甘草查尔酮B联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甘草查尔酮B(licochalcone B,LCB)联合顺铂(DDP)对于人非小细胞肺癌A549细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测LCB联合DDP对A549细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞技术检测对凋亡、细胞周期的影响;Hoechest33258染色后观察对A549细胞核的影响;采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达。结果:LCB联合DDP用药在48 h、72 h对细胞增殖抑制率均高于LCB组和DDP组(P<0.05),药物相互作用系数大于1.15,为两药相互增效。联合用药组具有更强的抑制细胞克隆形成作用(P<0.05),同时将细胞阻滞在G0/G1期和S期(P<0.05);联合用药组48 h的细胞凋亡率高于两药单用组(P<0.05),细胞呈现明显的凋亡特征。联合用药组Bax/Bcl-2比值及Caspase-3蛋白表达高于单独用药组(P<0.05)。结论:甘草查尔酮B联合顺铂可促进人肺癌细胞A549凋亡,并抑制其增殖,表明联合用药可增强抗肿瘤活性,其作用机制可能与凋亡相关通路有关。

甘草查尔酮B抗肿瘤、抗炎及抗病毒作用研究进展

甘草查尔酮B是从甘草根中提取出来的黄酮类化合物,具有多种药理学活性。本文结合近年来国内外关于甘草查尔酮B抗肿瘤、抗炎和抗病毒作用及其机制的最新研究进展进行总结,以期为今后开展相关研究提供理论依据。

甘草查尔酮B对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用及其机制

目的:探讨甘草查尔酮B(LCB)对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞的抑制作用及其机制。方法:常规培养MDA-MB-231细胞,用不同浓度LCB处理后,采用CCK-8法、免疫荧光法、FCM和WB法分别检测MDA-MB-231细胞的增殖活力、细胞核内DNA双链断裂标志物γ-H2AX的表达,以及细胞周期和周期调控、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、内质网应激信号途径相关蛋白的表达水平。结果:LCB能显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖活力(P<0.05),使γ-H2AX阳性细胞数和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)、G2/M和S期的细胞数量均明显增加(均P<0.05)、MAPK家族主要成员细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)和p38MAPK蛋白的磷酸化水平均显著上调(均P<0.05),还使内质网应激途径相关蛋白Bip、ATF4和CHOP的表达均显著上调(均P<0.05)。结论:LCB能够显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖活力、诱导DNA损伤和细胞周期阻滞于G2/M和S期,LCB对MDA-MB-231细胞的抑制作用可能与其激活MAPK和内质网应激信号通路相关。

甘草查尔酮B体外细胞毒作用研究

为考察甘草查尔酮B(Licochalcone B)对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用,初步探讨其作用机制,本研究采用MTT染色法检测甘草查尔酮B对5种肿瘤细胞人乳腺癌细胞(MCF-7)、人膀胱移行细胞癌细胞(T24)、人宫颈癌细胞(HeLa)、高转移性小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)、小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)的增殖抑制作用;台盼蓝拒染法测定甘草查尔酮B对B16F0细胞的致死率;相差显微镜观察细胞形态;JC-1染色测定线粒体膜电势(△Ψm)。结果表明:甘草查尔酮B(5、7.5、10、12.5、15μg/mL)可浓度依赖性地抑制5种不同肿瘤细胞的增殖,在最高浓度时,抑制率分别为67.52%、67.24%、65.41%、62.81%、68.13%;随甘草查尔酮B处理浓度的增加,B16F0细胞死亡率升高,细胞皱缩,脱落细胞增多;甘草查尔酮B可明显降低B16F0细胞的线粒体膜电势,且呈现浓度依赖性。以上结果显示:甘草查尔酮B对多种肿瘤细胞体外增殖均有明显的抑制作用,这可能与其所致的线粒体损害有关。

甘草查尔酮B对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甘草查尔酮B(LCB)对于人非小细胞肺癌A549细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法和平板克隆形成法检测LCB对A549细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞技术检测对细胞周期、凋亡的影响;采用Western blotting法检测线粒体凋亡蛋白表达。结果:LCB可显著抑制A549细胞的增殖。LCB经处理后将A549细胞阻滞在G0/G1期(P<0.05),同时细胞凋亡率也明显增加(P<0.05)。Bax/Bcl-2比值及Caspase-3蛋白表达明显上升(P<0.05)。结论:LCB可通过阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,从而抑制非小细胞肺癌A549的增殖。

