瓦布贝母种子后熟处理技术优化研究

在瓦布贝母种子传统后熟处理技术的基础上,根据瓦布贝母种子整个后熟阶段所需外部环境与内部物质变化的必要条件,从植物生长调节剂质量浓度调整、育苗基质不同土肥配方比例、变温时间调控、微量元素补充、氧气载量调控、撒播季节及田间管理等环节进行了关键技术点的优化处理,达到了瓦布贝母种子发芽力由弱转强的目的,实现了技术优化后总体发芽出苗率提升25%的优良效果,通过实践证明了该项技术优化方案的可靠性和实用性,以期为高品质瓦布贝母的有性繁殖提供技术参考。

HPLC-ELSD法同时检测瓦布贝母三种生物碱的含量

为了建立高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）测定瓦布贝母3种生物碱（西贝母碱、贝母辛和贝母素乙）含量的方法,本文以Tigerkin C18色谱柱（4.6＆#215;150 mm,5μm）作为分析柱,乙腈-0.1％二乙胺水（70∶ 30）作为流动相,流速1.0 mL· min-1,ELSD检测器参数设为以压缩空气为载气,流速2.5L·min-1,漂移管温度75℃进行了试验并确认其为适合的分离和检测条件.结果显示,西贝母碱、贝母辛、贝母素乙分别在0.192～3.84、0.191 ～3.82和0.178～3.55 μg范围内线性关系良好.精确度,稳定性和重复性试验的RSD均小于3％.平均加样回收率分别为97.75％、100.47％、99.40％,RSD分别为1.0％、2.6％、1.6％（n=6）.瓦布贝母样品含量测定值分别为0.0835％、0.0271％、0.0174％,RSD分别为1.3％、2.0％、2.6％（n=3）.此法用于测定瓦布贝母生物碱含量,操作简便、快捷,结果稳定可靠,可以为瓦布贝母的质量评价和控制提供参考.

瓦布贝母茎叶和鳞茎中生物碱的对比

目的对瓦布贝母地上茎叶部分和地下鳞茎部位总生物碱及代表性生物碱的量进行对比研究。方法采用酸性染料比色法测定总生物碱的量;利用HPLC-ELSD,采用外标两点法测定贝母甲素和贝母乙素。结果 3个批次瓦布贝母地上茎叶中总生物碱量为0.55%,地下鳞茎部分总生物碱为0.40%;地上茎叶部分中贝母甲素的量为0.046 7%,地下鳞茎部分中贝母甲素的量为0.021 3%;地上茎叶部分中贝母乙素的量为0.014 0%,地下鳞茎部分中贝母乙素的量为0.006 9%。结论瓦布贝母地上茎叶部分总生物碱量及贝母甲素和贝母乙素的量均高于地下鳞茎部分的量。

引种栽培瓦布贝母、浓蜜贝母与野生川松贝母的药理作用比较研究

栽培川贝母（瓦布贝母、浓蜜贝母）在小鼠镇咳、大鼠祛痰、小鼠常压耐缺氧、小鼠离体肺脏支气管灌流的药理作用及小鼠口服毒性方面与野生暗紫贝母完全相同，而在升高小鼠肺脏ｃＡＭＰ水平及豚鼠平喘作用方面，栽培瓦布贝母的作用明显优于野生暗紫贝母。

HPLC-ELSD测定栽培的瓦布贝母中西贝碱

目的建立测定栽培瓦布贝母西贝碱的高效液相-蒸发光散射检测方法。方法以Shim-packODSC18(150mm×4.6mm,5μm)为分析柱;以乙腈-水-二乙胺(60∶40∶0.3)为流动相,流速1ml·min-1;以蒸发光散射检测器(ELSD)检测,ELSD的气化温度为40℃,空气压力为1.7bar。结果西贝碱在0.1086～0.5430mg·ml-1之间线性关系良好,回归方程为lnC=0.7586lnA-10.183(r=0.9999,n=5);3、4、5年生栽培的瓦布贝母中西贝碱的含量分别为9.0%、8.1%、9.5%;平均回收率97.2%。结论所用方法快速、准确、简便,可直接测定栽培的瓦布贝母中西贝碱的含量。

瓦布贝母的生物碱成分分析

目的 对瓦布贝母 (FritillariawabuensiS .Y .TangetS .CYueh )的野生松贝及家种松贝、家种青贝 ,进行薄层层析和总生物碱、西贝碱的含量分析。方法 从中性、碱性提取液两方面作了薄层层析 ,两相滴定法测定总生物碱百分含量 ,双波长薄层扫描法测定所含的西贝碱含量。结果 薄层层析看野生松贝及家种松贝、家种青贝的色谱相近 ,但因含量不同 ,斑点的清晰度也不相同 ;定量测得总生物碱百分含量 (野生松贝 0 .10 3%、家种松贝 0 .148%、家种青贝 0 .12 0 % )、西贝碱含量 (野生松贝0 .0 10 3%、家种松贝 0 .0 375 %、家种青贝 0 .0 15 3 % )。结论 3种川贝母的生物碱成分在薄层色谱上基本相近 。

