瓜子金皂苷己对连二亚硫酸钠致氧糖剥夺/复供诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法以连二亚硫酸钠合并无糖Earle’s液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342/PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membranepotential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值。结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关。

瓜子金皂苷己抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质瘤细胞激活的作用及其作用机制。方法以0.1μg·mL^(-1)LPS刺激BV-2细胞24 h构建神经炎症模型,以酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养基上清中的白介素1β(IL^(-1)β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度,以Griess法检测一氧化氮(NO)的浓度;以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法或免疫印迹法(Western Blot)检测细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)的蛋白、mRNA表达,以及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达。结果PGSF(10,1μmol·L^(-1))可明显降低LPS诱导的BV-2细胞培养基中TNF-α(P<0.01)和IL^(-1)β(P<0.05)浓度,同时下调细胞内iNOS蛋白(P<0.05)和mRNA(P<0.01,P<0.05)表达;PGSF(10μmol·L^(-1))可降低NO的浓度(P<0.05)、下调COX-2的蛋白和mRNA(P<0.05)表达,并逆转TLR4 mRNA表达的上调(P<0.05)。结论PGSF能够负调控LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎性介质的释放和炎性蛋白酶的表达,抑制小胶质细胞激活,发挥对抗神经炎症的作用,此抗炎作用可能由TLR4受体介导。

瓜子金皂苷己神经保护作用的体外研究

目的观察瓜子金皂苷己(PGSF)对大鼠原代皮层神经细胞和PC12细胞的保护作用及其机制。方法建立体外氧糖剥夺/复灌(OGD/R)、氧化应激及去血清模型,以MTT法检测细胞存活率,光镜下观察细胞形态,Western blotting法检测蛋白表达。结果 PGSF(10,1,0.1μmol.L-)1可明显增加OGD/R、氧化应激和去血清处理细胞的存活率(P<0.01,P<0.05);在OGD/R模型中,PGSF(10、1、0.1μmol.L-1)还可改善神经元形态,减少Caspase-3活性片段的表达(P<0.01,P<0.05),并与MAPK通路抑制剂协同降低神经元死亡率(P<0.01,P<0.05);PGSF(10,1μmol.L-1)可增加神经元Bcl-2/Bax表达比值(P<0.01,P<0.05),并减少p53的表达(P<0.05)。结论 PGSF对OGD/R、氧化应激及去血清导致的神经元或PC12细胞损伤具有保护作用,在OGD/R模型中,该作用机制与其调节凋亡相关蛋白的表达相关,并可能与其抗氧化应激功能有关。

瓜子金皂苷己对MPP^+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响,并且探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞存活率,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,JC-1染色倒置显微镜检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测Caspase-3蛋白的水平。结果 500μmol.L-1MPP+作用PC12细胞48 h,能明显抑制细胞生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,同时降低MMP,增加活性Caspase-3的蛋白水平。同时给予不同浓度PS-F处理,PC12细胞存活率增加(P<0.01);凋亡细胞量减少;MMP增高;活性Caspase-3蛋白水平降低(P<0.01)。结论 PS-F能抑制MPP+诱导的PC12细胞的凋亡,其作用机制可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,降低活性Caspase-3蛋白水平有关。

瓜子金皂苷己在小鼠中抗淀粉样蛋白损伤的作用与机制

目的研究瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)抗淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)损伤的作用与机制。方法利用Aβ损伤PC12细胞,噻唑蓝(3-(4,5-dimethyhhyhhiazol-2-y1)-2,5-diphenyhetrazolium bromide,MTT)检测细胞存活率,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧自由基,海马注Aβ后,利用Morris水迷宫评价动物认知行为学的改变,Western blot方法检测学习记忆相关蛋白的变化。结果体外实验结果显示,Aβ能够抑制PC12细胞存活率,并促进细胞内活性氧的堆积;海马注射Aβ后,模型动物的逃避潜伏期延长,穿越目标象限的次数减少,而PGSF高剂量(20 mg kg-1)对上述学习记忆障碍的行为具有改善功能。蛋白检测发现PGSF能够增加脑源性神经营养因子(BDNF)的水平,促进受体酪氨酸激酶和GSK3β216位点酪氨酸的磷酸化。结论 PGSF能够减轻Aβ对神经细胞的损伤,改善学习记忆,其作用机制可能与RTK-GSK3-BDNF信号传导通路有关,是具有治疗老年痴呆潜能的化合物。

