非直接选育对瓯江彩鲤形态性状的影响

在鱼类育种中,体质量通常是直接选育的目标性状,形态性状因与体质量的相关性而受到非直接选育的影响。为探讨非直接选育对形态性状的影响,以体质量和体色为目标性状、经过11代闭锁群体继代选育的5种体色瓯江彩鲤(“全红”“大花”“麻花”“粉玉”和“粉花”)选育系以及其奠基群体为材料,进行了与奠基群体形态性状相关的分析研究。单因素方差分析发现,在25个形态比例性状中,5个选育系有16~21个性状与奠基群体存在显著差异(P<0.05)。差异倍数分析显示,2个性状在所有选育系中上调明显,1个性状则下调明显。主成分分析显示,5个体色选育系均能与奠基群体明显区分开来;聚类分析发现,奠基群体的所有个体单独聚为一支,与5个选育系距离较远;判别分析指出,选育系与奠基群体间的判别准确率达100%。但以上分析均显示,5个选育系之间不能有效区分,相互间的形态差异较小。分析结果表明,非直接选育已对瓯江彩鲤的形态性状产生了较明显的影响。

贵州稻田养殖瓯江彩鲤肌肉生化成分分析

本研究分析了稻田养殖瓯江彩鲤的肌肉生化成分,旨在了解瓯江彩鲤在贵州省稻田养殖条件下的营养特点。试验采用常规营养成分分析方法以及生化方法测定了稻田养殖瓯江彩鲤肌肉中营养及生化成分。结果表明:稻田养殖瓯江彩鲤肌肉中水分含量为74.66%,粗蛋白质含量为18.06%,粗脂肪含量为4.26%,灰分含量为1.65%。粗脂肪中中性脂比例为84.45%,极性脂比例为15.55%。肌肉中所测到的15种氨基酸总量为70.57%,其中7种必需氨基酸占29.61%,非必需氨基酸占40.96%,鲜味氨基酸占27.83%。肌肉中含有21种脂肪酸,其中饱和脂肪酸占25.08%,单不饱和脂肪酸占41.89%,多不饱和脂肪酸占33.03%。矿质元素中钙、铁、锌含量较高,分别为350.33、58.13和46.27mg/kg。由此可知:相对于原产地瓯江彩鲤,稻田养殖瓯江彩鲤肌肉中干物质、粗脂肪和灰分含量较高,氨基酸组成接近FAO/WHO的理想模式,此外,不饱和脂肪酸和铁、锌含量亦较高。

瓯江彩鲤生殖周期内卵巢成熟系数及脂类、脂肪酸的变化

采用生化方法测定了瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)卵巢不同发育时期的成熟系数及卵巢脂类、脂肪酸含量与组成,旨在了解瓯江彩鲤卵巢中脂类、脂肪酸的变化与卵巢发育及卵细胞成熟之间的关系。结果显示:卵巢中总脂含量在产卵前最高,占干重17.62%,产卵后显著下降到12.84%(P<0.05),到快速生长期又出现稍微下降,之后在越冬期开始呈上升趋势。4个时期中,C16∶0(软脂酸)、C18∶1n-9c(油酸)、C18∶2n-6c(亚油酸)均是卵巢中的主导脂肪酸,其含量显著高于其它脂肪酸(P<0.05);产卵前,卵巢中脂肪酸含量高,但种类较少,产卵后,卵巢中脂肪酸含量低,但种类较多;随卵巢的发育,不饱和脂肪酸的比例增加,从快速生长期到产卵前,C20∶4n-6(ARA)与C22∶6n-3(DHA)的含量逐渐上升,最高分别达11.63 mg/g、17.80 mg/g。结果表明:不同时期卵巢中脂类含量与成熟系数呈正相关,卵巢成熟需积累较多脂类物质。不饱和脂肪酸尤其是DHA、ARA对卵巢的成熟具有重要作用。

