4-苯基丁酸对同型半胱氨酸诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用及机制

目的探讨内质网应激(ERS)分子伴侣4-苯基丁酸(4-PBA)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)成骨分化中的作用及相关机制。方法原代SD大鼠AVICs分离与培养,前钙化培养基(PCM)诱导钙化,为明确Hcy是否诱导AVICs钙化,先采用随机数字法将AVICs分为3组:对照(NC)组,PCM组,PCM+Hcy组;为进一步明确ERS抑制剂4-PBA是否能抑制Hcy诱导的AVICs钙化,采用随机数字法将AVICs分为4组:PCM+Hcy组,4-PBA组,PCM+4-PBA组,PCM+Hcy+4-PBA组。为明确4-PBA是否能通过促进自噬,从而缓解Hcy诱导的AVICs钙化,采用随机数字法将AVICs分别分为NC组,PCM组,PCM+Hcy组;PCM+Hcy组,PCM+Hcy+4-PBA组;PCM+Hcy+4-PBA组,PCM+Hcy+4-PBA+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。Western blot检测内质网跨膜蛋白[蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子6(ATF6)]、成骨因子[Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)]、自噬效应蛋白(Beclin1)的蛋白表达;茜素红染色测量钙化结节。结果在成功建立AVICs钙化模型基础上,茜素红染色显示PCM+Hcy组钙化结节形成较PCM组明显增多,PCM+Hcy组在PCM组基础上进一步上调内质网跨膜蛋白及成骨因子的表达,抑制了自噬;而4-PBA处理后则抑制了Hcy诱导的AVICs成骨分化,促进了自噬;在4-PBA基础上加入自噬抑制剂3-MA后,成骨分化抑制效应被逆转。结论Hcy能促进AVICs成骨分化,而4-PBA可通过抑制ERS,促进自噬,从而延缓Hcy诱导的AVICs成骨分化。

BMP9诱导可逆永生化小鼠瓣膜间质细胞成骨能力研究

目的:建立具有快速增殖能力的可逆永生化主动脉瓣膜间质细胞系。方法:体视显微镜下利用弹簧剪夹取瓣膜组织,胶原酶消化后加入逆转录永生化病毒,利用免疫荧光鉴定细胞是否属于间质细胞,显微镜观察细胞形态,结晶紫、CCK-8和流式细胞周期技术检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶染色和茜素红钙盐沉积实验检测细胞成骨能力,q-PCR及Western blot检测细胞成骨标志物。结果:经光镜观察和免疫荧光鉴定,成功取到瓣膜间质细胞。加入永生化病毒后,经光镜观察和免疫荧光确认瓣膜间质细胞未发生表型改变,且在永生化的细胞中能够检测到大量SV40T(P<0.001)。结晶紫染色、CCK-8(P<0.001)和流式细胞周期结果提示永生化后的瓣膜间质细胞增殖速度变快。加入成骨诱导因子骨形态发生蛋白-9(bone morphogenetic protein9,BMP9)后永生化瓣膜间质细胞表现出较好的成骨能力,多数成骨标志物在分子层面的RNA和蛋白水平明显升高。去永生化后瓣膜间质细胞形态无明显改变,q-PCR结果显示SV40T明显降低(P<0.001),细胞增殖能力明显下降,且细胞周期被阻滞在G_(0)/G_(1)期。在BMP9诱导下去永生化瓣膜间质细胞同样具有成骨分化能力,且绝大多数成骨标志物都明显上升。结论:本研究成功建立可逆永生化瓣膜间质细胞系,BMP9可诱导其成骨分化,用于后续钙化性主动脉瓣膜疾病研究。

