甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆NKB动态变化及HPO轴NK3R的表达

为探讨神经激肽B(NKB)和神经激肽B受体(NK3R)在甘加型藏羊(Ovis aries)繁殖调控中的作用,本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(western blot)和免疫组织化学(IHC)方法,对甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆NKB含量、下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴组织NK3R mRNA及蛋白的表达和分布进行检测。结果表明,甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆中NKB含量呈动态变化,NKB平均含量在发情期最低、间情期最高,二者差异显著(P<0.05),发情周期各时期的NKB含量均高于乏情期。发情周期和乏情期HPO轴组织均有NK3R mRNA和蛋白表达,且各时期表达存在差异,下丘脑中发情前期NK3R mRNA表达量最高,显著高于发情期、发情后期、间情期和乏情期(P<0.05),NK3R蛋白在发情后期表达量最高;垂体中间情期NK3R mRNA表达量最高,与其他时期差异显著(P<0.05),NK3R蛋白在发情期表达量最高;卵巢组织中NK3R mRNA和蛋白表达趋势一致,均在发情前期表达量高;NK3R蛋白主要分布于下丘脑神经内分泌小细胞和神经胶质细胞,垂体嗜酸性细胞、嫌色细胞、嗜碱性细胞,卵巢颗粒层细胞、卵泡膜、黄体细胞中。以上结果表明,NKB与HPO轴特异性受体NK3R结合,参与调节甘加型藏羊生殖内分泌和周期性发情等生殖活动。本研究结果可为深入探究藏羊繁殖调控机理提供科学依据。

甘加型藏羊血浆E_2动态变化及其受体GPR30在HPO轴的表达及定位研究

[目的]旨在探讨雌二醇(E_(2))与其膜受体(GPR30)对甘加型藏羊(Ovis arise)生殖活动的调控作用,以期为甘加型藏羊生殖生理活动规律提供研究依据。[方法]以甘加型藏羊为试验材料,采用酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR法、免疫印迹法和免疫组织化学染色法分别检测甘加型藏羊繁殖季节不同发情阶段(发情前期、发情期、发情后期和间情期)与非繁殖季节的乏情期血浆中E_2含量的动态变化、GPR30 mRNA及其蛋白在HPO轴的表达水平和分布情况。[结果]繁殖季节不同发情阶段与非繁殖季节乏情期血浆中E_(2)浓度呈波动式变化,波峰出现在发情后10,24,36 h和发情前期的第16天早晨,波谷出现在发情后22,39,60 h、第5天早晨和发情前期的第14天早晨,E_(2)平均浓度在发情期最高[(73.269±0.241) pg/mL],间情期最低[(57.919±0.547) pg/mL],除发情后期外,且与其他各时期差异显著(P<0.05);下丘脑和卵巢中GPR30 mRNA和蛋白的最高表达量均出现在其发情后期(P<0.05),但垂体中GPR30 mRNA表达量在间情期最高,蛋白表达量在发情前期最高(P<0.05);GPR30免疫阳性细胞主要在下丘脑大神经元胞体、胞核及轴突、神经胶质细胞胞浆,垂体嗜酸性和嗜碱性细胞胞浆以及卵巢卵泡颗粒层细胞、卵泡膜细胞和黄体细胞胞浆上表达。[结论]甘加型藏羊发情周期血浆E_(2)浓度在发情期最高,间情期最低;发情周期各时期GPR30 mRNA、GPR30蛋白及其免疫阳性细胞在下丘脑、垂体和卵巢中均有差异性表达,其中下丘脑和卵巢中GPR30 mRNA和蛋白的表达呈正相关,垂体中呈负相关,表明E_(2)通过与分布在HPO轴上的GPR30受体结合,调节甘加型藏羊周期性发情和生殖器官功能活动。

甘加型藏羊种质特性研究

本研究以甘加羊为研究对象,通过现场资源调查和实验室分析相结合的方法,对甘加羊种质资源现状、及毛、肉品质进行了系统的研究。结果表明甘加羊属肉毛兼用型异质粗毛羊,主要分布在甘南州夏河县甘加乡、达麦乡和唐尕昂乡,以夏河县甘加乡为中心产区。甘加羊羊毛两型毛、无髓毛和有髓毛的细度分别为43.47μm、24.10μm和91.37μm;甘加羊羊毛含脂率和净毛率分别为6.48%和68.25%。甘加羊羊肉中水分含量低,干物质含量和粗蛋白含量较高,肌肉内脂肪含量适中,灰分含量较低,矿物质、维生素含量丰富,其中Fe和Zn的含量分别为31.80 mg/100g和3.48mg/100g。