瓜子金皂苷己对鱼藤酮损伤PC-12细胞的保护作用及其对CREB的影响

目的:观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对鱼藤酮损伤的PC-12细胞的保护作用及其对cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)表达的影响。方法:以鱼藤酮损伤的PC-12细胞为模型,通过倒置显微镜观察细胞形态,caspase 3活性检测试剂盒测定caspase 3活性,荧光素酶报告基因技术检测CREB表达的变化。结果:PC-12细胞在4μmol·L-1鱼藤酮损伤后,细胞出现萎缩变圆,折光率降低,caspase 3活性显著升高,呈现凋亡的现象。不同浓度(0.1,1.0,10.0μmol·L-1)瓜子金皂苷己能够剂量依赖性的减轻对细胞形态的影响,降低caspase 3活性。荧光素酶报告基因标记显示,瓜子金皂苷己能够增加报告基因CREB的表达。结论:瓜子金皂苷己能够抑制鱼藤酮诱导的PC-12细胞凋亡,其机制可能与增加CREB的表达有关。

瓜子金皂苷己（PS-F）通过TLR4-PI3K/AKT-NF-κB通路发挥抗炎作用机制的研究

目的瓜子金皂苷己（PS-F）通过TLR4-PI3K/AKT-NF-κB通路发挥抗炎作用机制的研究.方法对照组小胶质细胞BV-2用脂多糖（LPS）刺激,并分别进行有/无抑制剂进行预处理,实验组小胶质细胞BV-2用LPS刺激并加入PS-F（10μM）.采用酶联免疫吸附测定BV-2细胞中TNF-α释放量,细胞活力通过MTT法进行分析评价,通过Westernblot方法测定相关蛋白表达量变化.结果抑制toll样受体（TLR）4（CLI-0951μg·ml-1）,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）（LY29400210μM）或磷酸化IκBα（BAY11-708210μM）,在不影响细胞生存力的情况下,可以完全阻止LPS诱导肿瘤坏死因子的释放,降低BV-2细胞中AKT和IκB的磷酸化水平,p65核转位减少.而PS-F可以表现出与加入抑制剂相同的变化趋势.结论瓜子金皂苷己PS-F可以通过TLR4-PI3K/AKT-NF-kB通路发挥抗炎作用.

瓜子金皂苷己对脑缺血再灌注损伤大鼠NKCC1及炎症因子表达的影响

目的:采用大鼠脑缺血再灌注损伤模型观察瓜子金皂苷己(Polygalasaponin F,PGSF)对脑组织中钠-钾-氯协同转运蛋白1(Na^(+)-K^(+)-2Cl^(-)combined transporter type 1,NKCC1)及炎症因子表达水平的影响。方法:将大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、PGSF低剂量组、PGSF中剂量组、PGSF高剂量组,以线栓法制备大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。除假手术组外其余各组缺血1 h、再灌注24 h。侧脑室立体定位注射给药。以实时荧光定量多聚酶链式反应检测肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)及NKCC1的mRNA表达情况。结果:脑缺血再灌注处理使病灶组织中TNF-α、IL-1β、IL-6及NKCC1的mRNA表达量均较假手术组明显升高;与模型组相比,PGSF高剂量组、中剂量组及低剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达均明显下调,PGSF高剂量组和中剂量组NKCC1的mRNA表达也显著下调。结论:结合前期研究结果,推测NKCC1可能是PGSF在整体水平影响脑缺血再灌注损伤的重要靶点之一,PGSF还可能通过抑制炎症发挥作用。神经炎症可能直接或间接通过与NKCC1相关机制参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程。

