甘加藏羊发情周期输卵管和子宫中THRs的表达及分布

【目的】为阐明甘加藏羊(Ovis aries)发情周期甲状腺激素受体α(THRα)和甲状腺激素受体β(THRβ)在输卵管和子宫中表达,探讨其对藏羊繁殖活动中的调控作用。【方法】选取健康未孕处于发情周期和乏情期的甘加藏羊30只,应用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色方法研究了发情周期和乏情期输卵管和子宫组织THRα和THRβmRNA及其蛋白含量的表达和分布。【结果】THRα、THRβmRNA及其蛋白在藏羊发情周期和乏情期输卵管和子宫中均有表达,输卵管中THRα、THRβmRNA表达量在发情后期最高,显著(P<0.05)高于其他3个时期和乏情期;子宫中发情期表达量最高,与其他时期差异显著(P<0.05)。THRβmRNA的平均相对表达量显著高于THRαmRNA。输卵管组织中THRα蛋白在发情后期表达量最高,子宫中发情期最高,显著(P<0.05)高于与其他时期。输卵管和子宫中THRβ蛋白在发情后期表达量最高,与其他时期差异显著(P<0.05)。乏情期THRα、THRβmRNA及其蛋白的平均表达量显著低于发情周期各时期。免疫组织化学染色结果显示:藏羊发情周期THRα和THRβ免疫反应阳性细胞主要表达在输卵管的黏膜上皮、纤毛细胞、分泌细胞和肌层,在子宫中主要表现在基质细胞和子宫腺。【结论】THRα和THRβ二者两者浓度差异性表达,表明THRs对甘加藏羊发情时期的输卵管和子宫有一定的调控作用,可能参与甘加藏羊生殖生理活动。

甘加藏羊发情周期不同阶段血浆生殖激素分泌规律

为研究甘加藏羊发情周期血浆中生殖激素的分泌变化规律,选取24只处于发情周期内的甘加藏羊,采集甘加藏羊发情周期不同阶段的血液,采用酶联免疫分析法(ELISA)检测甘加藏羊发情周期血浆中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮(P)和雌激素(E)的分泌变化。结果显示,FSH含量在发情期最高,为3.406 m IU/m L,发情后期降低至2.492 m IU/m L,间情期又开始升高,至发情前期达2.727 m IU/m L,发情期含量极显著高于发情后期、间情期和发情前期;LH含量在间情期最高,为4.377 m IU/m L,发情后期显著低于间情期和发情前期;P含量在发情前期最高,为18.039 ng/m L,发情期降至16.196 ng/m L,发情后期缓慢升高,间情期达17.127 ng/m L,发情前期极显著高于发情期与发情后期;E含量在发情前期最低,为29.625 pg/m L,发情期升高(36.035 pg/m L),发情后期达到最高,为38.573 pg/m L,间情期又降低(35.531 pg/m L),发情后期极显著高于发情期、间情期以及发情前期,发情期与间情期极显著高于发情前期。

甘加藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴KISS-1/GPR54的表达与分布

为了研究高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovary axis,HPOA)中肿瘤转移抑制基因(kisspeptins,KISS-1)/G蛋白偶联受体54(G protein-coupled receptors 54,GPR54)的表达及其对藏羊季节性发情周期的调控作用,本实验选取处于发情周期的甘加藏羊32只,应用qRT-PCR和免疫组织化学技术,检测其在发情周期HPOA组织中的表达和分布。qRT-PCR结果显示,甘加藏羊整个发情周期HPOA组织中均有KISS-1和GPR54 mRNA表达。下丘脑组织中发情前期KISS-1 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个发情时期;在垂体组织中发情前期和间情期的相对表达量较高,与发情后期差异显著(P<0.05);卵巢轴组织中间情期的相对表达量最高,显著(P<0.05)高于其他3个时期。下丘脑组织中发情期GPR54 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个时期;垂体组织中发情前期的相对表达量显著(P<0.05)高于其他时期;卵巢轴组织中发情后期的相对表达量显著(P<0.05)高于其他时期。免疫组织化学染色结果显示:Kisspeptin和GPR54阳性产物在下丘脑中主要分布于促垂体区的弓状核、脑室前腹侧区;腺垂体中主要在嗜碱性细胞和嫌色细胞中表达;卵巢轴中主要在卵泡颗粒层及卵泡内膜上表达。KISS-1和GPR54在藏羊发情周期HPOA中的差异表达,对藏羊季节性发情周期有一定的调控作用。

甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3和T4浓度动态变化及HPOA轴DIO2和DIO3的表达

为探讨甲状腺激素(T3、T4)及其合成酶(DIO2、DIO3)对甘加藏羊生殖活动的调控,本研究以发情周期和乏情期甘加藏羊(Ovis arise)为研究对象,应用酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测甘加藏羊发情周期和乏情期血浆中T3和T4的动态变化、下丘脑-垂体-卵巢轴(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA)及甲状腺组织中DIO2、DIO3 mRNA和蛋白的表达。结果显示:整个发情周期和乏情期血浆中T3和T4浓度均以脉冲式和波动式交替变化,T4的浓度均显著高于T3,T3的平均浓度在发情前期最高,T4的平均浓度在发情期最高,与其他各时期比较差异均显著。藏羊发情周期和乏情期HPOA和甲状腺组织中均有DIO2、DIO3 mRNA及其蛋白的表达,且差异显著;垂体、卵巢、甲状腺DIO2 mRNA及其蛋白的相对表达量均高于DIO3 mRNA及其蛋白的相对表达量。甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3、T4的浓度和DIO2、DIO3在HPOA及甲状腺组织中的表达呈现动态变化,表明甲状腺激素及其合成酶参与调控甘加藏羊的生殖活动。

甘加藏羊发情周期和乏情期HPO轴中THRβmRNA和蛋白的表达分布

甲状腺激素(TH)通过与其靶细胞受体特异性结合发挥其生物学效能。为阐明松果体、下丘脑-垂体-卵巢轴(Hypothalamic-pituitary-ovary axis,HPOA)甲状腺激素受体β(Thyroid hormone receptorβ,THRβ)基因和蛋白的表达及分布对季节性繁殖动物甘加藏羊(Ovis aries)生殖活动的调节。本研究以处于发情周期和乏情期的甘加藏羊为研究对象,应用RT-qPCR、Western blot和免疫组织化学方法检测和分析了松果体、HPO轴中THRβmRNA及其蛋白的表达和分布。结果显示,THRβmRNA及其蛋白在松果体和HPO轴组织中均有表达和分布。在松果体中,THRβmRNA及其蛋白的表达量均在乏情期最高,显著(P<0.05)高于发情周期;在下丘脑中,THRβmRNA表达量在发情后期显著(P<0.05)高于其他时期,蛋白表达量在间情期显著(P<0.05)高于其他时期;在垂体中,THRβmRNA及其蛋白的表达量在间情期显著(P<0.05)高于其他时期;在卵巢中,THRβmRNA及其蛋白的表达量在发情后期显著(P<0.05)高于其他时期。免疫组织化学结果显示:THRβ免疫阳性产物主要分布在松果体细胞的细胞浆,下丘脑的神经胶质细胞、大神经元胞体和椎体细胞胞浆,腺垂体的嗜酸性和嗜碱性细胞胞浆,卵巢的颗粒细胞胞浆、卵泡内膜细胞及黄体细胞。甘加藏羊发情周期和乏情期松果体、HPOA组织中THRβmRNA和蛋白的差异性表达,表明THRβ参与调控甘加藏羊的生殖活动。

甘加藏羊发情周期血浆Kisspeptin动态变化和PHPT轴中Kiss1/GPR54的表达与分布

松果体-下丘脑-垂体-甲状腺轴(PHPTA)对动物的繁殖活动有重要的调节作用。为探讨Kiss1/GPR54系统在甘加藏羊PHPT轴的表达及其对繁殖活动的调控,选取24只处于发情周期内健康未孕的甘加藏羊作试验组,6只处于非繁殖季节的甘加藏羊作对照组,运用酶联免疫吸附法检测其血浆Kisspeptin动态变化,用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学方法检测视神经、松果体、下丘脑、垂体和甲状腺组织中Kiss1、GPR54 mRNA及其蛋白的表达与分布。结果显示:血浆Kisspeptin分泌量在发情后期显著高于其他时期(P<0.05),繁殖季节内各时期分泌量均显著高于非繁殖季节(P<0.05)。Kiss1、GPR54 mRNA及其蛋白在视神经、PHPT轴组织中均有表达:视神经Kiss1、GPR54 mRNA相对表达量在发情前期显著高于其余时期;松果体在Kiss1 mRNA及其蛋白乏情期达到最大值,显著高于繁殖周期;下丘脑和甲状腺Kiss1、GPR54 mRNA相对表达量均在发情后期显著升高(P<0.05);垂体组织中二者mRNA的相对表达量在发情期显著高于其他时期。免疫组织化学检测结果显示:在视神经中,Kisspeptin与GPR54分别主要分布在神经胶质细胞核与胞质中;松果体细胞胞质中二者均呈强阳性表达;在下丘脑中,Kisspeptin表达在神经内分泌小细胞和神经胶质细胞中,GPR54表达在神经内分泌小细胞胞质中;在垂体组织中,Kisspeptin和GPR54主要表达在嗜碱性细胞的胞质中;而在甲状腺中,二者主要表达在滤泡细胞胞质中。甘加藏羊发情周期血浆Kisspeptin的动态变化及Kiss1、GPR54在各组织中的差异表达,表明Kiss1/GPR54系统参与调节了甘加藏羊的生殖生理活动。