“全红”瓯江彩鲤不同世代间的遗传结构及遗传分化初步分析

利用ISSR技术对"全红"瓯江彩鲤(Cyprinus car pio var. color)4个世代群体的遗传结构及其分化进行了分析。筛选的15个ISSR引物从4个世代群体中分别扩增到120、118、101和110条扩增谱带,全部扩增片段长度在200—2500bp之间。根据扩增结果,利用POPGENE version 1.31进行分析,结果表明:4个群体的多态位点比例(P)为51.49%—67.80%,Shannon信息指数(Ho)为0.2176—0.2745之间,并随着世代的增加,选育群体的遗传多样性呈现下降趋势。有70%的遗传变异来自于群体内;结合遗传分化指数Gst、UPGMA聚类分析,证实"全红"瓯江彩鲤4个世代间存在一定程度的遗传分化,即任意两个群体间的遗传分化达到较大的水平(Gst均为0.1588—0.2766)。

瓯江彩鲤配套选育系繁殖性状的配合力测定与杂交优势分析

以瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)5个配套选育系进行双列杂交产生的F1的数据为分析对象,利用统计学和数量遗传学方法对6个繁殖性状(雄鱼性腺指数、雌鱼性腺指数、绝对繁殖力、相对繁殖力、受精率和孵化率)进行了配合力测定和杂交优势分析。结果发现,不同组合间的繁殖性状存在较大差异,但以"麻花"作母本的交配组合的平均雌鱼性腺指数和孵化率最高,以"全红"作母本的交配组合的绝对繁殖力和相对繁殖力最高,以"粉花"作母本的交配组合的所有繁殖性状参数均较差;雌鱼性腺指数与绝对繁殖力、相对繁殖力之间均存在显著的表型相关(r=0.411～0.847,P=0.01～0.04),绝对繁殖力与相对繁殖力之间存在极显著的表型相关(r=0.847,P<0.01);雌鱼性腺指数、绝对繁殖力和相对繁殖力3个性状检测到显著的特殊配合力;通过遗传效应预测,10个杂交组合均存在特殊配合力与杂交优势预测值,其雄鱼性腺指数、雌鱼性腺指数、绝对繁殖力、相对繁殖力和孵化率的杂交优势与特殊配合力均呈极显著相关(r=0.959～0.985,P<0.01)。本研究结果为瓯江彩鲤配套系育种提供了参考数据。

“全红”体色瓯江彩鲤MHC-DAB基因多态性及其与鱼体抗病力关系的分析

利用一对特异性引物DABF和DABR,分别从21尾感病和16尾抗病"全红"体色瓯江彩鲤的cDNA中,扩增出长度为624 bp的MHC-DAB基因片段。共测序185个有效克隆,获得76个不同的核苷酸序列。MHC-DAB基因片段包括第1～4外显子,分别编码信号肽、β1和β2结构域及跨膜区。长度为276 bp的β1结构域有144个核苷酸变异位点(52.17%)和70个氨基酸变异位点(76.07%),而长度为282 bp的β2结构域只有98个核苷酸变异位点(34.75%)和50个氨基酸变异位点(53.19%),显示β1结构域的变异要明显大于β2结构域。在β1结构域的24个抗原结合位点(PBR)上,有23个发生了变异。β1结构域的PBR、非抗原结合位点(non-PBR)及β2结构域的ω值(ω=dN/dS)分别为1.367、0.886和0.754,表明"全红"体色瓯江彩鲤MHC-DAB基因(特别是β1结构域)在进化过程中受到正向选择作用。在所得的20个不同的等位基因中,基因DAB3*15在抗病群体中出现的频率(13.75%)显著高于感病群体中出现的频率(3.81%)(P<0.05);基因DAB3*09和DAB3*10的出现频率都为3.75%(P<0.05),仅存在于抗病群体中;而基因DAB3*02和DAB3*14的出现频率分别为7.62%(P<0.05)和8.57%(P<0.01),仅存在于感病群体中。