瓜子金皂苷己通过SOCS3抑制氧糖剥夺/复氧所致小胶质细胞的炎症反应

目的:观察瓜子金皂苷己(Polygalasaponin F,PGSF)是否影响氧糖剥夺/复氧(Oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)处理的BV-2小胶质细胞炎性细胞因子及细胞因子信号抑制因子3(Suppressors of cytokine signaling3,SOCS3)表达,初步探讨PGSF对抗OGD/R炎症反应的机制。方法:构建BV-2小胶质细胞OGD/R体外模型,分为正常对照组、模型组、PGSF低剂量组、PGSF中剂量组及PGSF高剂量组。BV-2细胞氧糖剥夺2 h、复糖复氧6 h后提取总RNA,通过实时荧光定量多聚酶链式反应检测BV-2细胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及SOCS3的基因表达。结果:I/R后BV-2细胞中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及SOCS3的mRNA表达明显增加;给予PGSF处理可以逆转上述观察指标的改变。结论:PGSF在体外实验中具有抑制神经炎症的作用,SOCS3信号通路可能参与介导了PGSF的抗炎作用。

瓜子金皂苷己抑制IL-1β的释放及其机制研究

目的研究瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应中炎性因子IL-1β释放的影响及其作用机制。方法实验分为空白组、LPS模型组、LPS+PS-F (0.10、1.00、10.00μmol·L^(-1))给药组。运用ELISA法检测培养液上清中IL-1β的分泌量;real-time PCR检测IL-1βmRNA的表达;Western blot检测IL-1β、NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达量。结果 ELISA、real-time PCR和Western blot结果均表明,PS-F能有效抑制LPS诱导BV2小胶质细胞释放炎性因子IL-1β(P<0.01,P<0.05);Western blot结果表明,PS-F可以下调NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达,其中ASC、caspase-11所得结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PS-F可以有效抑制LPS诱导BV2细胞炎症反应中炎性因子IL-1β的释放,且与下调NLRP3炎性小体、抑制caspase-11的激活有关。

HPLC-ELSD法测定瓜子金中瓜子金皂苷己的含量

目的建立测定瓜子金皂苷己的含量的方法,为瓜子金药材质量控制提供依据。方法采用HPLC-ELSD法;色谱柱：SHISEIDO Capcell Pak C18柱;流动相：乙腈-水（30：70）,等度洗脱;流速：1.0 ml/min;柱温：25℃,检测器：蒸发光散射检测器。结果瓜子金中瓜子金皂苷己获得良好分离,在0.346~3.460μg范围内呈现良好线性关系;精密度试验RSD为1.64%;重现性试验RSD为2.12%;加样回收率为99.85%。结论建立了HPLC-ELSD法测定瓜子金皂苷己的含量,方法简单可行。

基于GEO数据库的脑卒中相关靶点挖掘及与瓜子金皂苷己分子对接研究

目的:基于GEO数据库挖掘脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)中的关键靶点,并通过分子对接探讨瓜子金皂苷己(Polygalasaponin F,PGSF)抗CIRI的作用机制。方法:选择GEO数据库中CIRI芯片,应用R语言分析芯片的矩阵文件,筛选表达差异靶点,对结果进行可视化处理;将差异显著的靶点进行蛋白-蛋白相互作用分析,构建网络并根据拓扑参数筛选关键靶点。采用AutoDock Tools软件对PGSF与上述关键靶点进行分子对接,计算结合能。结果:通过GEO数据库筛选出CIRI差异表达靶点137个,在蛋白-蛋白相互作用网络中筛选得到关键靶点为:白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、基质金属蛋白酶9(Matrix Metallopeptidase 9,MMP9)、CC型趋化因子配体2(C-C motif chemokine 2,CCL2)、细胞间黏附分子1(Intercellular adhesion molecule,ICAM1)和前列腺素G/H合酶2(Prostaglandin G/H synthase 2,PTGS2),PGSF与关键靶点对接得分为:-8.8、-7.3、-8.9、-7.9、-9.4 Kj/mol,说明PGSF可能与关键靶点结合,且具有较强的亲和力。结论:PGSF抗CIRI的作用机制可能与调控IL-6、MMP9、CCL2、ICAM1和PTGS2发挥抗炎、抑制血脑屏障破坏和减轻脑水肿有关。