甘草查尔酮B的合成

对药食同源甘草中具有保健功能的查尔酮化合物甘草查尔酮B的合成进行研究。以2,3,4-三羟基苯甲醛为原料,用氯甲基乙基保护醛基对位和间位羟基,再用甲基保护邻位羟基和四氢吡喃保护的对羟基苯乙酮在氢氧化钙催化下发生Claisen-Schmidt缩合,最后用氯化氢乙醇溶液脱去保护基得到甘草查尔酮B。考察了溶剂和碱对Claisen-Schmidt缩合反应的影响,确定了乙醇和水等比例混合为最佳溶剂,氢氧化钙为最佳碱。总收率为17.1%,产品的结构经红外、核磁、高分辨质谱确证。该合成方法原料易得,催化剂便宜、溶剂绿色、操作简便。

甘草查尔酮B减轻高胆固醇饮食诱导的动脉粥样硬化

目的:探讨甘草查尔酮B是否能改善动脉粥样硬化。方法:采用高胆固醇饲料(HCD)喂食斑马鱼,建立斑马鱼动脉粥样硬化模型,并使用0.1 mg·L^(-1)和1 mg·L^(-1)甘草查尔酮B进行治疗。使用Tg(fli1a:EGFP)斑马鱼幼鱼构建模型,并向饲料中添加10 ng·g-1橙色荧光标记的胆固醇,荧光显微镜检测斑马鱼血管中胆固醇蓄积。试剂盒检测LDL-C含量。分别使用Tg(lyz:DsRED2)和Tg(mpx:EGFP)和斑马鱼幼鱼构建模型,荧光显微镜检测斑马鱼血管中巨噬细胞浸润和中性粒细胞蓄积。HE染色和EVG染色检测斑马鱼血管中斑块形成的情况。结果:甘草查尔酮B显著减轻动脉粥样硬化斑马鱼血管中的胆固醇蓄积、中性粒细胞聚集和巨噬细胞浸润,降低LDL-C的含量,改善脂质代谢紊乱,最终减轻血管中的斑块形成。结论:甘草查尔酮B可有效减轻HCD诱导的动脉粥样硬化。

甘草查尔酮B诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B)诱导小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)凋亡作用并初步探讨其机制。方法:取对数生长期B16F0细胞按5 000个/孔接种于96孔板中,MTT染色法检测甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5,15 mg.L-1)作用24 h后,对B16F0细胞的增殖抑制作用;取对数生长期B16F0细胞按1×105个/孔接种于6孔板中,甘草查尔酮B(7.5,15mg.L-1)作用24 h后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期B16F0细胞按5×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5 mg.L-1)作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测与凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达;荧光法检测半胱氨酸蛋白酶蛋白9(Caspase-9)和半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)相对活性。结果:甘草查尔酮B能有效抑制B16F0细胞增殖,作用24 h后对细胞的生长有明显的抑制作用,IC5011.3 mg.L-1,在5～15 mg.L-1表现出明显的剂量依赖,细胞出现明显凋亡特征,随甘草查尔酮B浓度的增加凋亡率逐渐升高;甘草查尔酮B(10,12.5 mg.L-1)能明显下调Bcl-2/Bax,上调Caspase-3,Caspase-9的表达,其中7.5 mg.L-1甘草查尔酮B引起Caspase-9,Caspase-3的活化程度较12.5 mg.L-1高。结论:甘草查尔酮B可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导B16F0细胞凋亡。

甘草查尔酮B对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的增殖抑制作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B,LCB)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:取对数生长期MCF-7细胞按6×104个/孔接种于6孔板中,台盼蓝拒染法检测MCF-7细胞的生长曲线并计算细胞倍增时间;取对数生长期MCF-7细胞按1×104个/孔接种于96孔板中,噻唑蓝(MTT)法检测甘草查尔酮B(0,10,20,40,60,80μmol·L-1)作用24,48,72 h后,对MCF-7细胞的增殖抑制作用;取对数生长期MCF-7细胞按2×105个/孔接种于6孔板中,LCB(0,20,40,80μmol·L-1)作用48 h后,显微镜下观察细胞形态;取对数生长期MCF-7细胞按2×105个/孔接种于6孔板中,LCB(0,20,40,80μmol·L-1)作用48 h后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期MCF-7细胞按9×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,LCB(0,20,40,80μmol·L-1)作用48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测与凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-XL,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9转录水平的变化。结果:与0μmol·L-1LCB组比较,LCB能够以时间和浓度依赖性方式有效的抑制MCF-7细胞增殖,经LCB处理后的MCF-7细胞呈现出染色体边集、核浓缩、核碎裂等典型凋亡形态学特征,细胞凋亡率随着LCB浓度的增加而升高,且LCB能明显下调Bcl-XL,上调Bax,Caspase-3,Caspase-9的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:LCB在体外能显著抑制MCF-7细胞增殖,具有诱导MCF-7细胞凋亡的作用,其机制可能与药物上调Bax,下调Bcl-XL,激活由Caspase-3,Caspase-9介导的线粒体凋亡信号通路有关。

