血清正五聚蛋白3、富亮氨酸α-2-糖蛋白1水平变化与尖锐湿疣复发的关系

目的探讨血清正五聚蛋白3(PTX3)、富亮氨酸α-2-糖蛋白1(LRG1)水平变化与尖锐湿疣(CA)复发的关系。方法选取2020年1月至2022年1月武汉市第一医院收治的120例CA患者(CA组)作为研究对象。根据患者治疗后复发情况进一步分为复发组(n=64)和无复发组(n=56)。选取同期健康体检者120例设为对照组。采用酶联免疫吸附试验法检测血清PTX3、LRG1水平。采用多因素Logistic回归分析CA患者复发的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清PTX3、LRG1及其联合对CA患者复发的预测效能。结果CA组PTX3、LRG1水平显著高于对照组(P<0.05)。与无复发组比较,复发组熬夜、避孕套使用、性伴侣人乳头瘤病毒(HPV)感染人数及白介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、PTX3、LRG1水平显著较高(P<0.05)。Logistic分析结果显示,IL-6、IL-1β、TNF-α、CRP、PTX3、LRG1均是CA复发的独立危险因素(P<0.05)。CA患者血清PTX3与LRG1呈正相关(r=0.680,P<0.05),PTX3与IL-6、IL-1β、TNF-α、CRP呈正相关(r=0.587、0.523、0.592、0.566,P<0.05),LRG1与IL-6、IL-1β、TNF-α、CRP呈正相关(r=0.547、0.508、0.559、0.531,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清PTX3、LRG1水平及二者联合预测CA复发的曲线下面积(AUC)分别为0.742、0.795、0.878,其中联合预测的AUC显著高于二者单独预测(Z=2.490、1.615,P<0.05)。结论CA患者血清PTX3、LRG1水平显著上升,其可增加CA复发的风险,均可作为CA复发的预测因子。

胰岛素样生长因子1及其代谢物环状甘氨酸-脯氨酸与中枢神经系统疾病

随着人口老龄化的出现,各种神经系统疾病的发病率正在迅速增加。神经营养因子一直是改善老年神经系统疾病的基础和临床研究的重点。胰岛素样生长因子1(IGF-1)是一种神经营养因子,在大脑的细胞增殖、分化、修复和再生中发挥重要作用。最近的研究发现一种IGF-1的代谢物——环状甘氨酸-脯氨酸(cGP),当IGF-1功能不足时,其可增加IGF-1的生物利用率,从而使IGF-1发挥更有效的神经保护作用。cGP在诊断和治疗中枢神经系统疾病方面发挥重要作用,对中枢神经系统疾病的诊断和治疗具有重要意义。

脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸在鉴别慢性阻塞性肺疾病与哮喘中的意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者、哮喘患者及健康者血清胶原蛋白衍生肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸(PGP)水平的差异以及COPD患者血清PGP水平与肺功能指标、血清C反应蛋白水平的相关性。方法选取COPD患者、哮喘患者和健康体检者各50例,通过高效液相色谱-质谱联用技术检测血清中的PGP水平。结果 PGP的准分子离子[M+H]+为m/z270,其主要碎片离子为m/z70和m/z116。检出限10 pg/mL。日内检测变异系数6.0%,日间检测变异系数9.1%。COPD患者、哮喘患者及健康体检者血清中PGP平均水平分别为(0.70±0.16)、(0.33±0.11)、(0.32±0.09)ng/mL。COPD患者血清标本中PGP水平较哮喘患者和健康体检者明显升高(均P<0.01),哮喘患者血清标本中PGP水平与健康体检者对比差异无统计学意义(P>0.05),COPD患者血清标本中的PGP水平与患者肺功能指标FEV1/FVC和FEV1%预计值无直线相关关系(r=-0.060,P=0.683和r=-0.069,P=0.632),与COPD患者血液中的C反应蛋白水平亦无直线相关关系(r=-0.098,P=0.502)。结论 PGP可用于鉴别COPD和哮喘,可以为COPD的临床诊断提供一个新的标志物,但PGP无法用于评估患者肺功能受损程度。