甘加藏羊肝脏细胞组织形态结构观察

以甘加藏羊为研究对象,应用常规组织解剖学方法,制备石蜡切片,对甘加藏羊肝脏细胞组织结构与特征进行观察,为分析反刍动物肝脏生理机能提供形态学参考。结果表明:甘加藏羊肝脏分为四叶,表面覆以致密结缔组织被膜,结缔组织将肝实质分隔成若干个肝小叶。甘加藏羊肝脏小叶间结缔组织不发达,分界不明显。肝细胞呈多角形,其排列组成的肝细胞索(肝板)围绕中央静脉向周围呈放射性排列。在肝血窦中可见枯否氏细胞,门管区发达,其中小叶间静脉、动脉和胆管结构清晰可辨。

甘加藏羊肉营养成分及风味物质的测定与评价

甘加藏绵羊为毛肉兼用型,主要分布在青藏高原。现存栏60余万只,能适应海拔3000m以上的高寒生态环境。本研究对甘加藏绵羊肉的营养成分及风味物质进行测定,为开发利用提供依据。

甘加藏羊发情周期腺垂体和血浆中GTH含量动态变化

为了探讨甘加藏羊发情周期腺垂体和血浆中FSH和LH含量动态变化规律及排卵的关系。选取2.5~5岁,健康未孕雌性甘加藏羊30只,采集发情周期各阶段和乏情期腺垂体和血浆,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定发情前期、发情期、发情后期、间情期及乏情期腺垂体和血浆中FSH和LH的含量。结果表明,甘加藏羊发情周期内腺垂体FSH浓度在发情期(6.873IU/L)和发情后期(6.863IU/L)较低,与间情期最大(8.228IU/L)差异显著(P<0.05),发情前期又降低(8.096IU/L);腺垂体LH浓度发情期(9.39IU/L)和发情后期(9.585IU/L)较低,间情期最大(10.629IU/L),发情前期(9.7325IU/L)降低,各时期差异不显著(P>0.05);发情周期内血浆中FSH浓度在发情前期(2.599IU/L)达到峰值,其他时期均较低,发情前期与其他时期差异显著(P<0.05);血浆LH浓度在发情期(3.866IU/L)达到峰值,发情后期(3.179IU/L)和间情期(3.292IU/L)降低,各时期差异不显著(P>0.05);并且FSH和LH在发情周期内均出现4个波峰:乏情期腺垂体和血浆中FSH和LH的浓度均低于发情周期内FSH和LH各自的基础值。FSH和LH含量在垂体和血浆的这些差异性应该是两者协同调控藏羊发情和排卵的主要原因。

甘加型藏绵羊发情周期下丘脑GnRH分泌的动态变化规律

【目的】研究甘加型藏绵羊发情周期下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)分泌的动态变化及其对藏羊生殖活动的调控.【方法】选取发情周期不同阶段的甘加型藏绵羊48只,采集藏羊发情期、发情后期、间情期、发情前期的血浆.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各个时期血浆中GnRH的含量,比较研究其动态变化规律.【结果】甘加藏绵羊发情周期不同阶段血浆中GnRH分泌呈现一定的规律:在发情期和发情后期呈脉冲式分泌,间情期和发情前期既有脉冲式又有波动式分泌.分泌特点为发情前期血浆中GnRH(57.409pg/mL)开始升高,至达到最大值(73.389pg/mL),发情后期(62.058pg/mL)和间情期(55.687pg/mL)分泌量降低,其中发情期分泌量最多,且与其他3个时期差异显著(P<0.05).在整个发情周期中GnRH先后出现4个明显分泌峰,第1个峰出现在发情期4h,第2个峰出现在发情后期60h,第1个峰略高于第2个;第3个峰出现在间情期第9天早上,第4个峰出现在发情前期第14天早上,第3个峰较第4个低.【结论】了解甘加型藏绵羊发情周期下丘脑GnRH分泌的动态变化规律,以及GnRH在甘加型藏绵羊发情周期中的调控作用.