瓜子金皂苷己对异丙肾上腺素诱导新生大鼠心肌缺血损伤的保护作用及可能机制

目的探讨瓜子金皂苷己(PGSF)对异丙肾上腺素(ISO)诱导新生大鼠心肌缺血(MI)损伤的保护作用及其机制。方法将50只新生SD大鼠随机分为对照组、模型组及低、中、高剂量PGSF组(5、10、50 mg/kg),每组10只。对照组大鼠予以生理盐水处理;模型组大鼠皮下注射ISO(85 mg/kg,1次/d)建立MI模型,低、中、高剂量PGSF组大鼠分别腹腔注射5、10、50 mg/kg PGSF预处理7 d后再建立MI模型。采用超声心动图评价各组大鼠心功能;HE染色观察各组大鼠心肌组织病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中肌钙蛋白(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;检测心肌组织中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;免疫组化染色检测心肌组织细胞核增殖抗原(Ki67)、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织中蛋白激酶B(AKT)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达。结果模型组大鼠心肌结构紊乱,细胞充血、肿胀,有大量炎症细胞浸润及大片坏死灶。模型组大鼠左心室壁厚度(LVWT)、左心室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、心率(HR)和Ki67阳性蛋白表达低于对照组(均P<0.05);而左心室收缩末体积(LVESV),血清中cTnI、CK-MB、Mb、LDH活性,心肌组织中ROS和MDA含量以及caspase-3阳性蛋白高于对照组(均P<0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量PGSF组新生大鼠心肌组织病变程度逐渐减轻。PGSF低、中、高剂量组新生大鼠LVWT、LVEF、FS、HR和Ki67阳性蛋白表达高于模型组(均P<0.05);而LVESV,血清中cTnI、CK-MB、Mb、LDH活性,心肌组织中ROS和MDA含量以及caspase-3阳性蛋白表达低于模型组(均P<0.05)。Western blot结果发现,模型组新生大鼠心肌组织中磷酸化AKT(p-AKT)/AKT、磷酸化Nrf2(p-Nrf2)/Nrf2蛋白相对表达低于对照组(均P<0.05);低、中、高剂量PGSF组新生大鼠心肌组织中p-AKT/AKT、p-Nrf2/Nrf2蛋白相对表达高于模型组(P<0.05)。结论PGSF对新生大鼠MI损伤有保护作用,其机制可能与抗细胞凋亡、抗氧化应激有关。

瓜子金中3种皂苷类成分含量测定及其差异分析

目的:测定瓜子金不同部位中3种皂苷类成分含量,并比较其差异。方法:采用HPLC法测定瓜子金全草、根、茎、叶中瓜子金皂苷Ⅴ、瓜子金皂苷己、远志皂苷F的含量,并进行主成分分析。结果:12批瓜子金样品按药典标准可分2类,合格品(第1类)出峰时间集中在5~35 min,3种皂苷类成分含量较高;不合格品(第2类)出峰时间集中在40~68 min,3种皂苷类成分含量较少。从总体上来看,合格品中瓜子金皂苷Ⅴ、瓜子金皂苷己的含量为叶>茎>根,远志皂苷F的含量为根>茎>叶,不同药用部位成分含量存在一定的差异。结论:市场流通的瓜子金药材存在较多不合格品,叶中瓜子金皂苷己含量较高,现行质量标准存在局限性,该文所建立的方法能较全面控制药材质量。