二甲双胍改善由C9ORF72肌萎缩侧索硬化/额颞叶痴呆相关多聚甘氨酸-精氨酸诱导的线粒体损伤

目的·探索C9ORF72肌萎缩侧索硬化/额颞叶痴呆(amyotrophic lateral sclerosis/frontotemporal dementia,ALS/FTD)相关的多聚甘氨酸-精氨酸(poly-glycine-arginine,poly-GR)对线粒体形态及功能的影响,并分析二甲双胍对由poly-GR诱导的线粒体损伤的修复作用及其可能的机制。方法·采用慢病毒感染法分别构建能够稳定表达50个重复甘氨酸-精氨酸序列[(glycine-arginine)50,(GR)_(50)]和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的SK-N-SH细胞,即(GR)_(50)-SK细胞株和GFP CTRL-SK细胞株。采用蛋白质印迹法(Western blotting)验证已构建细胞中(GR)_(50)蛋白的表达水平,并采用荧光显微镜观察GFP CTRL-SK细胞的GFP表达。采用碘化丙啶(propidium iodine,PI)染色分别检测(GR)_(50)-SK、GFP CTRL-SK细胞的凋亡水平。利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色分析(GR)_(50)蛋白在细胞内的定位情况。采用超氧化物指示剂MitoSOX Red分别对(GR)_(50)-SK、GFP CTRL-SK细胞的氧自由基进行染色,并利用荧光显微镜观察红色荧光强度以评估线粒体活性氧水平的变化。采用透射电镜分别观察(GR)_(50)-SK、GFP CTRL-SK细胞的线粒体形态。采用Western blotting检测(GR)_(50)-SK、GFP CTRL-SK细胞的蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)及其磷酸化水平。利用SC79激活(GR)_(50)-SK细胞中的AKT,并采用MitoSOX Red染色及PI染色实验分析AKT磷酸化后细胞的线粒体活性氧水平及凋亡水平。利用二甲双胍处理(GR)_(50)-SK、GFP CTRL-SK细胞,随后通过上述方法以及ATP检测试剂盒检测细胞的凋亡水平、线粒体活性氧水平、线粒体形态、AKT及其磷酸化水平、ATP浓度情况。结果·Western blotting结果提示(GR)_(50)-SK细胞构建成功,荧光显微镜的观察结果显示GFP CTRL-SK细胞构建成功。PI染色结果显示,(GR)_(50)-SK细胞较GFP CTRL-SK细胞的凋亡水平更高(P=0.016)。IF结果提示,(GR)_(50)-SK细胞中(GR)_(50)蛋白与线粒体存在部分共定位。与GFP CTRL-SK细胞相比,(GR)_(50)-SK细胞的线粒体形态及结构存在明显异常,其活性氧水平明显上升。(GR)_(50)-SK细胞中的AKT水平与GFP CTRL-SK细胞相仿,但磷酸化AKT水平显著下降。SC79处理(GR)_(50)-SK细胞后,可显著上调其AKT磷酸化水平,并下调其活性氧水平及凋亡水平。二甲双胍处理可明显上调(GR)_(50)-SK细胞中的磷酸化AKT水平,但对AKT水平无影响;可重塑该细胞中的部分线粒体形态结构、降低活性氧水平、增加ATP的生成(P=0.000),并下调细胞的凋亡水平(P=0.000)。结论·(GR)_(50)可通过下调AKT磷酸化引起线粒体形态及功能异常,并促进细胞凋亡;而二甲双胍则可抑制由(GR)_(50)蛋白诱导的上述病理事件的发生。