主动脉瓣膜间质细胞焦亡在钙化性主动脉瓣疾病中的作用

目的体外培养主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)并构建其钙化模型,探讨细胞焦亡在钙化性主动脉瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)中的作用。方法以钙化诱导培养基诱导AVICs钙化,依据细胞处理方式分为对照组(标准培养基培养)、钙化组(钙化诱导培养基培养)和抑制剂组(VX-765预处理24 h后钙化诱导培养基培养),采用CCK-8法测定各组细胞的存活率,茜素红染色检测各组细胞钙结节表达水平,采用免疫印迹法检测各组细胞中钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1以及炎症因子IL-1β、IL-18的相对表达水平。结果与对照组相比,钙化组AVICs的钙结节增多,钙化相关蛋白OPN、RunX2及细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1相对表达水平均增高(t=4.586~15.842,P<0.01);与钙化组相比,抑制剂组AVICs的钙结节减少,钙化相关蛋白OPN、RunX2,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GSDMD-N、Cleaved-Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18相对表达水平均降低(t=5.789~19.227,P<0.01)。结论AVICs钙化过程中存在细胞焦亡,应用VX-765干预钙化培养基诱导的AVICs可在一定程度上抑制细胞焦亡过程。

抑制LncRNA PANDA表达对人心脏瓣膜间质细胞钙化的改善作用及其机制

目的观察抑制长链非编码RNA PANDA(LncRNA PANDA)表达对人心脏瓣膜间质细胞(hVICs)钙化的影响,并探讨其机制是否与核酸转录因子YA(NF-YA)、凋亡相关蛋白Bax、锚定蛋白2(Notch2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)有关。方法将体外培养的hVICs分为三组,正常对照组加入间质细胞培养基+10%胎牛血清,培养7 d;钙化组加入钙化诱导液,培养7 d。PANDA-siRNA组加入钙化诱导液培养3 d后,采用Lipofectamine^(TM)3000转染试剂盒转染PANDA-siRNA,再培养4 d。取各组分组培养7 d的细胞,采用实时荧光定量PCR法检测LncRNA PANDA相对表达量,光学显微镜观察细胞形态,Western blotting法检测NF-YA、Bax、Notch2、BMP-2蛋白相对表达量,ELISA法检测细胞上清液BMP-2水平。结果PANDA-siRNA组、正常对照组、钙化组细胞LncRNA PANDA相对表达量及上清液BMP-2蛋白水平均依次升高,组间两两比较P均<0.05。PANDA-siRNA组细胞结构清晰,呈条索状生长,生长稍缓慢;钙化组细胞成骨样改变,细胞聚集,呈网状结构;正常对照组细胞贴壁生长,生长迅速。与正常对照组比较,钙化组细胞NF-YA、Bax、Notch2、BMP-2蛋白相对表达量均升高,PANDA-siRNA组均降低(P均<0.05)。结论诱导钙化后的hVICs LncRNA PANDA表达升高,抑制LncRNA PANDA表达可减轻其成骨样改变,其机制可能与降低NF-YA、Bax、Notch2、BMP-2表达有关。

Notch1蛋白在人心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化关系中的作用

目的用人心脏瓣膜间质细胞(hVICs)在体外培养并用钙化诱导液建立瓣膜钙化模型,观察hVICs钙化过程中Notch1蛋白表达及细胞凋亡情况,探讨Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中的作用。方法将体外培养的hVICs随机分为两组,钙化组用含钙化诱导液的培养基培养,以建立钙化模型,并按1~7天分别诱导细胞,观察钙化的动态过程;空白组用正常培养基(I-GRO PLUS)培养。所有hVICs均培养7天。检测两组细胞钙化结节数目、BMP-4蛋白、Notch1蛋白的表达及hVICs凋亡率。然后将钙化组中诱导钙化细胞再随机分脂多糖组(LPS)、Notch1抑制剂组(γ分泌酶抑制剂,DAPT)、对照组(只加钙化诱导液)体外培养3天,检测BMP-4、Notch1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达。结果与空白组细胞比较,钙化组细胞钙化及Notch1蛋白的表达均高于空白组,且随着诱导天数的增加而增加;细胞凋亡率在钙化诱导3天时最高,随后逐渐下降。LPS组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均随着Notch1蛋白的表达增加而增加;DAPT组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均减少。结论hVICs钙化与细胞凋亡有着密切的关系,且Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中起着重要的作用。