甘加型藏羊发情周期血浆雌激素测定及HPO轴ERα的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期内血浆雌激素的分泌规律及其受体α(Estrogen receptorα,ERα)在下丘脑-垂体-卵巢(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPO)组织中的表达及分布,选取发情周期内健康且未孕甘加型藏羊32只,运用酶联免疫分析法(ELISA)研究其血浆雌激素分泌规律,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹技术(Western Blot)和免疫组织化学染色法(IHC)检测HPO组织中ERαmRNA及蛋白的表达与分布。结果显示,发情周期内血浆雌激素含量呈脉冲式和波动式交替变化,发情期最高,发情后第10小时达到第1个峰值(97.21 ng/mL);ERαmRNA及蛋白在HPO中均有表达。下丘脑组织中发情后期最高,显著高于间情期;垂体组织中发情期最高,与其他3个时期差异显著;卵巢组织中在发情前期最高,各时期表达差异显著。免疫组织化学试验结果显示,ERα阳性表达主要在下丘脑促垂体区神经胶质细胞胞核和大神经元胞体及轴突分布;在垂体远侧部及中间部嗜酸性细胞胞核中高表达,胞浆中表达较弱,在卵巢的生长卵泡颗粒细胞胞浆和胞核、卵泡内膜细胞及黄体细胞胞浆中分布。甘加型藏羊发情周期内血浆雌激素及其受体在HPO组织中呈动态表达变化,表明雌激素及其受体α参与调节甘加型藏羊的生殖生理活动。

甘加型藏绵羊发情周期内输卵管和子宫中MTR1a mRNA的表达

旨在研究褪黑素受体(MTR1a)基因在甘加型藏绵羊(Ganga Tibetan ovis aries)输卵管和子宫组织中的表达规律,选取发情周期内正常且未孕的甘加型藏绵羊32只,应用qRT-PCR方法检测输卵管和子宫组织中MTR1a基因的表达差异。结果显示:在整个发情周期中,甘加型藏绵羊输卵管和子宫中均有MTR1a mRNA表达。在发情前期、发情期、发情后期、间情期4个阶段,输卵管组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.604±0.253、 0.033±0.031、 0.202±0.151和1.000±0.221,间情期的相对表达量最高,与发情期差异极显著,与其他时期差异显著;子宫组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.188±0.086、0.525±0.347、1.878±0.209和1.000±0.094,发情后期的相对表达量最高,与其他3个时期差异极显著。发情周期内MTR1a基因在输卵管和子宫中的表达变化规律表明褪黑素(Melatonin,MT)在动物排卵、受精及早期胚胎发育过程中起调节作用。

甘加型藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中ERβmRNA及其蛋白的表达

为阐明甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期下丘脑-垂体-卵巢(hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPO)轴中雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)mRNA和蛋白的表达及分布,本试验选取健康且在发情周期内的甘加型藏羊32只,运用qRT-PCR、Western blot技术和免疫组织化学染色法检测甘加型藏羊发情周期ERβmRNA及蛋白在HPO轴中的表达和分布差异。结果显示,甘加型藏羊整个发情周期(发情前期、发情期、发情后期及间情期)ERβmRNA及其蛋白在HPO轴中均有表达和分布。下丘脑中ERβmRNA及其蛋白在下丘脑中发情前期表达最多,显著高于其他3个时期(P<0.05);垂体中ERβmRNA及蛋白均在发情前期表达最高,与其他3个时期差异显著(P<0.05);在卵巢中间情期表达最高,显著高于其他3个时期(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,ERβ阳性表达主要分布在下丘脑大神经元胞体和轴突中;在垂体中多分布在远侧部及中间部嗜酸性细胞胞浆中,胞核中分布较少;在卵巢中,生长卵泡颗粒细胞胞浆和胞核、卵泡内膜细胞及黄体细胞胞浆中均有分布。ERβmRNA及其蛋白在甘加型藏羊发情周期HPO轴的差异性表达表明雌激素受体β参与调节甘加型藏羊的生殖生理活动。

甘加型藏羊选育效果浅析

甘加型藏羊本品种选育核心群公母羔平均初生重为4.15±0.59kg和4.02±0.53kg;3月龄公羔体重、体高、体长、胸围同比未选育群3月龄公羔分别提高4.42kg、4.34cm、5.05cm和5.98cm,3月龄母羔体重、体高、体长、胸围同比未选育群3月龄母羔分别提高2.37kg、5.1cm、5.17cm和4.77cm,均差异极显著(P<0.01)。6月龄公羔同比未选育群6月龄公羔体重提高2.98kg差异极显著(P<0.01),6月龄母羔同比未选育群6月龄母羔体重提高3.64kg差异极显著(P<0.01)。选育核心群18月龄公羊同比对照18月龄公羊体重提高6.18kg,剪毛量提高0.06kg差异不显著(P>0.05);18月龄母羊同比对照体重提高5.26kg差异极显著(P<0.01),剪毛量提高0.15kg差异显著(P<0.05)。经过三年的严格选育,核心群的羊只结构有了显著变化,种公羊和适龄母羊的比例更加合理,适龄母羊优秀个体比例显著提高,其中特级提高了4.7个百分点,一级提高了10.7个百分点。