维持性血液透析患者血清富亮氨酸α-2糖蛋白-1水平与动脉粥样硬化程度的相关性分析

目的 探讨血清富亮氨酸α-2糖蛋白-1(leucine-rich α2-glycoprotein-1,LRG1)水平与维持性血液透析患者动脉粥样硬化程度的关系。方法 选取2016年1月至2020年1月在秦皇岛市第一医院进行血液透析的160例维持性血液透析患者作为研究对象,收集其一般资料及实验室指标。采用彩色多普勒超声测定患者颈动脉内中膜厚度(intima-media thickness,IMT),并将其分为正常组55例,其中男28例,女27例,年龄(50.26±7.94)岁,年龄范围40~80岁;内膜增厚组58例,其中男30例,女28例,年龄(60.72±8.63)岁,年龄范围41~80岁;斑块组47例,其中男26例,女21例,年龄(70.14±8.28)岁,年龄范围40~80岁。采用酶联免疫吸附法检测患者血清LRG1水平。采用Pearson及Spearman相关性分析维持性血液透析患者IMT与一般资料、实验室指标及血清LRG1的相关性;采用多因素Logistic回归分析维持性血液透析患者动脉粥样硬化的影响因素。结果 斑块组LRG1为(83.74±9.94)mg/L,年龄为(70.14±8.28)岁,透析龄为(38.72±6.49)个月,低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)为(2.52±0.61)mmol/L,总胆固醇(total cholesterol,TC)为(4.21±1.02)mmol/L,均显著高于内膜增厚组的(67.95±8.65)mg/L、(60.72±8.63)岁、(33.48±6.50)个月、(1.89±0.59)mmol/L、(3.52±0.78)mmol/L和正常组的(52.46±8.73)mg/L、(50.26±7.94)岁、(29.72±6.78)个月、(1.42±0.62)mmol/L、(2.96±0.81)mmol/L,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。维持性血液透析患者IMT与LRG1、年龄、透析时间、LDL-C、TC均呈正相关(r=0.534、0.509、0.512、0.492、0.489,P<0.05)。LRG1、年龄是维持性血液透析患者动脉粥样硬化的独立危险因素(P<0.05)。结论 随着维持性血液透析患者动脉粥样硬化程度增加,血清LRG1水平升高,且LRG1与IMT呈正相关,提示检测血清LRG1水平有助于评估颈动脉粥样硬化程度。

亮氨酸94在光驱质子泵古紫质-4中的功能

利用基因定点突变技术分别将bR/aR4(细菌视紫红质/古紫质-4)中L93/L94(亮氨酸93/亮氨酸94)突变为侧链不同的丙氨酸、苯丙氨酸和极性不同的苏氨酸,得到bR、含菌红素BI-aR4和缺失菌红素BE-aR4体系突变蛋白,采用紫外-可见光吸收光谱、闪光光解光谱技术和pH滴定等方法,对比研究L94在aR4中对视黄醛构象、光循环及质子传输的影响及其同菌红素的关系。结果表明,aR4中L94同样会通过空间位阻效应调控视黄醛键合区构象和质子通道的螺旋分布,以维持视黄醛顺-反异构平衡和再异构化过程,并且促进质子的释放,保证蛋白高效的质子泵活性。此外,L94对aR4结构和功能的影响会受到菌红素的调制,在缺失菌红素的情况下L94突变对aR4螺旋的扰动更加剧烈,导致质子供体和质子释放簇周围的氢键网络发生变化。

