波棱瓜化学成分、药理作用、制备方法研究进展及质量标志物的预测分析

藏药波棱瓜(Herpetospermumcaudigerum)是重要的中药药源植物,具有清热解毒、疏肝利胆的功效,其化学成分主要包括脂肪酸类、香豆素类、多糖类、木脂素类及其他类成分,具有抗肝损伤、抗乙肝病毒、抗肝纤维化、抗肿瘤、抗氧化等药理作用。系统地对波棱瓜的化学成分、药理作用及制剂开发方面的研究进展进行概述,基于中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的核心理念,从植物亲缘学和化学成分特有性、传统药性、传统药效、配伍、化学成分可测性、炮制相关及入血成分等方面,对波棱瓜质量标志物进行预测分析,并预测去氢双松伯醇(dehydrodiconiferyl alcohol)、波棱醇(herpetotriol)、波棱内酯A(herpetolide A)、波棱甲素(herpetrione)、波棱素(herpetin)、波棱酮(herpetone)、波棱芴酮(herpetfluorenone)和波棱酚(herpetenol)等可作为波棱瓜的Q-Markers,以期为波棱瓜质量评价体系的建立提供科学参考。

藏药波棱瓜子化学成分研究

目的:研究藏药波棱瓜(Herpetospermum caudigerum Wall.)种子的化学成分。方法:用硅胶柱色谱、Sephedex LH-20、MCI进行分离,通过理化性质和UV、IR、ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR等波谱手段进行鉴定。结果:从藏药波棱瓜子中分离得到7个化合物,分别是波棱内酯Ⅰ(1)、波棱内酯Ⅱ(2)、去氢双松伯醇(3)、Herpetol(4)、Arbutin,1-acetate(5)、Dodecanoic acid(6)、10-Eicosenoic acid(7)。结论:化合物5～7为首次从该属植物中分离得到。

西藏野生波棱瓜资源的调查和分类

运用植物学相关研究方法,近年来通过对西藏各地野生波棱瓜资源进行的考察和材料收集,阐述其分布状况,同时对其植物学性状进行观察记载、对比分析和分类,鉴定西藏共自然分布了分别属于3个属的3个种,分别为波棱瓜属Herpetospermum Wall.的波棱瓜Herpetospermum pedunculosum (Ser.) Baill.、赤儿属Thladiantha Bunge的西藏赤Thladiantha setispina A.M.Lu et Z.Y.Zhang和三棱瓜属Edgaria的三棱瓜Edgaria darjeelingensis C.B.Clarke,并重新列出了西藏野生波棱瓜植物的分种检索表。

波棱瓜叶面积数学图像测定方法的研究

为了探索波棱瓜叶面积更实用的测定方法,试验对叶面积仪测定方法和数字图像测定方法进行了比较,通过两种方法的测定结果之间关系和精度评价分析结果表明:与相比,数字图像法的测量精度(平均相对误差2.1%)显著低于叶面积仪测定法(平均相对误差6.2%),而且前者还具有操作简便、成本低廉和实用性强的优点,其准确程度完全能够满足波棱瓜叶面积测定的精度要求,数字图像法有望成为今后测定波棱瓜叶面积的主要方法之一。

传统藏药材波棱瓜的微量元素分析

对传统藏药材波棱瓜中 1 2种微量元素进行了分析。结果显示 ,在波棱瓜中人体必需微量元素Cu、Fe、Zn、Mn、Co、Ni、Cr、Se等含量较高 ;对西藏地区不同产地的波棱瓜中的微量元素含量作比较 ,有极显著差异。提示在选用药材时 ,应重视其产地。

传统藏药材波棱瓜的氨基酸分析

采用FDBN柱前衍生高效液相色谱法测定了藏药材波棱瓜中氨基酸的含量。结果表明,波棱瓜中氨基酸总量为189.4g·kg-1,其中8种必需氨基酸含量占氨基酸总量的33.47%。

波棱瓜叶片愈伤组织诱导研究初报

通过正交试验研究了6-BA、2,4-D和NAA不同激素配比的MS培养基对波棱瓜叶片愈伤组织形成的影响.结果表明,2,4-D对波棱瓜叶片愈伤组织形成的作用最显著,其次为6-BA和NAA.诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA,这两种培养基诱导率均达到90%.

