瓦尼木层孔菌培养基优化及抗炎作用研究

瓦尼木层孔菌又名杨黄菌,是近年来发现的一种具有药用价值的真菌,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和增强免疫力等作用,特别是从杨黄菌中得到的提取物——杨黄多糖,对溃疡性结肠炎有一定的治疗作用。但杨黄菌多为野生,人工栽培所需时间长、获得杨黄的相关报道较少,也限制了对其培养条件的深入研究,特此对临清杨黄的培养基配方进行优化,通过研究培养基中碳源、氮源以及其他无机离子和生长因子对杨黄生长的影响改善杨黄菌的人工培养技术,提高其产量。

苯酚-硫酸法测定瓦尼木层孔菌菌丝体多糖含量的条件优化

对瓦尼木层孔菌菌丝体多糖含量的测定进行了探讨,研究了在苯酚-硫酸法中吸收波长、显色温度、显色时间、浓硫酸用量、苯酚用量等因素对显色结果的影响。通过实验发现,最佳显色条件是波长492nm、显色温度100℃、显色时间20min、浓硫酸用量4.5mL、苯酚用量0.4mL,平均加样回收率100.7%,相对标准偏差(RSD)为0.67%。

瓦尼木层孔菌及其人工栽培技术

瓦尼木层孔菌是近年来发现的一种珍贵药用真菌,其野生资源稀少,无法满足市场需求,特此对瓦尼木层孔菌的形态特征、生态习性及人工栽培技术进行介绍。

瓦尼木层孔菌WN-3分类地位的分子生物学验证及生理学特性研究

[目的]研究瓦尼木层孔菌WN-3分类地位的分子生物学验证及生理学特性。[方法]采用分子生物学方法对瓦尼木层孔菌WN-3菌株进行分类地位验证,通过生长速率法研究该菌株的生理学特性。[结果]菌株WN-3的ITS序列长度为756 bp,在Genbank核酸序列数据库中比对,试验菌株与瓦尼木层孔菌的相似率为98%,确定菌株WN-3为瓦尼木层孔菌,GenBank登陆号为HQ845057。瓦尼木层孔菌WN-3生长的最佳碳源为葡萄糖和甘露糖,最佳氮源为麦麸和玉米;菌株在pH6.5条件下生长最好,适宜生长温度为28℃。[结论]该方法研究了瓦尼木层孔菌WN-3分类地位的分子生物学验证及生理学特性,为进一步研究其人工栽培和规模化生产提供了理论基础。

瓦尼木层孔菌子实体中小分子化学成分的分离与鉴定

将瓦尼木层孔菌(Phellinus vaninii)子实体95%乙醇提取物用石油醚和乙酸乙酯萃取后采用常压硅胶柱层析法进行纯化,获得9种结晶化合物。通过数字熔点测定仪测定熔点,电子碰撞质谱法或电喷雾电离质谱法进行质谱分析,采用核磁共振仪测定氢谱和碳谱来分析鉴定这些化合物,得知这些化合物分别为β-谷甾醇(Ⅰ)、豆甾醇(Ⅱ)、柚皮素(Ⅲ)、樱花亭(Ⅳ)、香豆素(Ⅴ)、东莨菪素(Ⅵ)、丁香酸(Ⅶ)、咖啡酸(Ⅷ)和山柰酚(Ⅸ),除化合物Ⅲ和Ⅳ外,其余7个化合物为首次从该真菌中分离。

瓦尼木层孔菌菌丝体多糖提取工艺的研究

为优化瓦尼木层孔菌菌丝体多糖提取工艺,在单因素试验的基础上,以提取温度、提取时间、水料比3个因素为自变量,以瓦尼木层孔菌菌丝体多糖提取率为响应值,使用BOX-Benhnken中心组合试验和响应面分析法,优化瓦尼木层孔菌菌丝体多糖提取工艺,并确定瓦尼木层孔菌菌丝体多糖的最佳工艺条件为:提取温度80.99℃、提取时间2.13 h、水料比32.06∶1(mL/g)。在此条件下,实际提取率为10.49%,与预测值基本吻合。

反相高效液相色谱法测定瓦尼木层孔菌中柚皮素的含量

采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定瓦尼木层孔菌(Phellinus vaninii)中柚皮素含量。瓦尼木层孔菌醇提物水解后采用RP-HPLC对柚皮素的含量进行测定,色谱条件:Hypersil ODS(4.6mm×100mm,3μm)色谱柱,流动相为1%冰醋酸溶液-甲醇(62∶38),柱温为40℃,流速为0.6mL/min,检测波长为288nm。标准曲线为A=4.18×106 X+40109(r=0.9998,n=5),柚皮素进样量在0.0202～2.020μg间线性关系良好,相对标准偏差(RSD)为1.56%(n=5),回收率为97.8%,重现性实验RSD为1.76%。该法适于瓦尼木层孔菌醇提物中柚皮素的含量测定。

一种新的药用真菌——瓦尼木层孔菌(杨黄)