2型糖尿病患者血清富亮氨酸α-2糖蛋白-1、中性粒细胞/淋巴细胞比值与尿微量白蛋白/尿肌酐比值的相关性研究

目的探究2型糖尿病(T2DM)患者血清富亮氨酸α-2糖蛋白-1(LRG1)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)与尿微量白蛋白/尿肌酐比值(UACR)的相关性,为后期临床治疗T2DM和改善患者预后提供依据。方法回顾性分析2021年1月至2022年3月苏州市吴江区第五人民医院收治的106例T2DM患者的临床资料,根据UACR检测结果将其分为白蛋白尿正常组(30例,UACR<30mg/g)、白蛋白尿微量组(42例,30mg/g≤UACR≤300mg/g)、白蛋白尿大量组(34例,UACR>300mg/g)。比较3组患者的临床资料,并采用Pearson分析法分析LRG1、NLR与UACR的相关性;同时采用多元线性回归分析影响T2DM患者UACR升高的危险因素。结果白蛋白尿微量组与白蛋白尿大量组患者LRG1、WBC、NEU、UACR水平均高于白蛋白尿正常组,且白蛋白尿大量组LRG1、UACR水平高于白蛋白尿微量组;白蛋白尿大量组白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NEU)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)、NLR指标均高于白蛋白尿正常组,血红蛋白(HGB)、淋巴细胞计数(LYM)、白蛋白(ALB)水平低于白蛋白尿正常组,且白蛋白尿大量组CREA水平高于白蛋白尿微量组,HGB、ALB水平低于白蛋白尿微量组;通过Pearson相关性分析得出,血清LRG1、NLR、CREA、UA指标与UACR水平均呈正相关(r=0.149、0.593、0.187、0.169),HGB、ALB指标与UACR水平均呈负相关(r=-0.269、-0.301);多元线性回归分析,同时校正其他因素后结果显示,血清LRG1、NLR水平升高是影响T2DM患者UACR升高的危险因素(OR=1.034、2.788)(均P<0.05)。结论T2DM患者血清LRG1、NLR水平升高与发生UACR具有密切关联,且血清LRG1、NLR指标对早期预测T2DM患者肾脏疾病的发生和发展具有重要的临床价值。

N-乙酰基-L-脯氨酸-N-糖基修饰的丝氨酸二肽酯的合成与结构解析

以L-脯氨酸和L-丝氨酸为原料,1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)为缩合剂,将C端和N端分别通过烯丙基和Fmoc保护的L-丝氨酸与乙酰基保护的L-脯氨酸缩合得到N-乙酰基-L-脯氨酸-Fmoc-L-丝氨酸烯丙酯二肽酯。脱去Fmoc保护后,再与2,3,4-O-三乙酰基-6-O-三氟甲磺酰基-α-D-甲基吡喃葡萄糖苷作用,得到N-乙酰基-L-脯氨酸-N-6-(2,3,4-O-三乙酰基-α-D-甲基吡喃葡萄糖苷)-L-丝氨酸烯丙酯二肽酯,通过核磁共振氢谱、高分辨质谱对其结构进行了表征。

富亮氨酸α-2糖蛋白-1在2型糖尿病大血管病变中的研究进展

2型糖尿病(T2DM)是由遗传和环境因素共同作用所引起的代谢性疾病,病理生理机制为胰岛素分泌减少和(或)靶细胞(器官)对胰岛素敏感性下降,导致肝脏的葡萄糖输出增多,骨骼肌和脂肪组织对葡萄糖的利用减少,主要临床表现为高血糖及蛋白质、脂肪、水和电解质等代谢紊乱。随着经济的高速发展、肥胖人数的增加、不规律的生活作息以及淀粉类食物为主的饮食习惯等因素的影响~([1])。

川崎病患儿血清总IgE、富亮氨酸α-2糖蛋白升高与冠状动脉病变的发生率、预后的相关性及影响因素分析

目的探究川崎病患儿血清总免疫球蛋白IgE(Immunoglobulin,IgE)、富亮氨酸α-2糖蛋白1(Leucine-richα-2 Glycoprotein-1,LRG1)升高与冠状动脉病变的发生率及预后相关性,并就川崎病患儿出现冠状动脉病变的危险因素开展分析。方法选择2020年1月—2022年12月本院儿童医院确诊为川崎病的127例患儿为研究对象,根据切面超声心动图对冠状动脉检测结果分为冠脉病变组(n=60)和无冠脉病变组(n=67)两组。比较两组患儿IgE、LRG1水平差异,对入组患者开展积极的治疗后,比较治疗前后入组患儿IgE、LRG1水平变化,最后分析导致川崎病患儿出现冠状动脉病变的危险因素。结果冠脉病变组患儿血清IgE、LRG1水平均明显高于无冠脉病变组患儿,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后入组川崎病患儿的血清IgE、LRG1水平均出现了明显的降低,差异具有统计学意义(P<0.05);通过非条件多因素Logistic回归分析显示,发热持续时间、CRP水平过高、IgE水平过高和LRG1水平过高是导致川崎病患儿出现冠状动脉损伤的独立危险因素,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论川崎病患儿出现冠状动脉损伤几率较高,患儿血清IgE、LRG1水平会出现异常升高;发热持续时间、CRP水平过高、IgE水平过高和LRG1水平过高是导致川崎病患儿出现冠状动脉损伤的独立危险因素,对出现上述危险因素的川崎病患儿,建议加强干预,以改善其预后。