瓦布贝母生物碱的分离与鉴定

从四川产家种贝母新种──瓦布贝母（ＢｕｌｂｕｓＦｒｉｔｉｌｌａｒｉａＷａｂｕｅｎｓｉｓＳ．Ｙ．ＴａｎｇｅｔＳ．Ｃ．Ｙｕｅｈ）鳞茎中分离出８种生物碱。经波谱分析，高效液相色谱，ＴＬＣ与对照品进行对照鉴定，确认碱Ⅰ为西贝索（ｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ），碱Ⅱ为贝母辛（ｐｅｉｍｉｓｉｎｅ），碱Ⅱ为鄂贝乙素（ｅｂｅｉｎｏｎｅ），碱Ⅳ为异浙贝甲素（ｉｓｏｖｅｒｔｉｃｉｎｅ），碱Ⅴ为西贝素－β氮氧化物（ｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅ－β－Ｎ－ｏｘｉｄｅ）。作者对碱Ⅴ的１Ｈ，１３Ｃ化学位移作了归属，并首次获得碱Ⅴ的晶体Ｘ衍射结构数据。

川贝母栽培品瓦布贝母与松贝母的总生物碱对比研究

目的:建立瓦布贝母与松贝母的总生物碱定量比较研究方法。方法:以贝母素甲为对照品,采用酸性染料比色法对瓦布贝母的栽培品、野生品和松贝中总生物碱进行定量比较研究。结果:含量测定结果显示,瓦布贝母栽培品中总生物碱含量最高,野生品次之,松贝中总生物碱含量相对较少。结论:为瓦布贝母栽培品作为扩大贝母类珍贵中药材的药用资源提供科学依据。

瓦布贝母乙醚提取物GC-MS分析及其抗氧化活性评价

【目的】分析瓦布贝母鳞茎乙醚提取物中化学成分及其抗氧化活性。【方法】瓦布贝母鳞茎干、鲜样分别采用索氏提取法和超声提取法以乙醚为溶剂进行提取,并结合GC-MS分析其化学成分,用面积归一法研究其相对含量,再用DPPH自由基和ABTS+自由基清除法评价其抗氧化活性。【结果】超声提取法提取效率较好,从超声鲜样(CX),索氏鲜样(SX),超声干样(CG)和索氏干样(SG)的提取物中分别鉴定出69,58,73和57种成分,分别占其总成分百分比为62.16%,53.70%,65.18%和58.76%,占其总含量百分比为80.01%,68.91%,68.62%和74.89%。所得成分中十六烷酸、亚油酸乙酯、亚油酸和邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯为主要成分。此外,所有样品都表现出一定的自由基清除活性,CX、SX、CG和SG的DPPH自由基清除率的IC50分别为30.66、29.77、15.99和21.11mg/mL,ABTS+自由基清除率的IC50分别为35.72、21.08、23.40和15.45mg/mL。【结论】不同提取方法和不同样品状态对其主要成分的种类含量影响较小;4种测定样主要成分基本一致,但低含量的成分差别较大;并且瓦布贝母乙醚溶解成分有一定的抗氧化活性;所用GC-MS分析方法简便、快速、灵敏度高,结果可进一步促进对瓦布贝母药效物质基础的认识。

川产贝母新资源瓦布贝母研究进展

查阅文献,对瓦布贝母的分类等级研究、化学成分研究及药理研究进行综述,为瓦布贝母的深入系统研究提供参考。

瓦布贝母地上茎叶提取物的纯化工艺研究

目的:优选瓦布贝母地上茎叶提取物的最佳纯化工艺。方法:以解吸液中的总生物碱含量为指标,考察大孔吸附树脂对瓦布贝母地上茎叶提取物的最佳吸附及洗脱条件。结果:以X-5大孔吸附树脂为最佳纯化树脂,上样液浓度为5.221mg/g、上样pH值为8.5,洗脱液为pH=3、浓度为75%的乙醇50BV冲洗大孔吸附树脂,提取物中总生物碱含量达到最高为18%。结论:该方法能明显提高瓦布贝母地上茎叶部分提取叶中的总生物碱含量,实验优选的工艺能够满足瓦布贝母地上茎叶提取物的纯化要求。

