏木霉原生质体,用比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的菌株。结果筛选到2株滤纸酶活力比出发菌株提高的菌株Egl36-4和Egl33-4B2Z2,其酶活力分别比出发菌株提高了2.8倍和3.6倍。

瑞氏综合征55例临床分析

目的提高对瑞氏综合征的临床认识,降低其误诊率及病死率。方法对55例瑞氏综合征患儿进行回顾性临床分析,总结临床特点及与诊断相关的因素。结果瑞氏综合征发病与年龄(<1岁占75%)、生活环境(农村占81%)、季节(冬季占55%)密切相关,感染是重要的前驱表现,临床主要出现不同程度意识障碍、频繁惊厥、肝脏肿大,肝功能异常、心肌酶谱增高、脑水肿等,经治疗,痊愈9例,好转42例,放弃治疗3例,死亡1例。结论瑞氏综合征临床诊断和治疗难度较大,早期诊断和治疗是降低其病死率的关键。

血细胞涂片瑞氏染色法缓冲液的选择

目的探讨血细胞涂片瑞氏染色所用缓冲液的优选。方法在室温(25℃)下分别用pH值为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的混合磷酸盐(KH2PO4-Na2HPO4)、乙酸盐(HAc-NaAc)缓冲液稀释的瑞氏染液对血涂片进行染色,并观察染色效果。结果在pH 6.0、6.5时,血细胞着染色泽符合ICSH质量标准,尤以pH 6.0时染色效果最佳,且乙酸盐缓冲液优于混合磷酸盐缓冲液。结论血细胞涂片以pH 6.0～6.5的乙酸盐缓冲液稀释的瑞氏染液染色效果优良。