马铃薯三糖甘草次酸衍生物通过抑制SARS-CoV-2进入靶细胞作为潜在的小分子新冠病毒融合抑制剂

目的 研究马铃薯三糖甘草次酸衍生物能否通过抑制SARS-CoV-2进入靶细胞,作为潜在的小分子新冠病毒融合抑制剂。方法 以天然SARS-CoV-2进入抑制剂甘草酸为先导化合物,利用活性亚结构的拼合原理等设计并合成了系列马铃薯三糖甘草次酸衍生物。利用SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型,检测该系列甘草次酸衍生物的体外抗SARS-CoV-2活性;利用表面等离子共振技术及假病毒模型寻找先导化合物1b的抗病毒作用靶点;利用SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合体系,检测先导化合物1b是否作用于SARS-CoV-2病毒入侵宿主的膜融合过程;基于分子对接与定点突变技术,确定先导化合物1b与S蛋白的作用模式等。结果 先导化合物1b对SARS-CoV-2奥密克戎假病毒有显著抑制作用,EC50值为3.28μmol/L(P<0.05),对其它SARS-CoV-2变异株假病毒有广谱抗病毒活性。细胞-细胞膜融合实验显示1b能够抑制合胞体的形成。分子对接预测先导化合物1b可与S1与S2亚基交界处的空腔中的Glu309、Ser305、Arg765、Lys964等多个保守氨基酸残基产生氢键作用,亲和力为-8.6 kcal/mol。化合物1b在10、5、2.5、1.25μmol/L时对Arg765、Lys964、Glu309和Leu303突变后的假病毒的抑制活性显著降低(P<0.01)。结论 马铃薯三糖甘草次酸衍生物能够靶向作用于S蛋白,特异性干扰病毒-细胞膜融合阶段,继而发挥抗SARS-CoV-2感染的作用,是一类结构新颖的小分子SARS-CoV-2融合抑制剂。

甘草次酸衍生物配体18-GA-Ala介导脂质体的制备及肝靶向性研究

目的:合成制备甘草次酸衍生物配体丙氨酸丁二酸甘草次酸十八烷酯(18-GA-Ala),并修饰包埋药物丹酚酸B(Sal B)和丹参酮ⅡA(TSN)的脂质体,探讨该脂质体对小鼠的肝靶向作用。方法:采用薄膜分散-高压乳匀法制备18-GA-Ala配体修饰的TSN-Sal B脂质体及未修饰配体的脂质体,考察粒径、电位、包封率、多分散系数和配体结合率;尾静脉给药后不同时间点获取血浆样本及小鼠心、肝、脾、肺、肾组织样本,超高效液相色谱法测定各样本中Sal B和TSN的含量,评价18-GA-Ala配体的肝靶向效果。结果:配体18-GA-Ala修饰后的脂质体中,Sal B在肝脏的药时曲线下面积(AUC)分别是脾、肺和肾的1.19、1.39、63.67倍,TSN在肝脏的AUC分别为脾、肺、肾的4.64、0.36、14.12倍。结论:甘草次酸衍生物配体18-GA-Ala修饰后的脂质体可增加Sal B和TSN在肝脏中的峰浓度,表现出一定的肝靶向作用。

甘草次酸衍生物TY501抗肺纤维化作用及机制研究

目的探索甘草次酸衍生物TY501对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化模型大鼠的抗肺纤维化作用及初步机制。方法将40只大鼠随机分成5组:假手术组、模型组、吡非尼酮组、TY501高剂量组和低剂量组。经气道给予BLM制备大鼠肺纤维化模型,每天灌胃给予受试药。实验结束后,测定肺系数、氧分压(Pa O2),测定BALF中ALB、ALP、LDH以及肺组织中GSH、HYP含量,测定血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(COL4)含量。结果 1肺纤维化早期肺泡炎阶段相关指标:各治疗组与模型组相比,肺系数显著下降(P<0.05)、Pa O2明显升高(P<0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠BALF中ALP、ALB以及LDH呈下降趋势(P<0.05);模型组肺组织匀浆中GSH含量反馈性增高,与假手术组相比存在明显差异(P<0.05),各治疗组较模型组含量降低(P<0.05);(2)肺纤维化晚期肺间质纤维化阶段:大鼠肺组织HYP、血清PCⅢ(TGF-β通路指标)、血清COL4(MMPs通路指标)含量,各治疗组较模型组呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05)。结论 TY501对肺纤维化治疗存在价值,能够减轻BLM诱导的肺纤维化程度。TY501可能通过阻断TGF-β的作用、抑制MMPs等多途径抑制肺纤维化的发生,减轻肺纤维化症状。