播期和边缘效应对波棱瓜性别分化及产量的影响

通过对比试验,研究了不同播期处理以及株行边缘效应对波棱瓜植株雌株率、产量的影响,以期为波棱瓜的高效人工驯化栽培提供实践依据和技术指导。结果表明,与正常5月7日播种相比,延后播期至6月20日,可以极显著地提高田间波棱瓜植株的雌株率和产量(P<0.01);边缘效应对不同播期处理下株行两端的波棱瓜雌株率的影响十分明显,5月7日播种的波棱瓜随着距株行边端距离的增加,植株雌株率急剧降低,而边缘效应对6月20日播种的波棱瓜雌株率几乎没有影响。环境因素对波棱瓜的性别分化影响明显,延后波棱瓜播期至6月下旬,是现阶段内提高波棱瓜雌株率、有效解决波棱瓜籽产量较低问题的主要措施之一。

藏药波棱瓜种子萌发特性研究

通过种子活力的测定、发芽床及发芽温度的筛选和不同药剂浸种处理,研究了波棱瓜种子的萌发特性。结果表明:波棱瓜种子萌发具有一定程度的休眠特性,其最佳发芽基质为砂质发芽床;发芽最适温度为20℃;青霉素和聚乙二醇对波棱瓜种子发芽具有促进作用。用50℃的温水浸种后,采用300 mg/L的青霉素溶液处理,发芽势和发芽率分别比对照提高12%和20%,达到53.33%,极显著高于对照33.33%;用100 g/L的聚乙二醇溶液处理,波棱瓜种子的发芽势和发芽力分别比对照提高10%和14%。

不同处理对藏药波棱瓜种子萌发的影响

为了摸清不同浸种时间、预处理和不同试剂对波棱瓜种子萌发的影响,在种子培养箱中模拟种子萌发环境,研究不同浸种时间(3、6、9、12、15、18、21、24、27 h)、不同预处理(低温、高温、超声波)和不同质量分数的赤霉素(GA_3,50~200 mg/L)、6-苄基腺嘌呤(6-BA,10~40 mg/L)、硝酸钾(KNO_3,1 000~4 000 mg/L)及3种试剂混合(6-BA+GA_3+KNO_3)浸种方法对波棱瓜种子萌发的影响。结果表明,在不同浸种时间下,波棱瓜种子发芽率、发芽势差异显著,最佳浸种时间24 h;不同预处理都可以促进种子萌发,在40 k Hz强度的超声波处理60 min后种子萌发有明显的提高;不同质量浓度的KNO_3溶液和赤霉素GA_3溶液都能促进波棱瓜种子萌发,6-BA溶液质量浓度升高对波棱瓜种子发芽有一定的抑制作用;混合试剂对波棱瓜种子萌发率不如单一试剂高。波棱瓜的种子采用40 k Hz强度的超声波处理60 min后,用1 000 mg/L KNO_3溶液浸泡24 h处理效果最好,发芽率为62.5%。

藏药波棱瓜籽油脂中脂肪酸的HPLC与GC-MS分析

分别采用柱前衍生-高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FLD)和气相色谱质谱法(GC-MS),分析了超临界CO2萃取得到的藏药波棱瓜籽油脂中脂肪酸的成分。用荧光衍生试剂1-[2-(对甲苯磺酸酯)乙基]-2-苯基咪唑[4,5-f]9,10-菲(TSPP)作为柱前衍生化试剂对39种饱和与不饱和脂肪酸标品进行衍生,经梯度洗脱实现了39种游离脂肪酸(FFA)衍生物完全分离,使用外标法定量,建立了同时测定39种脂肪酸绝对含量的方法,对超临界CO2萃取结合正交实验得到的波棱瓜籽油样品及超声波萃取与微波回流萃取油脂中的脂肪酸进行了定量分析,对比了这些样品中油酸、亚油酸、亚麻酸的质量百分含量及不饱和脂肪酸占总脂肪酸的含量。结果表明:波棱瓜籽油中油酸、亚油酸、亚麻酸质量百分含量分别高达34.65%(147.14mg/g,下同)、22.85%(97.03mg/g)、20.86%(88.56mg/g),不饱和脂肪酸占总脂肪酸的79%。同时,采用GC-MS分析,对比了酸催化与碱催化的甲酯化法分析波棱瓜籽油中脂肪酸的优劣,得出了GC-MS分析波棱瓜籽油脂肪酸的条件,并讨论了液相色谱与气质联用分析脂肪酸的特点。

藏药波棱瓜花质量标准的初步研究

对藏药波棱瓜花药材的质量标准进行初步研究.根据2010年版《中国药典》附录IX相关方法,对波棱瓜花药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物进行测定;并对该药材的性状、显微特征进行描述;采用薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别.初步明确了波棱瓜花药材性状、显微和薄层鉴别方法,并确立了波棱瓜花药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的限量.本研究为波棱瓜花的质量标准的的制定提供参考依据.