血清肾小球滤过率、富亮氨酸α-2糖蛋白-1、蛋白聚糖-1在早期糖尿病肾病中的表达及临床意义

目的:探讨早期糖尿病肾病(DN)患者血清肾小球滤过率(eGFR)、富亮氨酸α-2糖蛋白-1(LRG1)、蛋白聚糖(syndecan)-1水平,并分析其对早期DN的诊断价值.方法:选取2020年2月至2022年4月本院收治的126例2型糖尿病(T2DM)患者和42例健康体检者为研究对象.依据24 h尿蛋白排泄量(UAER)的不同,将126例T2DM患者分为单纯T2DM组(n=60)和早期DN组(n=66),将同期健康体检者设为对照组(n=42).检测并比较3组受试者血清eGFR、LRG1、syndecan-1水平.分析各指标与临床指标相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标诊断早期DN的诊断效能.结果:与对照组比较,单纯T2DM组、早期DN组eGFR水平降低,LRG1、syndecan-1水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与单纯T2DM组比较,早期DN组eGFR水平降低,LRG1、syndecan-1水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);联合检测其水平对于诊断早期DN的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)大于单项诊断,差异有统计学意义(P<0.05).结论:早期DN患者血清eGFR水平降低,LRG1、syndecan-1水平上升,联合检测上述指标水平对诊断早期DN具有一定临床价值.

富含脯氨酸的酪氨酸激酶-2与肝炎病毒关系的研究进展

富含脯氨酸的酪氨酸激酶-2(proline-rich tyrosine kinase 2，Pyk-2)是一种属于局灶黏附激酶(FAK)家族的细胞质中的酪氨酸激。Pyk-2在多种组织中表达丰富，包括大脑、肺、肠、肾、脾和血管平滑肌细胞．Pyk-2能被多种细胞外刺激物激活，例如G蛋白耦合受体(Gprotein-coupled receptor，GPCR)激动剂，蛋白激酶C(PKC)的活化，细胞内钙离子浓度的升高，紫外线(UV)辐射和细胞外摩尔渗透压浓度。

基于丝网印刷碳电极的微囊藻毒素-(亮氨酸-精氨酸)的电流型免疫传感器

将微囊藻毒素-（亮氨酸-精氨酸）-鸡卵白蛋白（Microcystin-（leucine-arginine）-ovalbumin,MCLR-OVA）固定在锇联吡啶聚（4-乙烯基吡啶）聚合物修饰的丝网印刷碳电极表面,制备了一种检测MCLR的电流型免疫传感器。该传感器基于间接竞争免疫分析模式,以辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠免疫球蛋白抗体为标记物。其电流信号响应与MCLR的浓度在0.43~10.72 mg/L范围内呈负线性相关,检出限为0.17 mg/L。3种实际水样的平均添加回收率为83%~121%,相对标准偏差为3.6%~7.6%。本方法为MCLR的环境监测提供了科学依据。