甘草次酸衍生物TY501对小鼠免疫系统的影响

目的通过小鼠灌胃给药,研究TY501对小鼠中枢免疫器官的影响;对外周血中白细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞及各亚型淋巴细胞的比例和数量影响。方法选用50只ICR小鼠,设对照组、阳性对照泼尼松龙组、TY501低、中、高剂量组,对照组给予动物饮用水,给药组灌胃给予相应药物,20 mg/kg每日1次,持续给药21 d,末次给药24 h后分别进行外周血中白细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞的数量和各亚型淋巴细胞的比例测定;胸腺和脾脏脏器指数测定。结果泼尼松龙灌胃给药可导致动物体重显著降低,胸腺、脾脏萎缩,外周血中淋巴细胞数量降低等一系列对免疫系统的毒性反应;TY501灌胃给药对动物中枢免疫器官、外周血淋巴细胞数量及亚型未产生明显影响。结论TY501对小鼠免疫系统未发现明显的抑制作用。

α-甘草次酸衍生物对大鼠淋巴细胞体外活化的影响

目的:研究α-甘草次酸衍生物(GB)对大鼠外周血淋巴细胞体外活化的影响,探讨其是否对淋巴细胞活性存在抑制作用。方法:无菌分离大鼠外周血淋巴细胞并制成悬液,分别与不同浓度的GB预先孵育2 h,加入促分裂原伴刀豆蛋白A(ConA),继续孵育24 h后,ELISA法检测上清液中IL-4、IFN-γ含量。结果:2 mg·L^(-1)和1 mg·L^(-1)GB能显著降低ConA刺激下大鼠淋巴细胞产生的IL-4水平,而0.5 mg·L^(-1)GB则提高淋巴细胞产生的IL-4水平;2 mg·L^(-1)GB显著降低ConA刺激下大鼠淋巴细胞产生的IFN-γ水平,而1 mg·L^(-1)和0.5 mg·L^(-1)GB则提高淋巴细胞产生的IFN-γ水平。结论:给药剂量不同,GB对活化的大鼠外周血淋巴细胞作用不同,值得深入研究。

α-甘草次酸衍生物对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管-间质的双重保护作用

目的:观察α-甘草次酸衍生物(GB)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠外周血淋巴细胞活性、肾小管-间质α-肌动蛋白(α-SMA)及白细胞共同抗原(LCA)表达的影响,探讨GB对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管-间质损伤的保护作用及机理。方法:SD大鼠行左侧输尿管结扎手术,随机分为模型组、GB治疗组(10、20、40mg.Kg-1GB二钾盐腹腔注射)。各组大鼠于术后第8天取外周血和肾实质,分别检测钙调磷酸酶(CaN)活性及丙二醛(MDA)含量,观察肾小管-间质形态学变化,免疫组化检测间质中α-SMA和LCA的表达。结果:和假手术组相比,模型组大鼠CaN活性和MDA含量均升高,肾间质炎症细胞浸润和肾小管损害增加,α-SMA表达和LCA阳性细胞亦增多。经GB中、高剂量治疗后,上述指标均改善。结论:GB对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管-间质损伤具有双重保护作用,可能与其抗炎和抑制淋巴细胞活性有关。

甘草次酸衍生物受体靶向复方脂质体的制备及其体外释放研究

目的:合成两亲性导向分子甘草次酸衍生物3-琥珀酸-30-硬脂醇甘草次酸酯(18-GA-Suc),研究其掺入甘草次酸—丹参酮ⅡA—丹酚酸B复方脂质体(GTS-Lip)的制备工艺,并考察其体外释放规律。方法:采用1HNMR和13CNMR表征18-GA-Suc的结构,通过单因素考察确定18-GA-Suc的投料量,低速离心法测定其掺入比率,比较修饰前后复方脂质体的理化性质,以平衡透析法考察甘草次酸衍生物受体靶向的甘草次酸—丹参酮ⅡA—丹酚酸B复方脂质体(Suc-GTS-Lip)中3种成分的体外释放规律。结果:优化的处方工艺为:18-GA-Suc投料量为膜材的10%(mol·mol-1),掺入比率为96.58%。Suc-GTS-Lip形态圆整,分布均匀,其中甘草次酸(GA)、丹参酮ⅡA(TSN)和丹酚酸B(Sal B)的平均包封率分别为86.15%,81.70%,91.05%,平均粒径为128.7 nm,平均Zeta电位为-15.5m V。GA和TSN体外释放规律符合Higuchi方程,Sal B体外释放规律符合Hixon-crowell方程。结论:甘草次酸衍生物(18-GA-Suc)能在脂质体膜上成功表达,本脂质体制备工艺稳定,GA、TSN和Sal B 3种成分在体外均具有一定的缓释作用,为进一步研究其肝靶向性奠定了基础。