瓜子金皂苷己对大鼠感染性早产的治疗作用及机制

目的探究瓜子金皂苷己对大鼠感染性早产的治疗作用及可能机制。方法雌雄大鼠以2:1合笼饲养,妊娠后,采用随机数字表法将孕鼠分为对照组(Control组)、感染性早产组(LPS组)、瓜子金皂苷己低剂量组(PGSF-L组)和瓜子金皂苷己高剂量组(PGSF-H组),每组10只。HE染色观察子宫组织形态学变化;ELISA方法检测血清炎症因子和氧化应激因子水平;Western blot检测子宫组织TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达。结果瓜子金皂苷己能增加感染性早产大鼠妊娠潜伏期,改善子宫组织形态,降低血清炎症因子和氧化应激因子水平,抑制子宫组织TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达。结论瓜子金皂苷己能够减少大鼠感染性早产的发生,其作用机制可能与TLR4/NF-κB通路有关。

不同产地瓜子金药材质量评价

目的对不同产地的瓜子金药材进行质量评价。方法利用高效液相色谱-蒸发激光散射检测法(HPLC-ELSD)建立瓜子金皂苷己含量测定方法,并测定13批不同产地瓜子金药材中瓜子金皂苷己的含量,各产地样品分析采用ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:水-乙腈,梯度洗脱,流速:1 min/ml,柱温:30℃,进样量:10μl,漂移管温度70℃,喷雾器温度40℃,气体流速:1.64 L/min。参照2020年版《中国药典》方法对不同产地瓜子金药材进行薄层色谱鉴别。结果不同产地瓜子金药材中瓜子金皂苷含量排名:广西贵港(0.60%)>贵州毕节(0.39%)>安徽阜阳(0.37%)>贵州安顺(0.29%)>贵州兴义(0.23%)>云南双江(0.20%)>湖北随州(0.11%),其余产地未检出瓜子金皂苷己。不同产地13批瓜子金药材薄层色谱鉴别结果与高效液相色谱结果具有一致性。结论本研究建立的方法准确、科学、稳定,适用于瓜子金皂苷己的含量测定;不同产地13批瓜子金药材中仅广西贵港药材达到药典要求。

瓜子金质量标准研究

目的完善瓜子金药材质量标准,提高其质量控制水平。方法对10批不同产地的瓜子金药材进行显微鉴别、薄层色谱和HPLC指纹图谱鉴别研究,利用HPLC-ELSD建立并测定瓜子金皂苷己的含量,同时对各检查项及有害物质含量进行测定。结果瓜子金横切面和粉末的显微鉴别特征明显,薄层色谱斑点清晰且瓜子金皂苷己分离较好;10批药材的HPLC指纹图谱检出3个共有特征峰,其相似度为0.874~0.995;瓜子金皂苷己含量测定在51.5~309.0 mg·L-1浓度范围内线性关系良好,R2=0.9996(n=5),平均加样回收率为94.80%,RSD为3.24%,建议瓜子金皂苷己的含量≥0.60%(以干燥品计)。结论该研究所建立的方法专属性强,重现性好,简便高效,完善和改进了瓜子金药材的质量控制方法。

舒凉含片喷雾干燥工艺研究

目的:对舒凉含片浸膏的喷雾干燥工艺进行优化。方法:以干粉得率和吸湿百分率为指标,优选了加入浸膏的辅料;采用正交设计法,以瓜子金皂苷己的转移率和干粉得率为指标,确定了工艺参数:浸膏相对密度、进风温度和浸膏进料速度。结果:最佳工艺经过验证,其工艺参数为:浸膏中加入的辅料为5%的β-环糊精(β-CD),浸膏相对密度为1.05,浸膏进料速度为15 m L/min,进风温度为170℃。结论:该工艺合理可行,能有效提高产品的稳定性,为工业化生产提供了实验依据。