藏药波棱瓜伪品西藏赤瓟子、苦瓜子的鉴别

目的:为波棱瓜子药材鉴定提供科学依据。方法:采用徒手切片、粉末刺片等常规生药学方法进行显微组织观察。结果:对藏药波棱瓜伪品西藏赤子、苦瓜子进行了详细的形态组织学研究,发现西藏赤瓟子、苦瓜子种皮具大小两种石细胞,不具栅状石细胞;西藏赤瓟子种皮表皮细胞呈栅状,苦瓜子种皮表皮细胞不呈栅状。伪品与正品波棱瓜比较有较大差别。结论:从药材性状及显微特征上能将波棱瓜正伪品予以准确区分,并为西藏赤瓟子、苦瓜子的鉴别提供了科学依据。

超临界CO2萃取藏药波棱瓜籽油脂工艺研究

采用L9（3^4）正交实验与单因素实验相结合的方法，考察了萃取温度、压力、CO2流量、时间以及藏药波棱瓜籽粉碎粒径对超临界CO2萃取波棱瓜籽油出油率的影响。结果表明，各因素对出油率的影响顺序依次为：时间〉压力〉CO2流量〉温度。综合考虑实验结果，优化得出最佳萃取条件为：萃取温度50℃，萃取压力35MPa,CO2流量35L／h，粒径80目，萃取时间3．5h，此时，超临界CO2萃取波棱瓜籽油的出油率较高为36．12％，该方法具有提取率高，产品质量好，无溶剂残留等优点，为波棱瓜籽油的工业化生产和相关产品开发奠定了基础。

藏药波棱瓜离体再生体系的建立

由于长期对波棱瓜野生资源的采挖,使其现已濒临灭绝,通过组培快繁技术进行繁殖是解决波棱瓜资源短缺的有效途径之一.本试验以波棱瓜的顶芽为外植体进行离体培养与植株再生的研究.结果表明,波棱瓜的继代增殖以MS+1.5 mg.L-16-BA+0.05 mg.L-1NAA为宜,每个外植体可平均产生4.5个芽;生根培养基以1/2MS+1.0 mg.L-1IAA为宜,生根率达96%.

超临界CO_2萃取波棱瓜种子油及脂肪酸的气相色谱-质谱分析

利用超临界CO2萃取藏药波棱瓜种子油，并对种子油进行了气相色谱-质谱分析．实验确定的最佳超临界萃取的条件是：萃取温度45℃，萃取压力为20MPa，CO2流量为35～40kg／h，提取时间为120min，在此条件下波棱瓜种子油的提取率为33．35％．利用气相色谱-质谱对种子油分析，结果发现其主要含有各类不饱和脂肪酸，其中亚麻酸、亚油酸、油酸的相对含量分别为：12．271％、20．149％和52．282％．通过对波棱瓜种子油的分析研究为其进一步开发利用提供了科学依据．

藏药波棱瓜属药用植物DNA条形码鉴定

为评价DNA条形码候选序列对藏药波棱瓜属植物的鉴定作用,探讨波棱瓜属植物鉴定新方法,本研究采用不同产地、不同海拔波棱瓜植物的ITS2、PsbA-trnH、rbcL、matK通用引物对110份样品进行DNA提取、PCR扩增和测序,比较4条DNA序列扩增效率和测序成功率;分析种内和种间变异;通过Barcodinggap分析,构建NJ系统进化树,评价各序列对西藏自治区、云南省、四川省不同海拔波棱瓜药材的辨别能力。研究结果表明,ITS2序列在所研究的波棱瓜属药用植物中的扩增效率和测序成功率均为100%,其种内种间变异、Barcodinggap与其他DNA条形码候选序列相比具有明显的优势,以ITS2序列作为DNA条形码,可对波棱瓜进行准确、快速识别和鉴定,准确地弄清楚不同地区不同海拔所生长的波棱瓜之间的进化关系,为该药用植物的质量控制、安全用药及资源合理开发利用提供理论依据。

藏东南地区波棱瓜人工栽培技术

针对藏东南地区的气候和地理特点,总结了波棱瓜人工栽培过程中的土地整理、播种、田间管理、病害防治、果实采收和贮藏等生产环节的技术方法,以促进藏药植物栽培技术水平的提高。

不同培养基对波棱瓜愈伤组织诱导的影响

以波棱瓜叶片为外植体,研究了不同培养基对波棱瓜愈伤组织诱导的影响。结果表明,N6+1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L NAA培养基上愈伤组织诱导时间短,生长快,质地致密颗粒状,有光泽,培养20 d后愈伤组织诱导率高达93.3%,为诱导愈伤组织最佳培养基。

广西有棱丝瓜种质资源及其利用

从广西各地征集 35份有棱丝瓜品种资源 ,在 1999、2 0 0 0年种植观察 ,从中筛选出广西 118等 10份优异种质资源 ,有的可供生产直接利用 ,有的可供进一步改良选育或作杂交亲本利用 ,育成新的优良品种如皇冠一号。