基于内质网应激的丹参酮ⅡA磺酸钠调节主动脉瓣膜间质细胞钙化机制研究

目的:研究丹参酮IIA磺酸钠对低密度脂蛋白(ox LDL)诱导的猪主动脉瓣膜间质细胞(porcine valvular interstitial cells,VICs)钙化模型内质网应激(ERS)因子作用的影响。方法:分离VICs免疫荧光法鉴定细胞,应用ox LDL建立细胞模型,MTT法筛选最佳丹参酮IIA磺酸钠干预浓度,茜素红染色测量钙化结节,免疫印记法及实时荧光定量PCR法检测ERS通路中BIP、Chop、Runx2及Osteocalcin蛋白及基因表达,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子表达,应用MCP-1中和抗体观察MCP-1在成骨化中的作用。结果:在成功建立ox LDL诱导的VIC细胞模型基础上,茜素红染色显示丹参酮IIA磺酸钠组钙结节形成较ox LDL模型组差异有统计学意义;丹参酮IIA磺酸钠可抑制BIP、Chop细胞内基因的表达,抑制Runx2及Osteocalcin蛋白表达,同时可抑制IL-6、IL-8及MCP-1炎症因子的表达,其表达与模型组比较差异有统计学意义,但MCP-1中和抗体对成骨化因素影响较小。结论:丹参酮IIA磺酸钠可抑制ox LDL诱导的VIC炎症反应及成骨化,其具体机制可能与抑制ERS通路有关。

钙化性主动脉瓣疾病瓣膜间质细胞的生物学特征分析

目的初步分析钙化性主动脉瓣疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)瓣膜间质细胞的生物学特征,为后续研究奠定基础。方法采用组织块接种和免疫磁珠法分选正常主动脉瓣和CAVD瓣膜间质细胞,观察其形态学和行为学特征。通过免疫细胞化学染色和流式细胞术分析CAVD瓣膜间质细胞免疫表型的改变。结果与正常主动脉瓣瓣膜间质细胞相比,CAVD瓣膜间质细胞呈肌纤维母细胞和成骨细胞形态,当细胞达到一定密度后细胞自发性收缩、聚集样生长并形成钙化结节。体外培养的CAVD瓣膜间质细胞表达肌纤维母细胞标志物α-SMA和成骨细胞标志物碱性磷酸酶(ALP)。结论 CAVD瓣膜间质细胞生物学特征的改变可能是导致主动脉瓣增厚、钙化和交界融合的重要因素。

雷帕霉素对大鼠主动脉瓣膜间质细胞增殖的影响

目的利用雷帕霉素靶向抑制m TOR并探讨其对大鼠心瓣膜间质细胞增殖的影响。方法体外分离大鼠瓣膜间质细胞后培养并鉴定;细胞随机分为两组:雷帕霉素组与对照组;MTT法检测并绘制大鼠瓣膜间质细胞用药前后的生长曲线;流式细胞仪检测雷帕霉素对细胞周期的影响;RT-PCR检测细胞中S6、P70S6K的m RNA表达水平;Western blotting检测细胞中S6、P70S6K、P-S6、P-P70S6K蛋白的表达水平。结果体外分离获得的大鼠瓣膜间质细胞分离培养成功;对照组细胞活性显著高于加药组细胞(P<0.05),加药组细胞生长变缓。流式细胞术检测发现加药组和对照组细胞的各周期占比均没有明显差别;加药组细胞的S6蛋白与P70S6K蛋白的磷酸化水平降低(P<0.05)。结论雷帕霉素能抑制瓣膜间质细胞的增殖其原因,可能不是通过改变细胞周期而是通过抑制m TOR后下调其靶蛋白S6和P70S6K的磷酸化水平引起的。

白细胞介素17促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化

目的研究白细胞介素17（IL-17）是否促进主动脉瓣膜钙化形成及其可能机制。方法利用体外主动脉瓣膜间质细胞培养技术,瓣膜间质细胞培养传代3-5次后,采用简单随机抽样法分为两组：（1）对照组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液;（2）实验组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液和IL-17（50 ng/ml）。继续孵育48 h后,用细胞茜素红钙染色检测两组瓣膜间质细胞钙化情况,用Western blot和RT-PCR检测两组瓣膜间质细胞碱性磷酸酶（ALP）及骨形态蛋白2（BMP-2）的表达情况。结果实验组细胞中明显钙结节形成,对照组细胞中少量钙结节形成;与对照组比较,实验组细胞ALP和BMP-2蛋白（0.741±0.063比0.184±0.032;0.900±0.060比0.396±0.030,均为P〈0.01）与基因（0.236±0.004比0.106±0.003;0.523±0.052比0.194±0.047,均为P〈0.01）表达量均明显升高。结论 IL-17可促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化。