瓯江彩鲤早期发育中两种脂酶活性及间甲酚对其活性的影响

采用生化和静态急性毒性实验方法,研究了瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)早期发育过程中脂蛋白脂酶和肝脂酶活性变化及间甲酚对它们活性的影响。结果显示,脂酶在瓯江彩鲤成熟卵和受精卵中均有活性,脂蛋白脂酶和肝脂酶的活性在胚胎发育过程中总体上呈上升趋势,原肠胚期酶活性最高;在水温(20±2)℃条件下,经7 mg/L、13 mg/L和19 mg/L的间甲酚暴露,脂酶活性随着间甲酚的浓度升高先升高后下降,19 mg/L浓度组中肝脂酶活性在胚胎期与其他组均有显著差异(P<0.05);与对照组相比,7 mg/L浓度组脂蛋白脂酶活性在胚胎和仔鱼期均有显著差异(P<0.05)。

瓯江彩鲤鱼鳞的生化成分分析

为了解瓯江彩鲤鳞片的生化组成特征,采用常规营养分析方法及生化方法测定了瓯江彩鲤鱼鳞中营养及生化成分。结果表明:瓯江彩鲤鱼鳞中水分含量为(51.12±0.54)%,干物质中,总蛋白含量为(75.72±2.73)%,总脂含量为(2.00±0.08)%,矿质元素含量为(20.23±0.89)%;所测鱼鳞中的17种氨基酸总量占干重的(60.80±6.33)%,其中,必需氨基酸占(13.02±0.76)%,非必需氨基酸占(47.78±5.57)%;必需氨基酸中赖氨酸(Lys)含量最高,为(2.77±0.23)%,非必需氨基酸中甘氨酸(Gly)含量最高,为(16.63±1.99%);鱼鳞中检测到19种脂肪酸,其中,饱和脂肪酸占(23.69±0.18)%,单不饱和脂肪酸占(43.76±1.20)%,多不饱和脂肪酸占(32.55±1.02)%,脂肪酸中含量最高的为C18:1n-9c(油酸),其次为C18:2n-6c(亚油酸),另外还检测到C20:5n-3(EPA)与C22:6n-3(DHA);矿质元素中钙、磷、镁、锌含量较高,分别为(62.80±11.30)g/kg、(32.90±7.90)g/kg、(3.54±0.38)g/kg和(95.60±18.20)mg/kg。瓯江彩鲤鱼鳞中总蛋白、矿质元素含量较高,富含不饱和脂肪酸,具有较高的食用及加工利用价值。

5种体色瓯江彩鲤线粒体COII基因的序列差异和遗传标记研究

利用PCR方法扩增获得瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)线粒体DNA的COII基因,测定该基因片段序列.分析了瓯江彩鲤"全红"、"粉玉"、"粉花"、"麻花"和"大花"共20只个体的序列核苷酸位点差异和遗传多态性.结果表明,"大花"和"全红"遗传多样性最为丰富,"粉花"的遗传多样性相对贫乏.在长度为604 bp的基因片段中,共检测到9个多态性核苷酸位点(占1.49%),20只个体具有4种基因型,5种体色各自的平均核苷酸位点差异分别为0.38%、0.2%、0、0.13%和0.47%.UPGMA分子系统聚类树显示,"粉花"、"麻花"和"粉玉"的遗传关系接近;"全红"相对独立成一支,与其他4种体色瓯江彩鲤的遗传关系较远.COII基因可以作为区分三分支群体的遗传标记.