甘加藏羊发情周期血浆FSH和LH的分泌规律

为了研究甘加藏羊发情周期血浆中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的分泌变化规律及其与藏羊繁殖力之间的关系,采用酶联免疫分析法(ELISA)测定发情期、发情后期、间情期和发情前期血浆中FSH和LH的含量,并分析其动态变化规律。结果显示,FSH和LH在发情期、发情后期和发情前期的分泌均呈现脉冲式变化,而间情期既有脉冲式分泌又有波动式分泌。FSH和LH在发情周期中先后均出现4个分泌峰,其中FSH和LH的第1个峰分别出现在发情的2h和0h;第2个峰分别出现在72h和69h;第3个峰分别出现在第10天和第9天;第4个峰分别出现在第13天和第12天。FSH和LH的分泌趋势相似,其特点是分泌量先在发情期升高,然后在发情后期和间情期降低,最后在发情前期又升高。结果表明,发情周期不同阶段FSH和LH的分泌方式明显不相同。在发情期和发情后期,FSH出现峰值的时间分别比LH晚2h和晚3h;在间情期和发情前期,FSH出现峰值的时间比LH晚1d,并且FSH和LH形成2个分泌峰的时间间隔不同。

高原甘加藏羊发情周期GnRHR基因在垂体和卵巢表达规律的研究

探究高原甘加藏羊发情周期促性腺激素释放激素受体（GnRHR）基因在垂体和卵巢组织中的表达规律,选取处于繁殖期健康未孕高原甘加藏羊48只,分为4组,每组12只,分别于发情前期、发情期、发情后期、间情期从甘加藏羊垂体和卵巢组织中提取总RNA,应用荧光定量RT-PCR方法,以GAPDH为内参,研究高原甘加藏羊发情周期垂体和卵巢组织中GnRHR基因表达的差异。结果显示：高原甘加藏羊整个发情周期不同阶段GnRHR mRNA在垂体和卵巢组织中均有表达。在甘加藏羊发情前期、发情期、发情后期、间情期垂体组织中GnRHR mRNA的相对表达量依次为0.8246±0.1739、1.5100±0.4187、0.2923±0.0202、1.0000±0.2100,其中发情期的相对表达量最高,与发情后期差异极显著（P〈0.01）,与发情前期、间情期差异显著（P〈0.05）;在卵巢组织中,GnRHR mRNA的相对表达量分别为1.0910±0.7665、0.5420±0.0763、1.3799±0.7452、1.0000±1.1221,其中发情后期的相对表达量最高,与发情期差异极显著（P〈0.01）,与发情前期、间情期差异显著（P〈0.05）。这一研究结果为在分子水平上研究藏羊生殖活动调控机理提供了科学数据。

甘加型藏羊发情周期Kiss-1/GPR54在生殖器官中的表达和分布

为阐明高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期Kiss-1/GPR54在生殖器官中的表达及其对藏羊繁殖调控的影响,选取30只处于发情周期和乏情期的甘加藏羊,分别应用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色等方法研究了发情周期和乏情期卵巢、输卵管和子宫组织中Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白含量的表达和分布。结果表明,Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白在发情周期和乏情期的卵巢、输卵管和子宫中均有表达,发情周期卵巢中Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白相对表达量在发情期达到最大值,各时期差异显著(P<0.05);子宫中Kiss-1 mRNA及其蛋白在间情期表达量最高,显著高于发情周期其他3个时期(P<0.05);GPR54 mRNA及其蛋白在发情期相对表达量显著高于其他时期(P<0.05);输卵管中Kiss-1、GPR54 mRNA在发情期达表达量最高,而Kiss-1、GPR54蛋白在发情前期表达量达到最高,显著高于其他时期(P<0.05)。乏情期Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白的表达显著低于发情周期各时期,差异显著。免疫组织化学染色结果显示,Kisspeptin和GPR54的免疫阳性产物在卵巢中主要分布在卵泡颗粒层以及卵泡膜上,在输卵管中主要在黏膜上皮的纤毛细胞、分泌细胞中表达,在子宫中主要在上皮细胞和基质细胞中表达;说明两者参与甘加藏羊生殖生理活动,并可能对其产生一定的调控作用。