创伤性脑损伤患者血浆β-内啡肽、亮氨酸脑啡肽和甲硫氨酸脑啡肽的水平

目的探讨内源性阿片肽在创伤性脑损伤发病机制中的作用。方法采用放射免疫分析法(RIA)测定30例全麻颅脑手术患者和30例全麻非颅脑手术患者术前、术后及30例正常人血浆β-内啡肽(β-Endo-rhin,β-EP)、亮氨酸脑啡肽(leuthine enkephalin,LNK)和甲硫氨酸脑啡肽(mehionine enkephalin,MEK)的含量。结果 (1)60例手术患者术后血浆β-EP含量显著升高(P<0.01),两组比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)颅脑手术患者术后血浆LNK含量显著高(P<0.01),与非颅脑手术者比较差异有统计学意义(P<0.01);(3)不同部位颅脑手术血浆LNK含量比较差异无统计学意义(P>0.05);(4)60例手术患者术后血浆MEK含量不升高,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);结论内源性阿片肽在创伤性脑损伤的病理生理过程中发挥作用不同。β-内啡肽在机体应激状态普遍升高,血浆中LNK的含量是创伤性脑损伤的特异性指标,LNK含量与脑损伤部位无关,MEK的含量变化与创伤性脑损伤无相关性。

亮氨酸与异亮氨酸在金/银核-壳复合纳米粒子上的吸附状态

研究了亮氨酸和异亮氨酸的拉曼光谱及其在金/银核-壳复合纳米粒子上的表面增强拉曼光谱(SERS);归属、分析了不同振动模式引起的振动峰位变化.拉曼光谱中,亮氨酸的甲基摇摆(ω(CH_3))拉曼位移为962,945,924 cm^(-1),甲基变形(δ_(as)(CH_3))为1454,1408,cm^(-1),异亮氨酸的分别为922 cm^(-1)和1448,1420,1394 cm^(-1).在酸性和碱性条件下不同浓度的SERS中,各对应基团振动峰位差异更明显.初步阐述了亮氨酸与异亮氨酸浓度与SERS关系,并推测了在金/银核-壳复合粒子表面的吸附模型.

脑出血患者血浆β-内啡肽、强啡肽A_(1-13)和亮氨酸脑啡肽的含量变化及纳络酮的影响

目的探讨脑出血患者血浆β-内啡肽(β-EP)、强啡肽A1-13(DynA1-13)和亮氨酸脑啡肽(L-ENK)的含量变化及纳络酮对其影响。方法将60例脑出血患者随机分为对照组(n=30)和纳络酮组(n=30)。对照组采用常规治疗,纳络酮组在常规治疗基础上加用纳络酮3.0mg/d静脉滴注,两组均治疗14d。采用放射免疫分析法(RIA),检测60例脑出血患者发病当天(治疗前)和治疗3d、7d、10d、14d血浆β-EP、DynA1-13、L-ENK的含量变化,并与正常组比较。观察纳络酮对上述3项指标的影响。结果(1)脑出血患者发病后血浆β-EP、DynA1-13含量即明显增高,与正常组比较差异有显著性(均P<0.01);L-ENK含量与正常组比较差异无显著性(P>0.05);(2)脑出血患者血浆β-EP、DynA1-13和L-ENK含量在发病7d达高峰,14d基本接近正常,治疗结束后两组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论(1)脑出血后血浆β-EP、DynA1-13、L-ENK含量异常升高;(2)纳络酮能拮抗β-EP、DynA1-13、L-ENK的异常升高,具有脑保护作用。

D-脯氨酸催化的(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸衍生物的合成

报道了一条合成（3S,4S）-4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸（Ahppa）衍生物的新路线。以氨基保护的L-苯丙氨酸为起始原料,依次经Weinreb胺缩合、还原、aldol缩合及溴仿4步反应合成了3个Ahppa衍生物,总收率5.8%-6.7%,其结构经^1H NMR,^13C NMR和ESI-MS确证。对反应条件进行了探讨,结果表明：催化剂D-脯氨酸用量对反应收率影响不大,对立体选择性影响较大;氨基上保护基体积较大有利于提高反应立体选择性。