瓯江彩鲤形态特征的两性异形和雌性个体生育力

研究了瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)体重和形态特征等19个参数的两性异形及雌性个体生育力。结果表明:除特定体长1龄雌性个体的体高和体重显著小于雄性个体外,其它17个性状不存在显著的雌雄两性异型。在2龄鱼中,雌性个体的头长、头宽、头高、眼后头长、眼间距、尾鳍长、体重和躯干重显著大于雄性个体,而体高却显著小于雄性个体,其它性状也不存在显著的雌雄两性异型;对这9个差异显著的形态特征变量进行主成分分析发现,第一和第二主成分共解释67.6%的变异,体高、体重和躯干重在第一主成分有较高的正负载系数(解释42.9%变异),头宽和眼间距在第二主成分有较高的正负载系数(解释24.7%变异)。以年龄、性别为固定效应的两因素方差分析(Two-way ANOVA)显示,1龄鱼第一主成分的分值显著小于2龄鱼,雌性第二主成分的分值显著大于雄性,其它主成分的年龄、性别间无显著差异,两因素交互作用对第一、第二主成分的分值亦无显著影响。雌性个体的生育力结果表明,瓯江彩鲤的怀卵数量与体长和体重回归关系显著。偏相关分析表明,雌性怀卵数量与体重呈显著的正相关(P<0.004),而与体长的相关不显著(P=0.502)。生育力选择是瓯江彩鲤个体大小和局部特征两性异形的主要原因之一。

四种体色瓯江彩鲤形态性状与体质量的相关性与通径分析

为了解4种体色类型瓯江彩鲤(Cyprinuscarpiovar.color)(“大花”-BR、“粉花”-BW、“全红”-WR、“粉玉”-WW)的形态性状与体质量的相关程度,本研究对12月龄的4种体色瓯江彩鲤的相关形态性状(体长X1、体宽X2、体高X3、头长X4和尾柄高X5)与体质量(Y)进行了相关分析、回归分析及通径分析。结果显示,“全红”体色在所测性状的变异系数均为最高,具有相对较大的选育潜力;4种体色瓯江彩鲤中各形态性状与体质量的相关性均达到极显著水平(P<0.01),其中,以体高与体质量的相关程度最高。应用逐步引入-剔除法分别构建了4种体色瓯江彩鲤形态性状对体质量的回归方程:即BR为Y1=-517.069+12.628X1+67.916X2+94.885X5;BW为Y2=-525.711+38.085X2+68.869X3+72.206X5;WR为Y3=-502.952+90.980X2+18.172X4+113.965X5;WW为Y4=-537.119+22.932X1+55.113X2+48.203X5。通过通径分析发现,BR和WR群体的X2对Y的直接作用最大(0.387,0.504),BW群体的X3对Y的通径系数最大(0.546),WW群体的X1对Y的通径系数最大(0.508)。研究表明,4种体色瓯江彩鲤的形态特征差异较为明显,各形态性状对体质量的影响程度存在较大差异。研究结果将为瓯江彩鲤的进一步选育提供有益参考。

与“全红”瓯江彩鲤体色相关的SRAP及SCAR分子标记

利用相关序列扩增多态性(Sequence Related Amplified Polymorphism,SRAP)技术分析"全红"和"粉玉"瓯江彩鲤,筛选与瓯江彩鲤体色相关的分子遗传标记。从88个SRAP引物组合筛选出的12个引物组合共获得扩增条带104个,并筛选出1个SRAP特异扩增带,即"全红"瓯江彩鲤家系SR2,7173 bp带。该条SRAP特异扩增条带经回收、克隆和测序,并将测序结果进行BLAST分析,发现该片段在GenBank中与斑马鱼的POl多蛋白基因和尿红素基因有较高的同源性。根据序列信息分别设计了4对正、反向引物(22—26 bp)。用4对引物分别在"全红"瓯江彩鲤F2和"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中进行PCR扩增,仅发现SC-3(154 bp)能够在"全红"瓯江彩鲤群体中特异扩增,而且在"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中未出现此扩增带。采用大样本对该SC-3标记进行验证,结果发现,在"全红"瓯江彩鲤群体中呈现阳性,而在"粉玉"瓯江彩鲤群体中为阴性,可以区分这两种群体。因此SC-3标记可以作为"全红"瓯江彩鲤群体一个重要的分子遗传特征指标,为进一步进行分子标记辅助育种奠定了基础。