18-β-甘草次酸衍生物的合成与体外抗HBV活性研究

本文合成18-β-甘草次酸衍生物4个,采用MT法测定其18-β-甘草次酸衍生物的抗HBV活性。再进行样品抑制Hep G2.2.15细胞表达表面抗原(HBs Ag)的测试。通过测试样品GLY-1、GLY-5、GLY-9、GLY-10对HBs Ag的分泌表达有一定的抑制作用。

甘草次酸衍生物在小鼠体内的抗哮喘活性评价

目的评价甘草次酸衍生物XC267在小鼠体内的抗哮喘活性。方法制作卵清蛋白(OVA)诱导哮喘小鼠模型,设置假手术组、OVA组、班布特罗对照组、XC267低剂量给药组、XC267中剂量给药组、XC267高剂量给药组,每天给药1次,连续给药1周。从小鼠肺组织切片评价XC267对哮喘症状的改善情况;从β_(2)-肾上腺素受体(β_(2)-AR)、G蛋白结合蛋白α13(Gα13)、腺苷酸环化酶-1(AC-1)和蛋白激酶A(PKA)的表达情况明确XC267的作用机制。结果在10.0 mg/(kg·d)和20.0 mg/(kg·d)的给药剂量下,XC267可显著降低哮喘小鼠肺组织的炎性细胞浸润;连续给药1周后,哮喘小鼠支气管组织中的β_(2)-AR、Gα13、AC-1和PKA水平显著提高。结论苗头化合物XC267在10.0 mg/(kg·d)给药剂量下,能显著提升哮喘小鼠体内β_(2)-AR信号转导通路相关蛋白的表达水平,减轻其肺组织的炎性浸润,改善哮喘症状。

甘草次酸衍生物抗肝纤维化的实验研究

目的探讨甘草次酸衍生物(TY501)对四氯化碳(CCl_4)致小鼠肝纤维化的保护作用及其机制。方法采用经典CCl_4造模法建立小鼠肝纤维化模型,给予高、中、低剂量(45、15、5 mg/kg)TY501干预治疗,用秋水仙碱(0.36 mg/kg)作阳性对照。给药30 d后,检测各组小鼠肝功能指标、肝纤维化指标、肝组织羟脯氨酸(Hyp)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的量,并取其肝组织进行病理学染色。结果与模型组相比,TY501各治疗组肝功能指标(ALT、AST、ALP、ALB)、肝纤维化指标(HA、LN、PCIII、CIV)及肝组织Hyp、TGF-β1的量均有不同程度改善,其中高剂量组改善作用最为明显(P<0.05、0.01);肝组织病理学切片显示,给药组小鼠肝纤维化程度降低,有逆转趋势。结论 TY501对CCl_4造成的肝纤维化有明显的保护作用。

甘草次酸衍生物18-GA-Gly介导肝主动靶向脂质体的制备及体内相关研究

基于国内外对甘草次酸配体介导主动肝靶向脂质体的研究情况,该文主要对以甘草次酸为母核的肝靶向配体18-GA-Gly修饰的脂质体的肝靶向效果进行研究。采用薄膜分散-高压乳匀法制备18-GA-Gly配体介导的丹参酚酸B-丹参酮ⅡA脂质体及未修饰配体的脂质体,考察2种脂质体的制剂学性质,考察粒径、电位、包封率和配体结合率;尾静脉给药后不同时间点获取血浆样本以及小鼠心、肝、脾、肺、肾组织样本,UPLC测定各样本中丹参酚酸B(Sal B)和丹参酮IIA(TSN)含量,评价18-GA-Gly配体的肝靶向效果。结果显示脂质体Gly-TS-Lip和TS-Lip的粒径、电位、包封率、配体结合率基本符合要求;体内靶向性考察结果显示Gly-TS-Lip组脂质体与TS-Lip组脂质体血浆数据无显著性差别;甘草次酸衍生物配体18-GA-Gly介导脂质体可以增加Sal B和TSN在肝组织的峰浓度,但并未显示明显的肝靶向效果。

新型含异噁唑的甘草次酸酰胺类衍生物的合成研究

目的合成甘草次酸酰胺的异噁唑衍生物,寻找活性好的抗炎药物。方法以甘草次酸为原料,与3-取代苯基-5-异唑甲胺进行偶联,合成了6个新型甘草次酸酰胺类衍生物,采用IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等方法确定其化学结构。以二甲苯引起的小鼠耳肿模型和醋酸引起的小鼠腹膜炎模型评价了抗炎活性。结果IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等数据表明这些化学结构正确。其中,化合物具有明显的抗炎活性。结论合成的系列新化合物结构正确,发现了一个抗炎活性较强的化合物。

