GLDC通过PI3K/Akt/mTOR通路调控卵巢癌细胞的增殖与凋亡

目的探究甘氨酸脱氢酶(GLDC)基因通过PI3K/Akt/mTOR调控卵巢癌细胞增殖与凋亡的机制。方法采用RNA干扰技术沉默卵巢癌HEY、SK-OV-3细胞中GLDC的表达,分别将细胞分为si-control组、si-GLDC#1组和si-GLDC#2组,si-control组为转染siRNA-control的细胞,si-GLDC#1组为转染siRNA-GLDC#1的细胞,si-GLDC#2组为转染siRNA-GLDC#2的细胞。采用蛋白质印迹法检测GLDC蛋白表达水平以及PI3K/Akt/mTOR蛋白磷酸化水平,分别采用CCK-8法、Transwell小室迁移实验、细胞划痕实验和流式细胞仪检测细胞增殖、迁移和凋亡能力。结果GLDC在卵巢癌HEY细胞si-control组、si-GLDC#1组和si-GLDC#2组中的相对表达量分别为1.00±0.01、0.68±0.10、0.80±0.08,差异有统计学意义(F=13.80,P=0.006);GLDC在卵巢癌SK-OV-3细胞si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组中的相对表达量分别为1.02±0.01、0.58±0.17、0.60±0.25,差异具有统计学意义(F=6.08,P=0.036)。si-control组、si-GLDC#1组和si-GLDC#2组3组HEY细胞培养24 h后吸光度(A)值分别为1.04±0.03、0.91±0.02、0.82±0.01,48 h后分别为1.53±0.13、1.30±0.03、1.29±0.07,72 h后分别为1.44±0.08、1.25±0.01、1.15±0.03,差异均具有统计学意义(F=83.14,P<0.001;F=8.96,P=0.007;F=29.55,P<0.001),进一步两两比较,24、48、72 h si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞增殖活力均低于si-control组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在HEY细胞中,si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组迁移细胞数目分别为57.33±6.43、27.67±5.13、30.67±2.31,差异具有统计学意义(F=32.88,P=0.001);si-GLDC#1组、si-GLDC#2组迁移细胞数较si-control组显著下降,差异均有统计学意义(P<0.001;P=0.001);在SK-OV-3细胞中也观察到类似结果。在SK-OV-3细胞中,si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组的划痕愈合率分别为(51.27±1.59)%、(26.35±2.94)%、(26.34±7.69)%,差异具有统计学意义(F=26.54,P=0.001);si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞划痕愈合率较si-control组显著下降,差异均有统计学意义(均P=0.001)。在HEY细胞中,si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞凋亡率分别为(7.11±0.82)%、(10.44±1.50)%、(17.39±1.55)%,差异具有统计学意义(F=46.52,P<0.001);si-GLDC#1组、si-GLDC#2组细胞凋亡率较si-control组均显著上升,差异均有统计学意义(P=0.022;P<0.001);在SK-OV-3细胞中也观察到类似结果。在HEY细胞中,si-control组、si-GLDC#1组、si-GLDC#2组中PI3K总蛋白差异无统计学意义(F=0.54,P=0.631),但pAkt/Akt、pmTOR/mTOR水平差异具有统计学意义(F=22.14,P=0.016;F=10.57,P=0.044);其中si-GLDC#1组、si-GLDC#2组较si-control组pAkt/Akt、pmTOR/mTOR均显著降低(P=0.015,P=0.008;P=0.039,P=0.023);在SK-OV-3细胞中也观察到类似结果。结论在卵巢癌细胞中,沉默GLDC可通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。