瓦尼木层孔菌 (杨黄 )是一种新的药用真菌发现在吉林省长白山地区 ,它属于担子菌门的锈革孔菌科。由于它生长在杨树上 ,且子实层表面为黄色 ,故当地人称之为杨黄。本文对该菌进行了详细介绍。

响应面优化瓦尼木层孔菌的发酵培养基配方及培养工艺研究

以瓦尼木层孔菌为原料,菌丝生物量为评价指标,响应面法优化发酵培养基的碳源和氮源,通过单因素试验,确定最佳发酵工艺,为瓦尼木层孔菌的开发利用提供理论参考。结果表明,发酵培养基的最佳碳源和氮源及其添加量是蔗糖2%、可溶性淀粉1.5%、酵母浸粉0.5%、蛋白胨0.5%,最佳发酵条件是液体种子培养时间3d、培养温度26℃、初始pH7、摇瓶转速160r/min、接种量15%、摇瓶装液量80mL/250mL,在此条件下进行验证试验,菌丝生物量为1.1780g/100mL。

瓦尼木层孔菌发酵液提取物对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响

桑黄(Phellinus spp.)是一种珍贵的多年生大型药用真菌,具有独特的抗癌功效,是目前国际公认的生物治癌药剂中效率最高的一种药用真菌。该文从区域特种食(药)用真菌的开发利用角度出发,以采自黑龙江完达山的杨树桑黄即瓦尼木层孔菌(Phellinus vaninii)为研究对象,采用MTT方法比较了水提和酯提方法菌丝发酵液4个提取物对人结肠癌Lo Vo细胞增殖的抑制效果,计算高效提取物最佳作用浓度和IC50,绘制加药时间与抑制Lo Vo细胞增殖效果的曲线。研究结果表明,不同处理方法获得的提取物对人结肠癌Lo Vo细胞增殖的抑制效果差异显著,其中酯提效果好于水提,在1 000μg·m L-1浓度条件下,加药48 h后,正丁醇提取样品对人结肠癌Lo Vo细胞抑制率最高为86.8%,乙酸乙酯提取样品抑制率为87.5%,超声波提取样品对人结肠癌Lo Vo细胞抑制率为58.3%,直接水提效果最差,只有57.8%;桑黄菌丝体发酵液乙酸乙酯提取物IC50为53.459μg·m L-1,在此浓度下,加药后96 h抑制率达到90%以上,加药120 h抑制率达95%,抑制率也随着加药时间的增加而提高。这为探求瓦尼木层孔菌资源价值的科学评价与有效开发奠定了基础,具有重要的学术和现实意义。

瓦尼木层孔菌不同模式代料栽培对比试验

以瓦尼木层孔菌完达山株为研究对象,进行了不同培养基配方及不同出菇模式的对比试验,结果表明：代用料栽培最佳模式是菱形口、＂墙式两端出菇法＂。培养料最佳配方：柞树木屑73%、杨树木屑5%、麦麸8%、米糠8%、石膏1%、玉米粉2%、石灰1%、含水量60%~65%,pH6.5。

瓦尼木层孔菌WN-3菌丝体和子实体成分测定与分析

对完达山瓦尼木层孔菌分离菌株的菌丝体、野生子实体和代用料栽培子实体的主要营养成分、矿物质及主要药用成分进行检测分析与比较。结果表明,瓦尼木层孔菌菌丝体、代用料栽培子实体及野生子实体各成分含量存在差异,营养成分及主要药用成分差异显著。

不同生长年限栽培与野生的瓦尼木层孔菌主要成分分析及急性毒理

分析不同生长年限(1、2、3年)栽培(简称1、2、3年生)与野生(长白山和朝鲜)的瓦尼木层孔菌(Phellinus vaninii)的主要成分含量差异,同时用3年生子实体水提物进行急性毒理实验。结果表明:在实验范围内,多糖含量,3年生和朝鲜野生子实体含量最高;黄酮含量,1年生和3年生子实体最高;三萜和甾醇含量,1年生、3年生和朝鲜野生子实体含量最高;粗蛋白含量,2年生最高,且栽培的子实体高于野生子实体;总必需氨基酸含量,长白山野生子实体最高;无机元素测定中,重金属含量均未超标。急性毒理实验表明,3年生的最大给药量(生药量)360 g·kg^-1时,小鼠饮食、饮水和行为活动均正常,且各脏器均未见异常或病变,对小鼠无明显的急性毒性。

瓦尼木层孔菌菌丝培养特性初探

以瓦尼木层孔菌子实体分离得到的纯菌丝为试材,对其在不同营养、温度、pH值等条件下的培养。结果显示:瓦尼木层孔菌菌丝生长的适宜温度范围为28～33℃;适宜pH值为pH6～7;最佳碳源为果糖,其次为麦芽糖;最佳氮源为黄豆粉,其次为玉米粉。

高等真菌黑壳木层孔菌的化学成分研究

[目的]研究高等真菌黑壳木层孔菌的化学成分。[方法]利用正向硅胶、反向硅胶、凝胶等现代色谱分离手段,采用核磁共振等波谱学方法对分离的化合物进行化学结构鉴定。[结果]从高等真菌黑壳木层孔菌[Phellinus rhabarbarinus(Berk.)G.Cunn.]中分离到5个化合物,经鉴定分别为2个苯环衍生物、2个三萜和1个甾体化合物。[结论]所有分离到的化合物均为首次从黑壳木层孔菌中分离到。