瓯江彩鲤早期发育过程中磷酸酶活性及间甲酚对其活性的影响

为探究环境雌激素对鱼类早期发育的毒性作用,采用生化和静态急性毒性试验方法,研究了瓯江彩鲤早期发育过程中碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性的变化及间甲酚对瓯江彩鲤早期发育中磷酸酶活性的影响。试验结果表明,瓯江彩鲤受精卵中磷酸酶活性均低于成熟卵,卵裂期酶活性最低;在水温(20±2)℃条件下,经7、13、19mg/L的间甲酚暴露,各质量浓度组磷酸酶活性表现为良好的剂量—效应和发育时期—效应关系。总体来说,瓯江彩鲤从原肠胚期开始,磷酸酶活性随着发育时间的延长和暴露质量浓度的增加而升高。

不同密度瓯江彩鲤生长速度及养殖效果

规格为 2m× 2m× 1m的 10只网箱中 ,分别放养均重 3 4.3g瓯江彩鲤 (全红 )鱼种 3 60、480、60 0、72 0和 840尾 ,每种密度设置 1个重复。养殖期 195d。实验结束时 ,个体均重分别为 75 6.0 0、73 6.5 5、711.75、70 2 .0 0及 686.90g ,随密度增加而下降。除 840尾 /箱试验组外 ,各密度绝对增重率趋势基本相同 ,以 7、9及 10月份生长较快 ,均在 4g/d以上。单位面积净产量、产投比均以 840尾 /箱试验组为最高 ,分别为 12 8.0 0kg/m2 和 2 .48。各组存活率均在 90 %以上。饵料系数为 1.97～ 2 .0 9。综合考虑生长速度、单位面积净产量、产投比、饵料系数、存活率等因素 ,认为现有的放养规格下 ,每箱 840尾 (2 10尾 /m3) ,是比较好的放养密度 ,能够充分利用水体 ,取得较高经济效益。

“粉玉”体色瓯江彩鲤MHC class Ⅱ B基因多态性及其与鱼体抗病力的关系

利用1对特异性引物DABF和DABR,分别从30尾感病和13尾抗病"粉玉"体色瓯江彩鲤(Cyprinus carpiovar.color)的cDNA中扩增出长度为624 bp的MHC classⅡB基因片段。对210个有效克隆进行测序,获得84个不同的编码序列,分属13个不同的等位基因,其中Cyca-DAB3*17和Cyca-DAB3*18为新发现的2个等位基因。核苷酸、氨基酸变异位点总数为267、130,变异率较高(42.79%、62.50%)。MHCⅡB基因片段包括第1 4个外显子,分别编码信号肽、β1和β2结构域及跨膜区。β1结构域的变异明显大于β2结构域,表现为在长度为276 bp的β1结构域中,核苷酸、氨基酸变异位点分别为150个(54.35%)和72个(78.26%);而长度为282 bp的β2结构域的核苷酸、氨基酸变异位点较少,分别为105个(37.23%)和54个(57.45%)。在β1结构域的24个抗原结合位点(PBR)上,有22个发生了变异。β1结构域的PBR、非抗原结合位点(non-PBR)及β2结构域的非同义碱基替换率(dN)与同义碱基替换率(dS)的比值ω分别为1.366、0.992、0.792,表明"粉玉"体色瓯江彩鲤MHC classⅡB基因的β1结构域在进化过程中受到正向选择作用。基因Cyca-DAB3*09在抗病群体中出现的频率(7.81%)显著高于感病群体(1.37%,P<0.05),新等位基因Cyca-DAB3*18(频率为3.13%)只出现在抗病群体中,基因Cyca-DAB1*08、Cyca-DAB3*08和Cyca-DAB3*17为感病群体所特有。研究结果为抗病"粉玉"体色瓯江彩鲤的选育奠定了基础。