酸碱环境变化对主动脉瓣瓣膜间质细胞钙化的影响及机制探讨

目的:研究酸碱环境变化对主动脉瓣瓣膜间质细胞钙化的影响,并探讨其机制。方法:将主动脉瓣瓣膜间质细胞分为4组进行培养:A组普通培养基,pH7.4;B组普通培养基+钙化培养基,pH7.1;C组普通培养基+钙化培养基,pH 7.4;D组普通培养基+钙化培养基,pH 7.7。

过氧化氢介导人瓣膜间质细胞产生氧化应激细胞模型的建立

目的建立过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)介导的瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)氧化应激模型,为心脏瓣膜病始发机制的研究以及未来抗氧化治疗药物筛选提供细胞学模型。方法将分离培养的原代人主动脉瓣VICs随机分为对照组和处理组,分别以含10%胎牛血清的DMEM培养液和普通培养液+不同浓度梯度(0、50、100、300、500、800、1 000μmol/L)的H2O2进行培养。采用H-E染色、MTT比色法、AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞生存能力和凋亡的发生。结果处理24h后,MTT结果显示各组VICs细胞存活率差异有统计学意义(P<0.01),H2O2浓度在50、100μmol/L时细胞存活率与对照组相比升高(P<0.05),随后细胞存活率随H2O2浓度升高开始下降,在800μmol/L时出现快速降低的拐点,此时细胞存活率为(69.8±8.3)%,1 000μmol/L时细胞存活率降为(14.3±11.0)%。H-E染色显示在800μmol/L时VICs形态皱缩,胞核固缩。流式细胞检测则进一步证实800μmol/L时VICs出现明显凋亡,此时多为中晚期凋亡。结论 H2O2最佳作用浓度为800μmol/L,作用时间为24h,在该条件下可成功建立氧化应激细胞模型。

甘氨酸对华法林诱导的瓣膜间质细胞钙化的保护作用

目的:探究甘氨酸对华法林诱导的瓣膜间质细胞(aortic valve interstitial cells,AVICs)钙化是否有保护作用。方法:提取猪AVICs,通过钙浓度测定、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、茜素红染色等方法检测不同浓度甘氨酸对钙化的作用;real-time PCR探究甘氨酸对成骨分化的作用;Western blot、流式细胞学及TUNEL(Td T-mediated d UTP Nick-End Labeling)染色研究甘氨酸对华法林引起的AVICs凋亡的作用。结果:甘氨酸抑制华法林引起的AVICs钙化,抑制m RNA水平成骨分化标志物的表达,抑制Smad1、5/RUNX2通路,并且抑制华法林引起的AVICs凋亡。结论:甘氨酸可能抑制Smad1、5/RUNX2通路,并且抑制钙化早期凋亡,因此对华法林引起的AVICs钙化具有保护作用。

荜茇明碱抑制BMP2/pSmad1/5信号减轻高钙高磷诱导的主动脉瓣膜间质细胞钙化

目的:探究荜茇明碱对高钙高磷诱导的主动脉瓣膜间质细胞(aortic valve interstitial cell,AVIC)钙化的保护作用及其机制。方法:体外培养原代猪AVIC,通过高钙高磷诱导钙化并给予不同浓度荜茇明碱处理16 h后,流式细胞仪分析检测凋亡水平;AVIC在高钙高磷条件下,以2.5 mmol/L荜茇明碱或100 ng/mL骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)处理,通过检测钙浓度、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、茜素红染色反映钙化程度;Western blot、real-time PCR检测成骨相关蛋白和m RNA的表达。结果:①流式细胞分析发现,高钙高磷条件下,荜茇明碱低于5 mmol/L无明显促凋亡作用;②钙浓度、ALP活性、茜素红染色显示,2.5 mmol/L荜茇明碱显著抑制高钙高磷诱导的AVIC钙化;③Western blot、real-time PCR显示,2.5 mmol/L荜茇明碱抑制BMP2、p Smad1/5、RUNX2蛋白和mRNA的表达;④外源性重组BMP2可逆转荜茇明碱抗钙化的作用。结论:荜茇明碱通过抑制BMP2/pSmad1/5/RUNX2信号,减轻高钙高磷诱导的AVIC钙化。