忍冬木层孔菌对乳腺癌癌前病变大鼠的保护作用

目的:探讨忍冬木层孔菌醇提物对大鼠乳腺癌癌前病变的影响,为忍冬木层孔菌防治乳腺癌提供科学依据。方法:取雌性未孕SD大鼠,制备乳腺癌癌前病变模型。连续灌胃给药4周后观察大鼠一般情况、采用放射免疫法检测大鼠血清中性激素雌二醇(E2)、孕酮(P)、催乳素(PRL)、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)含量,用HE染色分析乳腺组织病理变化,用免疫组化分析乳腺组织中雌激素受体α(ERα)、β(ERβ)和孕激素受体(PR)蛋白表达变化。结果:忍冬木层孔菌醇提物600mg/kg能降低血清中E2水平(P<0.05),升高P、PRL的含量(P<0.05或P<0.01),对LH和FSH未见明显的影响;150、300、600mg/kg能降低卵巢、子宫质量指数(P<0.05或P<0.01),改善乳腺组织病理变化(P<0.05或P<0.01);600mg/kg逆转乳腺组织中上调的ERα、ERβ和PR的异常表达(P<0.05或P<0.01)。结论:忍冬木层孔菌醇提物能够调节乳腺癌癌前病变大鼠体内性激素水平和效应,抑制激素异常对乳腺组织的不良刺激,从而改善大鼠乳腺组织病理变化,有效的阻止乳腺癌癌前病变的发生、发展。

两种桑黄发酵产物的抗肿瘤活性对比

选用H22荷瘤小鼠对火木层孔菌(Phellinus igniarius)和瓦尼木层孔菌(Phellinus vaninii)发酵产物进行抗肿瘤体内试验,测定其对H22荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指数、免疫因子含量和生存率的影响。结果表明,火木层孔菌和瓦尼木层孔菌发酵产物高、低剂量组(1 000 mg/kg、500 mg/kg)均对肿瘤具有一定抑制作用,其中瓦尼木层孔菌发酵产物低剂量组(500 mg/kg)抑瘤效果最佳,其抑瘤率为58.7%。火木层孔菌和瓦尼木层孔菌发酵产物高、低剂量组均可提高小鼠血清中白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)的含量、延长小鼠的生存期,但是对血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-,αTNF-α)含量的影响作用不显著。

6种“桑黄”石油醚提取物的体内抗肿瘤活性

对6种"桑黄"的石油醚提取物进行了抗肿瘤体内试验,测定其对H22荷瘤小鼠抑瘤率、免疫器官指数、免疫因子含量和生存率的影响。试验结果表明:粗毛纤孔菌、鲍姆木层孔菌、火木层孔菌和瓦宁木层孔菌的石油醚提取物高、低剂量(100,50 mg/kg)以及黑壳目层孔菌石油醚提取物高剂量(100 mg/kg)对肿瘤均具有一定抑制作用,抑瘤率均>40%;瓦宁木层孔菌石油醚提取物低剂量组(50 mg/kg)的抑瘤效果最佳,为76.82%,其脾指数、胸腺指数均明显高于阳性组(P<0.01),IL2的含量也明显高于对照组和阳性组,能延长小鼠的生存期;椭圆嗜蓝孢孔菌石油醚提取物也具有一定的抑瘤效果,高、低剂量(100,50 mg/kg)抑瘤率分别为39.30%和36.17%。

栽培杨黄不同提取物对H_(22)荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及机理

为探讨栽培杨黄子实体不同提取物对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及机制,将150只ICR小鼠随机分为空白组、模型组、CTX组、杨黄水提取物组、乙醇提取物组、石油醚提取物组及粗多糖组。采用H_(22)肝癌细胞建立实体瘤模型,给药第10天处死小鼠,计算脾、胸腺脏器指数及抑瘤率,检测血清中TNF-α、INF-γ、VEGF及苏木精-伊红和免疫组化染色法观察肿瘤组织病理变化,同时Western blotting检测肿瘤相关蛋白表达。结果表明,石油醚提取物的高剂量组抑瘤率(73.21%)最好,且血清中的TNF-α、IFN-γ、VEGF的含量升高;能显著促进肿瘤组织坏死、消融等现象。水提物组免疫组化则出现负调控,表现出抑瘤率不显著。Westernblotting结果表明,与模型组相比各给药组的凋亡基因Caspase-3、Caspase-9和通路基因NF-κB、JAK均高表达,且随剂量的递增表达量逐渐降低。综上所述,杨黄子实体石油醚提取物抑瘤效果显著,其作用机理可能是通过线粒体途径实现,药物经体内代谢后,引起细胞中Bax、Bcl-2、TNF等激活Caspase-3和Caspase-9凋亡蛋白,引起细胞核染色质或DNA凝聚或降解,破坏肿瘤细胞的正常增殖,从而诱导其凋亡,抑制肿瘤的生长。