甘草查尔酮B对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探究甘草查尔酮B对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法SGC-7901细胞分为4组:对照组、40、80、120 txm ol/L甘草查尔酮B剂量组。CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;Transw ell检测细胞侵袭;体外成管实验检测微管形成;免疫荧光检测A K T膜定位;W estern印迹检测相关蛋白表达。结果中、高剂量甘草查尔酮B可抑制细胞的增殖、侵袭、微管形成数及间质细胞形态,并促进凋亡。中、高剂量甘草查尔酮B可上调p 53表达,下调K i67、VEGF、p-P13K、p-AKT表达,并减少AKT细胞膜定位。结论甘草查尔酮B可抑制SGC-7901细胞增殖、侵袭,促进凋亡,并抑制微管形成和PI3K/AKT通路活性。

基于网络药理学和分子对接研究甘草治疗白癜风的作用机制

目的利用网络药理学和分子对接方法研究甘草治疗白癜风的作用靶点和机制。方法使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选得到甘草中的活性成分,使用SwissTargetPrediction数据库预测各个活性成分的作用靶点;通过OMIM、GeneCards数据库获取白癜风的相关靶点,与活性成分作用靶点取交集;利用Cytoscape 3.9.1软件对交集靶点进行拓扑学分析并筛选得到甘草主要活性成分,构建得到“甘草主要活性成分–白癜风靶点”网络;将甘草活性成分和白癜风的交集靶点导入String数据库构建靶点间的蛋白相互作用(PPI)网络;使用Metascape数据库对潜在作用靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDockTools 1.5.7软件进行分子对接验证并使用PyMol软件对结果进行可视化处理。结果共筛选得到谷甾醇、格里西轮、光果甘草宁、甘草查尔酮B、刺芒柄花黄素等84个活性成分,作用于8400个潜在靶点,白癜风相关靶点1349个,甘草–白癜风的交集靶点133个;PPI网络分析得到蛋白激酶B1(Akt1)、信号传导和转录激活蛋白3(STAT3)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、有丝分裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)6个核心作用靶点;GO和KEGG富集分析显示,甘草治疗白癜风主要涉及病毒感染、癌症、细胞凋亡、乙型肝炎、细胞衰老等信号通路。分子对接结果显示谷甾醇、格里西轮、光果甘草宁、(2S)-7-羟基-2-(4-羟基苯基)-8-(3-甲基丁烯-2-乙烯基)色曼-4-酮、甘草查耳酮B、刺芒柄花黄素6个核心成分与核心靶点具有较好的结合能。结论甘草可能通过调控细胞衰老和凋亡、免疫功能、炎症等多个方面发挥治疗白癜风的作用,为后续研究甘草治疗白癜风提供参考。

RP-HPLC法同时测定不同产地甘草中9个主要成分的含量

目的:建立同时测定甘草药材中芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸含量的高效液相色谱方法。方法:采用DiamonsilTMC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,检测波长为276 nm(0～20 min)、360 nm(20～30 min)、276 nm(30～35 min)、370 nm(35～48 min)、248 nm(48～55 min),柱温为40℃。结果:芹糖基甘草苷、甘草苷、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮B、甘草素、刺甘草查尔酮、异甘草素和甘草酸的浓度分别在13.1-262μg.mL-1(r=0.9994)、8.3-100μg.mL-1(r=0.9997)、5.2～104μg.mL-1(r=0.9997)、0.96～11.5μg.mL-1(r=0.9995)、0.31～10.00μg.mL-1(r=0.9999)、1.11～22.2μg.mL-1(r=0.9991)、0.23～7.25μg.mL-1(r=0.9998)、0.52～10.40μg.mL-1(r=0.9996)、25.25～808.0μg.mL-1(r=0.9995)与各自峰面积值呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为103.6%、104.5%、104.9%、100.4%、102.2%、101.5%、100.4%、98.5%、101.7%。结论:本方法简便,重复性好,可以更好地用于甘草药材的质量控制。