LPS诱导主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用及机制研究

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导猪主动脉瓣膜间质细胞(porcine aortic valve interstitial cells,PVICs)成骨分化过程中的作用与机制。方法体外分离并培养PVICs。应用LPS诱导PVICs成骨分化,ALP染色和茜素红S染色检测细胞成骨分化能力;RTqPCR法检测细胞成骨相关基因及蛋白Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)的转录水平。Western blot法检测TGF-β1、TGF-βR、Bax、Smad2/3和ERK1/2的蛋白表达水平。同时应用ERK特异性抑制剂PD98059处理,观察ERK、Bax、Runx2蛋白表达水平。结果①LPS(4μg/mL)处理可以使PVICs的碱性磷酸酶活性明显升高,钙盐沉积明显增强。②RT-qPCR检测结果显示:LPS(4μg/mL)处理后可以明显上调Runx2、OPN和OCN的mRNA转录水平(P<0.01)。③Western blot检测结果显示:LPS(4μg/mL)处理后TGF-β1、TGF-βR、Smad2/3及ERK1/2蛋白水平显著升高(P<0.05);ERK特异性抑制剂PD98059可以减弱LPS对ERK、Bax、Runx2的促表达作用(P<0.05)。结论LPS可能通过激活TGF-β1/Smads和ERK信号通路诱导主动脉瓣膜间质细胞成骨分化。

骨化三醇对脂多糖诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响

目的探究骨化三醇[1α,25-dihydroxycholecalciferol,1,25 (OH)_2D_3]对脂多糖(Lipopoly saccharide,LPS)诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响,为钙化性主动脉瓣膜病的预防提供理论依据。方法 6只雄性健康家猪(8～10月龄,体质量100～120 kg),处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶。胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,观察其形态特征,并用免疫荧光染色行表型鉴定。利用条件培养基诱导细胞成骨分化,建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型,并予加入不同浓度骨化三醇处理72 h,并设立空白对照组和DMSO载体对照组。LPS诱导细胞成骨分化,筛选最适LPS效应浓度;实验分:空白对照组,骨化三醇组,LPS组,骨化三醇+LPS组。1 nmol/L骨化三醇与100 ng/mL LPS先后共同处理细胞48 h。分别用实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞成骨分化标志物骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2, BMP-2)、骨钙蛋白(osteocalcin,OC)的mRNA和蛋白水平表达;茜素红染色评估晚期钙结节形成情况。结果成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(vimentin)染色阳性,血管性血友病因子(vWF)染色阴性。骨化三醇抑制条件培养基诱导的细胞成骨分化,BMP-2和OC的表达较空白对照组和DMSO载体对照组均显著降低(P <0. 05)。LPS处理后可促进细胞成骨分化,与其他浓度LPS组比较,其中100 ng/mL LPS组,BMP-2和OC的表达量最多(P <0.05);加入骨化三醇预处理后,可减弱LPS诱导的细胞成骨分化标志物表达,骨化三醇+LPS组BMP-2(n=3,1.94±0.27、0.41±0.03)和OC(n=3,0.21±0.04、0.44±0.03)的表达较LPS组(2.54±0.36、0.88±0.02;2.49±0.53、0.86±0.02)明显降低(P<0.01),并且晚期钙结节形成减少。结论骨化三醇可抑制条件培养基及LPS诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化,可能对主动脉瓣膜钙化具有一定的保护作用。