L-亮氨酸对干扰素粉雾剂性能的影响

考察了L-亮氨酸含量对以甘露醇或乳糖为主要赋形剂的载干扰素喷雾干燥颗粒的粒径、形态、吸湿性、流动性、分散性和胶囊中颗粒残留量等粉体学性质的影响,并进行了粉雾剂的体外沉积试验。结果表明,加入L-亮氨酸后,以甘露醇为赋形剂的颗粒压缩度大于乳糖颗粒,吸湿性和胶囊中颗粒残留量均小于乳糖颗粒。L-亮氨酸可提高两种粉雾剂的体外沉积量。

膳食补充亮氨酸可通过抑制泛素-蛋白酶体削弱增龄小鼠骨骼肌萎缩

目的:探讨膳食补充亮氨酸对增龄所致骨骼肌萎缩的影响及可能机制。方法:13月龄雄性ICR小鼠根据体重随机分为补充亮氨酸(Leu)、补充丙氨酸(Ala)以及空白对照组(NC),Leu和Ala组分别在饲料中添加5%比例亮氨酸和3.4%比例丙氨酸8周,NC组饲喂普通饲料。末次给食后禁食17h处死小鼠,便携式血糖仪检测血糖;ELISA法检测血清胰岛素、IGF-1;分光光度法检测血尿素氮;氨基酸分析仪检测血浆游离氨基酸谱;HE染色观察肌纤维适应性及病理性改变;BCA法定量蛋白后,Western Blotting法检测Ub、Atrogin-1、MuRF-1及MHCⅡ的蛋白表达。结果:与NC组和Ala组小鼠相比,添加5%亮氨酸(Leu组)未显著影响小鼠体重、采食量,血糖、胰岛素水平与IGF-1无显著变化,血尿素氮水平显著下降;血浆游离亮氨酸含量升高而丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸含量下降;腓肠白肌湿重/体重比值、肌纤维横截面积及直径均表现出增长的趋势,但增幅并不显著;骨骼肌纤维圆形化、核中心化病变显著减少;腓肠白肌总蛋白含量、MHCⅡ蛋白表达显著增加,而Ub、Atrogin-1及MuRF-1的蛋白表达均显著下降。Ala组与NC组小鼠相比各指标差异均无统计学意义。结论:亮氨酸能够削弱老年前期小鼠骨骼肌萎缩,其机制可能与亮氨酸对泛素-蛋白酶体系统的抑制有关。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽表面修饰多孔钽对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能的促进作用

目的:研究精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽表面修饰多孔钽(Ta)对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能等生物学行为的影响,探讨RGD/软骨细胞/多孔钽复合物作为软骨组织工程支架材料修复软骨缺损、促进软骨再生的可行性。方法:通过物理吸附的方法将不同浓度RGD肽及Ⅱ型胶原(ColⅡ)吸附于多孔钽表面,分为Ta-RGD组、Ta-ColⅡ组、Ta-RGD/ColⅡ0.2g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组、Ta-RGD/ColⅡ10.0g·L-1组及纯Ta组。分离培养新西兰幼兔关节软骨细胞,取第2代细胞种植于修饰前后多孔钽使其成为RGD/软骨细胞/多孔钽复合物;扫描电镜观察RGD/软骨细胞/多孔钽复合物形貌特征以及软骨细胞生长状态,沉淀法检测多孔钽修饰前后软骨细胞黏附率,MTT法检测多孔钽修饰前后软骨细胞的增殖水平,羟脯氨酸法测定软骨细胞分泌功能。结果:多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞黏附率均高于修饰前(P<0.05),其中黏附效果最好的是4h的Ta-RGD/ColⅡ5.0g·L-1组,同时各组间黏附率比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下各组软骨细胞在修饰后的多孔钽表面生长状态良好,细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,分泌细胞外基质覆盖于多孔钽表面;MTT检测,多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞增殖水平均高于修饰前(P<0.05),其中增殖效果最好的是13d的Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组;羟脯氨酸检测,Ta-RGD/ColⅡ1.0g·L-1组羟脯氨酸水平高于其他各组(P<0.05)。结论:RGD多肽可有效加强软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内的黏附及增殖,对软骨细胞的分泌有促进作用。