甘加型藏羊与当地蒙古羊屠宰性能对比试验

甘加型藏羊和蒙古羊的各项屠宰性能指标存在差异,而且指标不同,差异的程度不同。在体重方面,甘加型藏羊的宰前活重为38.2 kg,较蒙古羊宰前活重重;各项指标除屠宰率比对照组低两个百分点外,在体高、体斜长、胸围、胴体重等体尺体重指标方面,甘加型藏羊都高于蒙古羊;净肉重显著高于蒙古羊(P<0.05);眼肌面积极显著高于蒙古羊,胴体产肉率指标也均高于蒙古羊(P<0.01)。

甘加型藏羊发情周期血浆孕酮动态变化及HPO轴PGR的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期血浆孕激素(P4)的分泌及孕激素受体(Progesterone receptor,PGR)在HPO轴中的表达,分析其在藏羊繁殖活动中的调控作用,本研究应用酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印迹法、实时荧光定量和免疫组织化学染色法检测甘加型藏羊发情周期血浆中孕酮含量的动态变化、HPO组织中PGR mRNA及其蛋白的表达和组织分布。结果显示:1)甘加型藏羊发情周期血浆孕酮呈波动式和脉冲式分泌,在间情期达到最高峰值,发情期最低,二者差异显著(P<0.05)。2)PGR mRNA及其蛋白在HPO组织中均有表达;下丘脑中,PGR mRNA及其蛋白相对表达量在间情期最高,各时期之间差异显著(P<0.05);垂体中,PGR mRNA表达量在发情后期达到最高,显著高于发情前期和间情期(P<0.05),发情前期蛋白相对表达量高于其他时期;卵巢中,PGR mRNA在发情期最高,与间情期差异显著(P<0.05),蛋白表达水平在发情前期最高。3)PGR免疫阳性反应产物表达在下丘脑神经胶质细胞和大神经元胞体中,腺垂体嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的胞浆中,卵巢生长卵泡的颗粒层细胞、卵泡膜细胞以及黄体细胞胞浆中。综上,甘加型藏羊发情周期血浆中孕酮含量的动态变化、HPO轴中PGR mRNA、蛋白的差异性表达表明孕酮通过与分布在HPO生殖轴上的PGR受体结合,调节甘加型藏羊周期性发情和生殖器官的功能活动。

甘加型藏羊发情周期阴道细胞变化规律

采用阴道涂片法,观察了8只甘加型藏羊连续2个发情周期阴道细胞涂片,统计分析了发情周期不同时期阴道细胞种类、形态变化特点及其所占比例。结果显示:甘加型藏羊发情周期阴道涂片中主要有副基底层上皮细胞、中间层上皮细胞、表层上皮细胞、不完全角化上皮细胞、完全角化上皮细胞、白细胞和细胞碎片。发情期角化细胞所占比例最高,显著高于发情前期、发情后期和间情期(P<0.05);发情前期表层上皮细胞所占比例显著高于其他三个时期(P<0.05);间情期和发情后期白细胞所占比例显著高于发情前期和发情期;中间层上皮细胞在各时期所占比例差异不显著(P>0.05)。结果表明:根据涂片中阴道细胞种类和各类细胞所占比例的变化特点可以简便、快速准确地鉴定和区分甘加母羊发情周期的不同阶段,阴道凃片是高效、准确的发情鉴定方法。

甘南藏羊不同群体遗传多样性的微卫星分析

文章旨在分析甘南藏羊不同类群的微卫星DNA多态性,以期了解该资源的遗传多样性,为该羊种保种、选育和品质的进一步提高提供一些有益资料。利用8对微卫星引物,以欧拉型藏羊、甘加型藏羊和乔科型藏羊为研究对象,通过计算基因频率、多态性信息含量、有效等位基因数和杂合度,评估其品种内的遗传变异。结果表明:在8个座位中,共检测到96个等位基因,每个座位平均为12个等位基因;座位平均杂合度0.876;平均有效等位基因数9.902;平均多态性信息含量0.896。结果提示,甘南藏羊群体存在丰富的遗传多样性,所选微卫星标记可用于绵羊遗传多样性评估。