氮磷钾配施对瓦布贝母产量及总生物碱质量分数的影响

为了研究不同施肥水平下瓦布贝母产量和总生物碱质量分数的差异,确定合理的施肥量。采用三因素五水平二次通用组合设计进行田间试验,在室内进行产量和总生物碱质量分数的测定,根据三元二次通用旋转设计原理对数据进行方差分析,分别建立瓦布贝母增重率和总生物碱质量分数与N( X 1)、P( X 2)、 K( X 3)施用量的数学函数模型。结果表明,肥料的增产效果依次为磷肥>氮肥>钾肥,对瓦布贝母生物碱的影响效果为氮肥>钾肥>磷肥。通过数据模型选优,综合考虑产量和总生物碱质量分数,得到合理的肥料施用量:尿素8.98~12.00 kg/hm^2、过磷酸钙38.79~43.37 kg/hm^2、硫酸钾17.44~24.49 kg/hm^2。

瓦布贝母中一瓦布碱的2D NMR研究

从四川产家种贝母新种———瓦布贝母（Ｂｕｌｂｕｓ Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ Ｗａｂｕｅｎｓｉｓ Ｓ．Ｙ．Ｔａｎｇ ｅｔ Ｓ．Ｃ．Ｙｕｅｈ） 鳞茎中分离出一生物碱．经采用ＤＥＰＴ、１Ｈ－ １ＨＣＯＳＹ、１３Ｃ－ １ＨＣＯＳＹ ＭＭＲ 等多种技术对化学结构及构型进行了研究，确证该生物碱为西贝素β氮氧化物（ｉｍｐｅｒｉａｌｉｎｅβＮＯｘｉｄｅ） ．

瓦布贝母内生真菌共培养发酵产物抗氧化活性研究

采用DPPH自由基清除、ABTS自由基清除及FRAP铁离子还原能力三种方法对五株瓦布贝母内生真菌单培养、两两共培养无菌发酵液进行抗氧化活性研究,再测定活性较高组合发酵液的石油醚(30~60℃)、乙酸乙酯和正丁醇提取物的抗氧化活性,以维生素C作为阳性对照。结果发现在瓦布贝母内生真菌两两共培养中,4WBY1+WBS019、6WBY3+WBS019和WBS019+WBS020三个组合无菌发酵液的抗氧化活性至少在两项抗氧化方法评价下均极显著高于单培养。试验还发现,上述三个组合的乙酸乙酯提物和正丁醇提物的抗氧化活性较强;WBS019+WBS020组合的乙酸乙酯提物在1.8 mg/m L时,对DPPH自由基清除率可达74.38%±0.65%;6WBY3+WBS019组合的正丁醇提取物(IC_(50)=0.25 mg/m L)对ABTS自由基清除作用与维生素C(IC_(50)=0.07mg/m L)相对接近;三个组合的各提取物对Fe3+还原能力均较弱,远低于阳性对照。说明在适当条件下开展内生真菌共培养具有潜在利用价值。

瓦布贝母与松贝母中贝母素甲和贝母素乙的含量对比研究

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)同时测定瓦布贝母中贝母素甲和贝母素乙含量的方法,并与松贝母进行比较,为科学评价和有效控制瓦布贝母药材质量提供可靠方法。方法色谱柱:Dia-monsil Cl8(250. 0 mm×4. 6 mm,5μm),流动相:乙腈A-0. 05%——二乙胺水C(70∶30),流速:1 m L/min,ELSD漂移管温度:85℃,氮气流速:1. 5 L/min,增益值:2,柱温:30℃。结果贝母素甲和贝母素乙分别在0. 452～2. 712μg和0. 660～3. 96μg范围内线性关系良好,加样回收率(n=6)分别为99. 50%、100. 37%,RSD分别为1. 14%、1. 91%。瓦布贝母栽培品中贝母素甲和贝母素乙的含量均高于其野生品和松贝母。结论此方法操作简便,结果准确、可靠,可用于瓦布贝母药材的质量评定,瓦布贝母栽培品中生物碱含量较高。

瓦布贝母组织培养及生物碱的测定

为缓解川贝母的市场供需矛盾,本研究利用组织培养技术生产瓦布贝母再生鳞茎,探究了适宜的组织培养条件,并采取酸性染料比色法测定总生物碱.结果发现,鳞茎采用75%酒精约10 s和0.1%升汞15 min灭菌,外植体污染率最低;不同种类和浓度范围的激素能够影响外植体的启动和生长状况,NAA和6-BA浓度范围分别控制在0.5~2.0 mol/L,均能诱导出再生鳞茎;不同激素培养条件下,瓦布贝母再生鳞茎总生物碱存在差异,有超过一半的再生鳞茎总生物碱含量达到中华药典的规定要求,因此,组织培养是获取瓦布贝母活性成分的一种有效途径.