瓯江彩鲤红、白两种体色遗传关系的初步研究

相对于鲤的普通体色（青灰色）来说，红和白体色均为隐性基因控制。为分析红与白体色之间的遗传关系，通过各自能稳定遗传的红和白体色类型的瓯江彩鲤进行杂交，对4个F1家系和8个F2家系的体色进行了统计与分析，结果发现：无论是正交还是反交F1个体全为红色，F2中红色与白色个体的分离比例为2．75～3．00：1，符合孟德尔遗传规律；红色由显性基因控制，白色由隐性基因控制。研究表明鱼类体色间的显隐性关系是相对的，会随配对体色的不同而表现出显性或隐性关系。

瓯江彩鲤仔鱼摄食与生长研究

对瓯江彩鲤卵黄囊期仔鱼的发育进行了连续观察,研究其在开口摄食前的发育、生长以及初次摄食饥饿不可逆点(PNR)。结果表明:(1)仔鱼对卵黄囊的日净消耗量的最大值出现在出膜后的第1d,体长最大增长率出现在3日龄仔鱼;(2)孵化后第7d即6日龄仔鱼,卵黄囊基本全部被吸收,同时,饥饿期仔鱼开始出现负生长;(3)3日龄仔鱼开始摄食,5日龄仔鱼初次摄食率达84.38%,8日龄仔鱼降到41.94%,进入PNR,从刚孵化到仔鱼初次摄食饥饿"不可逆点"的时距达9d;(4)仔鱼混合营养期较短,为3d,摄食能力时间可持续8d。

铜和阿特拉津对瓯江彩鲤的联合毒性研究

以瓯江彩鲤为试验材料,采用联合指数相加法,研究了铜和阿特拉津对瓯江彩鲤的急性毒性和联合毒性效应.实验结果表明:Cu2+的毒性大于阿特拉津毒性;Cu2+对瓯江彩鲤24、48、72和96 h的LC50分别为0.74、0.40、0.34和0.29 mg.L-1,阿特拉津对瓯江彩鲤24、48、72和96 h的LC50分别为68.16、52.14、48.33和42.37 mg.L-1.联合毒性实验结果表明,24、48、72、96 h的相加指数分别为2.17、1.35、1.59、2.08,Cu2+和阿特拉津共存时对瓯江彩鲤的毒性为协同作用.

瓯江彩鲤体色相关基因Sox10的分离与表达分析

为探明鱼类体色变异的相关调控因子，采用RT-PCR及RACE技术获得总长度为2830bp的瓯江彩鲤（Cyprinus carpio var．color）SoxlO基因eDNA序列。该基因序列的5’和3’非编码区分别为9bp和1375bp，开放阅读框1446bp，编码481个氨基酸。氨基酸序列的系统发育分析表明，瓯江彩鲤Soxl0基因的氨基酸序列与部分物种的相似性在59％～94％。RT-PCR分析表明，该基因在瓯江彩鲤皮肤、肌肉、眼睛和鳔表达量最高，鳃和心表达量次之，肾和肝没有表达。荧光定量PCR分析显示，Soxl0基因在体色类型为白色（“粉玉”体色）的表达量显著地高于其他体色（P〈0．05），“粉花”黑色皮肤中的表达量最低，显著低其他体色类型（P〈O．05），而其他体色类型的表达差异不显著俨〉0．05）。结果发现，SoxlO基因在瓯江彩鲤的体色变异中发挥着调控作用。

糖萜素对瓯江彩鲤生长性能和肉质影响研究

试验选择体重(95±2.0)g瓯江彩鲤108尾,随机分为3组,每组3个重复,每个重复12尾鱼。各组分别在日粮中添加0、100、400mg/kg糖萜素,进行为期8周饲养试验。研究日粮中添加糖萜素对瓯江彩鲤生长性能和肉质的影响。结果表明:饲料中添加100mg/kg糖萜素组增重率显著高于0mg/kg和400mg/kg糖萜素组(P<0.05),不同试验组饵料系数和肌肉中水分、灰分、粗蛋白质、粗脂肪含量差异不显著(P>0.05)。