甘草酮A通过调节mTOR/HIF-1α途径对顺铂诱导的肾小管上皮细胞的保护作用机制

目的:探究甘草酮A(Lico A)通过mTOR/HIF-1α途径对顺铂诱导的肾小管上皮细胞的保护作用及机制。方法:CCK-8检测HK-2细胞活性;试剂盒检测LDH活性及TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、SOD、GSH-Px含量;TUNEL染色检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白及mTOR/HIF-1α通路蛋白表达。结果:CCK-8结果表明,Lico A对正常HK-2细胞无毒性,且增强了顺铂诱导的HK-2细胞活力(P<0.05);Lico A降低了顺铂诱导的HK-2细胞LDH活性,并降低了炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和氧化应激因子MDA、SOD、GSH-Px含量(P<0.05)。TUNEL染色表明Lico A降低了顺铂诱导的HK-2细胞凋亡水平(P<0.05);Western blot结果表明Lico A降低了Bax蛋白表达,增加了Bcl-2蛋白表达,并降低了p-mTOR和HIF-1α蛋白表达(P<0.05);采用MHY1485和DMOG通路激活剂激活mTOR/HIF-1α通路后逆转了Lico A对HK-2细胞的保护作用,HK-2细胞活力降低,LDH活性及TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、SOD、GSH-Px含量增加,细胞凋亡率降低,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论:Lico A通过抑制mTOR/HIF-1α途径保护顺铂诱导的HK-2细胞损伤。

甘草查尔酮A对HL-60细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制

目的 探究甘草查尔酮A(LA)对急性髓系白血病(AML)细胞HL-60的作用及其机制。方法 将人AML细胞系HL-60细胞分为对照组、LA组(30μmol/L)、IL-6组(100 ng/mL,JAK2/STAT3信号通路激活剂)和LA+IL-6组。培养48 h后,采用MTT法和克隆形成实验检测HL-60细胞增殖活性;采用流式细胞术检测HL-60细胞周期分布和细胞凋亡;采用Transwell实验检测HL-60细胞侵袭和迁移;采用Western blot检测p21、p27、cyclin E2、CDK2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3、p-JAK2,JAK2,p-STAT3和STAT3蛋白表达水平。结果 与对照组比较,LA组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均降低(P<0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均降低(P<0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P<0.05);G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P<0.05),p21、p27、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达量均升高(P<0.05)。与对照组比较,IL-6组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均升高(P<0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均升高(P<0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均升高(P<0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均降低(P<0.05),p21、p27、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达量均降低(P<0.05)。与IL-6组比较,LA+IL-6组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均降低(P<0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均降低(P<0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P<0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P<0.05),p21、p27、Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达量均升高(P<0.05)。LA+IL-6组和LA组间上述指标差异没有统计学意义。结论 甘草查尔酮A可抑制AML细胞系HL-60细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡并将细胞阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。

甘草查尔酮B联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甘草查尔酮B(licochalcone B,LCB)联合顺铂(DDP)对于人非小细胞肺癌A549细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测LCB联合DDP对A549细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞技术检测对凋亡、细胞周期的影响;Hoechest33258染色后观察对A549细胞核的影响;采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达。结果:LCB联合DDP用药在48 h、72 h对细胞增殖抑制率均高于LCB组和DDP组(P<0.05),药物相互作用系数大于1.15,为两药相互增效。联合用药组具有更强的抑制细胞克隆形成作用(P<0.05),同时将细胞阻滞在G0/G1期和S期(P<0.05);联合用药组48 h的细胞凋亡率高于两药单用组(P<0.05),细胞呈现明显的凋亡特征。联合用药组Bax/Bcl-2比值及Caspase-3蛋白表达高于单独用药组(P<0.05)。结论:甘草查尔酮B联合顺铂可促进人肺癌细胞A549凋亡,并抑制其增殖,表明联合用药可增强抗肿瘤活性,其作用机制可能与凋亡相关通路有关。

甘草总黄酮对艰难梭菌的体内外抗菌作用研究

考察甘草总黄酮对艰难梭菌的抑菌活性及其抗菌机制,为艰难梭菌感染(CDI)的防治和甘草的高效利用提供依据。用微量肉汤稀释法、计数法测定了甘草总黄酮对艰难梭菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、生长曲线和杀菌曲线。通过扫描电镜观察、碘化丙啶(PI)摄取试验、胞外蛋白和ATP含量的测定,检测了甘草总黄酮对细菌细胞膜完整性的影响。建立了小鼠CDI模型,以体重变化和存活率为指标,评价了甘草总黄酮的体内抗菌活性。结果表明,甘草总黄酮对艰难梭菌的MIC和MBC分别为12.5μg/mL和25μg/mL,具有快速杀菌的特征。甘草总黄酮可显著破坏细菌细胞膜,导致ATP和蛋白等胞内物质的泄露,使细菌形态发生显著改变,进而导致菌体死亡。甘草总黄酮可显著缓解CDI小鼠的体重下降,7 d存活率为100%,疗效与万古霉素相当。甘草总黄酮具有显著的体内外抗艰难梭菌活性,破坏细菌细胞膜的完整性是其可能的抗菌机制。