18β-甘草次酸哌嗪衍生物A30抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖

目的研究18β-甘草次酸(18β-GA)哌嗪衍生物A30抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的机制。方法实验分为对照组、18β-GA组、A30组,采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测胱天蛋白酶8(caspase-8)和Bcl2蛋白水平。结果 (2~128)μg/m L A30均可抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈剂量依赖性。18β-GA和A30均可诱导SMMC-7721细胞凋亡,并且A30处理细胞的凋亡率显著高于18β-GA组。与对照组相比,18β-GA和A30组的G2/M期细胞显著增加,caspase-8蛋白水平均显著升高,而Bcl2水平均显著降低。结论 A30能抑制SMMC-7721细胞增殖,抑制效果强于18β-GA,与降低细胞Bcl2水平和增加caspase-8水平有关。

相转移催化合成11-脱氧甘草次酸-3-位酯类衍生物

以甘草次酸为原料 ,经还原制得 1 1 -脱氧甘草次酸 ,然后在聚苯乙烯固载化聚乙二醇 40 0( PS- PEG- 40 0 )的催化下。合成了七种具有潜在药理活性和应用前景的 1 1 -脱氧甘草次酸 - 3-位酯类衍生物。合成方法简单 ,产率较高 。

甘草次酸及其衍生物在肝靶向载药系统中的应用

目前临床上肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等肝脏疾病已成为多发病和常见病。开发肝靶向载药系统是肝病治疗的研究热点。甘草次酸(GA)是甘草的主要有效成分之一,研究表明肝细胞膜上存在能够与甘草次酸特异性结合的位点。对以甘草次酸及其衍生物为载体的靶向前药、脂质体、纳米粒等肝靶向载药系统的最新研究进展进行综述。

18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物体外抗肿瘤活性研究

本试验研究18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c对HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞增殖的影响。利用MTT法检测18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c对HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞的抑制率;利用Hoechst-33258细胞凋亡染色试剂盒检测细胞凋亡情况;用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹法检测相关蛋白表达水平;通过检测Caspases-3的活性进一步说明用药组诱导细胞凋亡的情况。结果表明,18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c对HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞增殖均有抑制作用及促凋亡作用,且呈浓度依赖性,经t检验均有统计学意义(P<0.05)。18β-甘草次酸吡啶酰胺衍生物6c、10c、11c可诱导HeLa、SMMC-7721、SGC-7901细胞凋亡。

18β-甘草次酸氨基二硫代甲酸酯衍生物对SMMC-7721细胞增殖的影响

利用MTT法测定SMMC-7721细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率,通过细胞凋亡-Hoechst33258染色试剂盒,利用荧光显微镜观察细胞凋亡情况,研究了18β-甘草次酸氨基二硫代甲酸酯衍生物1c、2c、3c、4c对SMMC-7721细胞的作用.结果显示:18β-甘草次酸氨基二硫代甲酸酯衍生物1c、2c、3c、4c对SMMC-7721细胞均有抑制作用,且呈浓度依赖性.经t检验分析同一时间各组生长抑制率与对照组相比差异均有统计学意义(p<0.05).说明18β-甘草次酸氨基二硫代甲酸酯衍生物1c、2c、3c、4c对SMMC-7721细胞有明显的抑制作用及促凋亡作用.

甘草次酸及其衍生物TY501对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响

目的探究甘草次酸及其衍生物TY501对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。方法以小鼠巨噬细胞RAW264.7为靶细胞,设置空白组,脂多糖(LPS)1μg/mL处理组(模型组),LPS1μg/mL加80、40、20、10μg/mL药物处理组(受试药物TY501,对照药物泼尼松龙、甘草次酸、吡罗昔康),每组设置4个复孔在给药刺激24h后按照CCK-8试剂盒说明测定各药物对细胞增殖抑制率。结果TY501半数抑制浓度(IC50)为233μg/mL,泼尼松龙IC50为1571μg/mL,甘草次酸IC50为31μg/mL,吡罗昔康IC50为14187μg/mL。结论甘草次酸对RAW264.7巨噬细胞的增殖具有明显的抑制作用,甘草次酸衍生物TY501也可抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖,在同等质量浓度条件下其对小鼠巨噬细胞增殖的抑制程度强于泼尼松龙,弱于甘草次酸,表明甘草次酸及其衍生物TY501对于小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的抑制作用可能是其发挥抗炎作用的机制之一。

甘草次酰苯并三氮唑的合成及其与聚乙烯醇的反应

在DCC的作用下,甘草次酸与苯并三氮唑反应得到甘草次酰苯并三氮唑,然后其与聚乙烯醇(PVA)进行交换反应,制得聚乙烯醇的甘草次酸酯衍生物.