阿维来司他对主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用及机制研究

目的:探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂阿维来司他(alvelestat;又称AZD9668)对猪主动脉瓣膜间质细胞(VICs)成骨分化的作用及其潜在机制。方法:收集3例患钙化性主动脉瓣膜疾病(CAVD)和1例非CAVD患者的瓣膜组织,采用免疫组织化学染色和Western blot检测NE、骨桥蛋白(OPN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达。分离猪主动脉VICs,采用细胞免疫荧光染色进行表型鉴定。MTT法检测alvelestat对VICs活力的影响。将对数生长期的VICs分为正常对照组(blank组)、成骨培养液(OM)组及OM+5、10、20和40 nmol/L alvelestat组。采用Western blot、碱性磷酸酶染色和茜素红染色等方法检测早期纤维化指标α-SMA和I型胶原(collagen I),晚期成骨分化指标OPN和RUNX2,以及NE的水平;Western blot检测alvelestat对细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的作用情况,并设置blank组、OM组、OM+alvelestat组及OM+PD98059(ERK1/2抑制剂)组,检测NE、OPN和RUNX2的表达。结果:钙化的瓣膜组织中NE、OPN、RUNX2、α-SMA及pERK的表达上调(P<0.05)。分离出的猪主动脉VICs中α-SMA及vimentin阳性,CD31阴性;40 nmol/L以上的alvelestat影响VICs的活力(P<0.05);40 nmol/L alvelestat可显著抑制纤维化指标α-SMA和collagen I,成骨分化指标RUNX2和OPN,以及NE的表达(P<0.05);碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示,alvelestat可以抑制成骨诱导的VICs早期和晚期钙盐沉积;alvelestat降低VICs中ERK1/2的磷酸化水平(P<0.01),且alvelestat和ERK1/2抑制剂PD98059均能降低钙盐诱导的NE、RUNX2及OPN蛋白表达(P<0.05)。结论:NE抑制剂alvelestat通过抑制成骨诱导的NE和ERK1/2信号通路而抑制VICs的成骨分化。

瘦素对主动脉瓣膜间质细胞表型转化的影响

目的 :探讨瘦素对主动脉瓣膜间质细胞(valvular interstitial cells,VICs)表型转化的影响,揭示瘦素在钙化性主动脉瓣疾病(calcific aortic value disease,CAVD)发生发展中所扮演的角色。方法:胶原酶消化法分离并培养猪主动脉瓣膜间质细胞,采用含不同浓度的瘦素分别刺激细胞24 h,检测细胞裂解液碱性磷酸酶(ALP)活性,并确定最佳刺激浓度。用最佳刺激浓度的瘦素刺激细胞24 h,提取细胞RNA以及蛋白,通过RT-PCR以及Western blot分别测定肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)的表达情况。结果:瘦素刺激导致ALP表达上调且最大刺激浓度为100 ng/m L。相较于对照组,瘦素刺激组OPN mRNA及蛋白表达增高,而α-SMA表达无明显变化。结论:瘦素能够诱导VICs向成骨细胞分化,从而促进VICs钙化。

主动脉瓣膜间质细胞成骨分化机制的研究进展

钙化性主动脉瓣疾病(CAVD)被认为是与衰老相关的退行性变和被动的钙盐沉积。随着研究的深入,发现瓣膜钙化是一种包含瓣膜内皮损伤、脂质浸润、慢性炎性反应、细胞凋亡、细胞分化和新血管形成等的病理过程。主动脉瓣膜间质细胞(AVIC)的成骨分化作用在CAVD的发展中具有重要作用,其成骨分化机制涉及脂质氧化、炎性因子、表观遗传调控失调以及基因突变等。该文介绍AVIC成骨分化机制的研究进展。

主动脉瓣膜间质细胞分化机制研究进展

瓣膜纤维化或钙化是瓣膜性心脏病(VHD)的两大重要病理表现,其中瓣膜间质细胞(VICs)由成纤维细胞样表型分化为肌成纤维细胞表型或成骨细胞表型,是瓣膜发生早期病理改变的关键环节。VHD多累及主动脉瓣,近年来有关VICs分化的研究多聚焦于主动脉瓣来源细胞。本文就主动脉瓣VICs分化的最新研究进展予以综述,旨在为VHD的防治研究提供更为全面的参考。

瓣膜间质细胞异质性在钙化性主动脉瓣疾病中的作用

钙化性主动脉瓣疾病(CAVD)是一种表现为主动脉瓣增厚、钙化的疾病,随病情发展可出现瓣膜硬化,进而引起一系列血流动力学的异常改变,最终可导致慢性心力衰竭和死亡。主动脉瓣膜间质细胞是构成主动脉瓣膜的主要细胞亚群,在CAVD的发生发展中起重要的作用。当前,单细胞测序等技术让研究者对间质细胞的起源、表型和功能异质性有了新的理解。文章对间质细胞的异质性在钙化性主动脉瓣疾病中所起的作用进行综述,为靶向间质细胞延缓CAVD进程提供新的思路。