甘草查尔酮A对结直肠癌细胞增殖、迁移、凋亡的作用机制

目的 探讨甘草查尔酮A对结直肠癌细胞恶性行为的影响,分析其作用机制是否与调控蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路有关。方法 用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验、流式细胞术和Western blot检测不同浓度(0、5、10、20 nmol/ml)甘草查尔酮A对结直肠癌细胞LoVo增殖、迁移、凋亡以及p-JAK2和p-STAT3蛋白水平的影响。用AG490抑制JAK2/STAT3信号通路,通过CCK-8、Transwell实验和流式细胞术评估LoVo细胞增殖、迁移、凋亡。结果 5、10、20 nmol/ml的甘草查尔酮A处理LoVo细胞48 h和72 h后的A450值、凋亡率显著升高(P<0.05),迁移数以及p-JAK2和p-STAT3蛋白水平显著降低(P<0.05)。AG490处理LoVo细胞48 h和72 h后的A_(450)值、凋亡率显著升高(P<0.05),迁移数以及p-JAK2和p-STAT3蛋白水平显著降低(P<0.05)。AG490和甘草查尔酮A联合处理LoVo细胞48 h和72 h后的A450值、凋亡率显著升高(P<0.05),迁移数显著降低(P<0.05)。结论 甘草查尔酮A通过抑制JAK2/STAT3信号通路来抑制结直肠癌细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡。

甘草查尔酮A与三种抗生素联用对产气荚膜梭菌感染小鼠的治疗作用

本研究旨在研究中药单体与抗生素联用对产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,CP)感染小鼠的影响。本试验以甘草查尔酮A(licorice chalcone A,LCA)为代表药物,探究LCA与抗生素联用的体外和体内治疗效果,通过联合药敏试验确定与中药单体LCA有协同作用的抗生素,测定了产气荚膜梭菌在不同浓度药物作用下的杀菌曲线、溶血试验、滑动试验以及对小鼠的气性坏疽治疗效果,比较不同种抗生素在不同浓度下与LCA联用的治疗作用。结果表明,克林霉素(clindamycin,CLDM)、四环素(tetracycline,TCN)、替米考星(tilmicosin,TMS)三种抗生素与LCA有协同作用。根据杀菌曲线结果显示,8μg·mL^(-1)LCA和16μg·mL^(-1)TMS几乎可以完全杀灭产气荚膜梭菌;2μg·mL^(-1)LCA与2μg·mL^(-1)TMS联合使用可显著降低细菌的溶血性,溶血几乎完全被抑制(溶血定量为9.08%)。值得注意的是,LCA对细菌的迁移力有一定的促进作用,能够提高菌毛介导的运动性,与TMS联用后其促进作用显著提升。动物体内试验结果表明,CLDM单独使用时对产气荚膜梭菌具有较好的抑制作用,治疗效果显著;TCN和TMS分别与LCA联合使用时表现出协同作用(FIC指数为0.375),同时治疗时也表现出较好的增效效果。因此,在治疗产气荚膜梭菌感染时,TMS与LCA联合作用,可以降低药物使用量并提高治疗效果。

基于NF-κB/STAT3信号通路探讨甘草查尔酮A对HaCaT细胞炎症反应的影响

目的探讨甘草查尔酮A对TNF-α和IFN-γ联合诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)炎症因子分泌的影响及其抗炎机制。方法CCK8法筛选甘草查尔酮A作用质量浓度。将细胞分为正常组、模型组(10 ng/mL TNF-α和10 ng/mL IFN-γ)和甘草查尔酮A组(5、10μg/mL)。CCK8法检测细胞活性,ELISA法和RT-qPCR法检测炎症因子及相关趋化因子的分泌和mRNA表达,Western blot法检测TNF-α、IL-6、NF-κB p65、p-NF-κB p65、STAT3、p-STAT3、JAK1、p-JAK1蛋白表达,DCFH-DA荧光探针法、流式细胞术分别检测细胞活性氧(ROS)水平和细胞凋亡情况。结果甘草查尔酮A质量浓度在10μg/mL及以下时对HaCaT细胞活性无显著影响(P>0.05),且在5、10μg/mL时对HaCaT细胞炎性损伤具有保护作用(P<0.01)。与模型组比较,甘草查尔酮A可降低TNF-α、IL-6、IL-1β水平,TNF-α、IL-6、IL-1β、RANTES、TARC、MDC mRNA表达,TNF-α、IL-6、p-NF-κB p65、p-STAT3和p-JAK1蛋白表达,ROS水平和凋亡率(P<0.01)。结论甘草查尔酮A能够减轻TNF-α和IFN-γ诱导的HaCaT细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/STAT3信号通路活化,进而抑制相关炎症因子表达和ROS水平有关。