微肥配施对瓦布贝母产量和总生物碱含量的影响

为探究锌、硼和钼对瓦布贝母产量和总生物碱成分含量的影响及最适需肥量,采用三因素五水平二次正交旋转组合设计进行田间试验,结合室内分析,分别建立瓦布贝母增重率和总生物碱含量与锌(X_1)、硼(X_2)、钼(X_3)施用量的数学函数模型。结果表明,所建立的回归方程均达到显著水平。通过数据模型选优,施用锌肥8.21~11.49 kg·hm^(-2)、硼肥10.86~16.42 kg·hm^(-2)、钼肥0.47~0.66kg·hm^(-2)时,瓦布贝母增重率大于113.75%;施用锌肥7.30~12.40 kg·hm^(-2)、硼肥11.14~16.14kg·hm^(-2)、钼肥0.31~0.51 kg·hm^(-2)时,总生物碱的含量大于0.43%。综上,在瓦布贝母生产中,应根据土壤肥力状况采用适宜的微肥配比。本研究结果为提高瓦布贝母产量和总生物碱含量提供了理论依据。

HPLC-ELSD法测定西藏林芝地区野生瓦布贝母中3种生物碱的含量

目的以贝母辛、西贝母碱、贝母素乙3种生物碱成分为指标,考察西藏林芝地区不同产地野生瓦布贝母的品质情况,为今后林芝地区川贝母人工种植种质选育奠定实验基础。方法采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Welch Ultimate AQ-C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%（体积分数）二乙胺（体积比70∶30）,流速为1.0 mL/min,检测器为蒸发光散射检测器。结果林芝地区6批野生瓦布贝母中的贝母辛、西贝母碱和贝母素乙质量分数分别是川贝母对照药材的1.79-2.70倍、2.13-3.64倍和1.88-2.37倍。结论林芝地区的野生瓦布贝母品质较好,可作为人工种植育种的种质来源。

基于对瓦布贝母核苷类成分贡献率的锌硼钼最优配施浓度

【目的】核苷类成分为贝母的主要活性物质,本研究分析了锌硼钼配施对瓦布贝母核苷类成分含量的影响,以优化瓦布贝母最佳微肥施用配方。【方法】以鳞茎大小为12 mm的四年生瓦布贝母为种源,在四川川贝母标准化生产基地进行田间小区试验。设置锌肥、硼肥、钼肥的三因素五水平二次正交旋转组合设计。在瓦布贝母现蕾期、初花期、盛花期、幼果期进行叶面喷施,喷施量分别为各微量元素总量的20%、30%、30%、20%。五年生瓦布贝母倒苗后采收鳞茎,测定了干鳞茎中10种核苷含量。采用最小二乘法、灰色关联度和DTOPSIS法计算每种或几种微量元素含量及对核苷含量的贡献率,提出优化施肥方案。【结果】根据贡献率分析表明,锌肥对尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶和肌苷贡献率最大,硼肥对胞苷和鸟嘌呤核苷贡献率最大,钼肥对尿嘧啶和胸苷贡献率最大。单因素效应分析表明,锌肥和硼肥对胞苷有显著影响,钼肥对胸苷有显著影响。互作效应分析表明,锌–硼互作对尿嘧啶产生协同作用,对胸腺嘧啶、尿嘧啶核苷和胸苷产生拮抗作用;锌–钼互作对尿嘧啶、尿嘧啶核苷和肌苷产生协同作用;硼–钼互作对胞苷、胸苷、鸟嘌呤核苷和尿嘧啶核苷产生拮抗作用。灰色关联度和DTOPSIS法分析得出核苷含量综合最优处理。【结论】确定最优的施肥范围:锌肥为8.05~11.85 kg/hm^2;硼肥为11.70~16.47 kg/hm^2;钼肥为0.36~0.51 kg/hm^2。通过灰色关联度和DTOPSIS法进行分析得出,当使用锌肥15.71 kg/hm^2、硼肥5.53 kg/hm^2、钼肥为0.65 kg/hm^2时瓦布贝母10种核苷的含量综合最优。

西藏林芝地区川贝母(瓦布贝母)总生物碱含量研究

目的以总生物碱含量为指标,考察西藏林芝地区不同产地野生川贝母（瓦布贝母）的品质情况,为今后林芝地区川贝母人工种植种质选育奠定实验基础。方法以西贝母碱为对照品,紫外分光光度法测定川贝母（瓦布贝母）总生物碱的含量。结果所测林芝地区川贝母（瓦布贝母）中总生物碱的含量均高于《中国药典》要求,是其规定含量的1.26-3.44倍。结论林芝地区的野生川贝母（瓦布贝母）可作为人工种植育种的种质来源。