合成环瓜氨酸化蛋白短肽的免疫原性和致关节炎性研究

目的:构建环瓜氨酸化蛋白短肽诱导性小鼠关节炎模型,探讨该短肽的免疫原性、致关节炎性。方法:36只DBA/1小鼠随机分为3组,于第0天、第21天分别以Ⅱ型胶原(CⅡ,CIA)、环瓜氨酸化波形蛋白短肽(CCit-Vim,CCV-IA)和偶联血蓝蛋白(KLH)的环瓜氨酸化波形蛋白短肽(CCit-Vim+KLH,CCV+K-IA)皮下注射。ELISA检测血清抗CⅡ抗体、抗CCit-Vim抗体、抗CCP抗体及TNF-α,间接免疫荧光法(IIF)检测抗大鼠食管角蛋白抗体(AKA),对关节炎指数(AI)、足容积、踝关节病理学进行评价。结果:CCV+K-IA小鼠关节炎发病率为25%(3/12),但关节炎出现时间晚,持续时间短,发病率及关节炎程度均低于CIA;CCV-IA无关节炎发生。CCV+K-IA产生抗CCit-Vim抗体高于CIA(P=0.031),产生抗CCP抗体反而低于CIA(P=0.007)。CCV+K-IA、CCV-IA产生的抗CⅡ抗体水平均低于CIA(P<0.05)。CCV+K-IA与CIA的TNF-α高于CCV-IA(P<0.05)。CCV+K-IA的AKA阳性率高于其余两组(50%vs CCV-IA 25%、CIA 16.67%)。CCV-IA和CCV+K-IA踝关节病理显示轻度滑膜增生,无滑膜血管翳形成及炎性细胞浸润。结论:偶联KLH的CCit-Vim短肽不仅具有强的免疫原性,而且具有致关节炎性;与CⅡ比较,CCit-Vim+KLH能诱导出更高的AKA阳性率。

合成环瓜氨酸蛋白短肽诱导猕猴类风湿关节炎模型的研究

目的:研究以瓜氨酸蛋白短肽作为抗原制作猕猴关节炎模型的可行性,并从关节炎表现、影像学、免疫应答、组织病理学等方面与经典胶原诱导型关节炎模型进行比较。方法:8只猕猴随机分2组,分别以Ⅱ型胶原(CIA)和偶联血蓝蛋白的环瓜氨酸化波形蛋白短肽(CCit-Vim+KLH,CCV+K-IA)进行免疫。连续观察猕猴的关节炎体征及炎症指标;第4周与第8周分别进行四肢关节的影像学检查(X线、关节B超);第12周处死后行关节组织病理学检查。结果:CCV+K-IA与CIA猕猴关节炎发病率为3/4和4/4,CCV+K-IA组关节炎出现在免疫后第6周,关节炎程度及发生部位同CIA组;CCV+K-IA组产生的抗CCit-Vim抗体、IL-6水平均高于CIA组(P=0.0315;P=0.0335),而抗CCP抗体、抗CⅡ抗体、TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05);影像学结果显示,免疫后第8周两组X线sharp评分、关节超声滑膜炎分级较第4周均有升高,但同期两组比较差异无统计学意义;病理滑膜炎半定量评分显示,CCV+K-IA组与CIA组比较差异无统计学意义。结论:偶联KLH的CCit-Vim短肽能诱导猕猴发生关节炎,并产生较CIA更高的抗CCit-Vim抗体应答。