甘草查尔酮A在比格犬体内的药代动力学研究

目的建立测定比格犬血浆中甘草查尔酮A含量的UPLC-MS/MS分析方法,并研究甘草查尔酮A单剂量静脉注射和灌胃给药后在比格犬体内药代动力学模式。方法比格犬以3 mg·kg^(-1)的剂量分别进行静脉注射和灌胃给药甘草查尔酮A,采集不同时间点的血浆样品,采用UPLC-MS/MS方法测定血浆中甘草查尔酮A的浓度,采用DAS 2.1.1版软件对血药浓度-时间曲线进行统计矩拟合,计算甘草查尔酮A的药代动力学参数。结果血浆中甘草查尔酮A的线性回归方程为:Y=0.039X+0.1959,R^(2)=0.9997,线性范围为2~2000μg·L^(-1)。静脉注射甘草查尔酮A在血浆中的半衰期t_(1/2)为6.57 h,药时曲线下面积(AUC0~t)为1665 h·mg·L^(-1),平均驻留时间(MRT0~t)为5.68 h,清除率(CL)为2106 L·h^(-1)·kg^(-1)。灌胃给药甘草查尔酮A在血浆中的t_(1/2)为8.23 h,AUC0~t为397 h·mg·L^(-1),MRT0~t为9.35 h,口服生物利用度为23.8%。结论甘草查尔酮A在血浆的UPLC-MS/MS方法具有良好的专属性与灵敏度。灌胃给药甘草查尔酮A具有良好的血浆暴露量及口服生物利用度。

甘草查尔酮A的药理学作用

甘草查尔酮A (Licochalcone A, Lico A)是甘草中提取出的天然活性化合物,因具备强大的药理学作用而引起众多国内外研究者的关注,并被广泛用于治疗炎症相关性疾病。此外,还可以作为抗菌剂应用于医学领域。我们综述了现有研究成果及最新研究进展,总结了甘草查尔酮A在治疗领域的应用及其相关的分子机制,旨在为研究者们更深入地研究甘草查尔酮A提供参考。Licochalcone A (Lico A) is a naturally occurring active compound derived from licorice, which has garnered significant attention from researchers both domestically and internationally due to its potent pharmacological effects. It has been extensively utilized in the treatment of inflammation-related diseases, and also exhibits antibacterial properties in the medical field. In this review, we have examined existing research findings and recent advancements, summarized the application of Licochalcone A in therapeutic settings along with its associated molecular mechanisms. The aim is to provide researchers with a reference for further investigation into Licochalcone A.

甘草查尔酮A通过调控PI3K/AKT信号通路诱导肺鳞癌细胞周期阻滞

目的探究甘草查尔酮A(LCA)对肺鳞癌细胞增殖和周期的影响及相关分子机制。方法通过MTT实验检测不同浓度LCA处理48 h对H226细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度(IC50);不同浓度LCA(0、10、20及40μmol/L)处理H226细胞48 h,通过流式细胞术检测LCA对细胞周期的影响,通过Western blot检测LCA对细胞周期相关蛋白CyclinD1,以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4表达的影响,并探究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况;选取雄性BALB/c-nu裸鼠构建皮下移植瘤模型,随机分为两组(对照组和LCA处理组),腹腔注射LCA 24 d后取肿瘤测量瘤体体积及质量,从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果MTT实验结果表明,与空白组比较,随着LCA浓度的增加,细胞存活率明显降低,48 h的IC50为28.3μmol/L;流式细胞术的结果表明LCA处理可以使细胞周期阻滞在G1期(P<0.05),Western blot的结果显示,LCA处理后,CyclinD1、CDK2和CDK4的表达均降低(P<0.05);PI3K和Akt的表达无明显变化,但是它们的磷酸化水平(p-PI3K和p-Akt的表达)显著降低(P<0.05);裸鼠荷瘤实验表明,LCA可使肿瘤体积和质量明显减小(P<0.05)。结论LCA可以抑制肺鳞癌的增殖并诱导细胞周期阻滞,其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

高效液相色谱法测定化妆品中3种甘草类功效成分

建立高效液相色谱法测定化妆品中3种甘草类功效成分。样品经75%(体积分数)甲醇溶液超声提取,采用Luna C_(18)(2)100A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.05%(体积分数)磷酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流量为1.0 mL/min,进样体积为10μL,柱温为30℃,采用二极管阵列检测器,在275、251、372 nm波长下分别测定甘草素、甘草酸、甘草查尔酮A,以保留时间和紫外吸收光谱定性,外标法定量。甘草素、甘草酸、甘草查尔酮A的质量浓度分别在1~20、2~40、0.5~10μg/mL范围内与对应的色谱峰面积线性关系良好,相关系数均为0.9999。平均回收率为95.8%~111.8%,测定结果的相对标准偏差均不大于3.6%(n=6)。检出限为0.05~0.6μg/g。该方法操作简便,灵敏度高,适用于化妆品中甘草素、甘草酸、甘草查尔酮A的检测。

甘草查尔酮B抗肿瘤、抗炎及抗病毒作用研究进展

甘草查尔酮B是从甘草根中提取出来的黄酮类化合物,具有多种药理学活性。本文结合近年来国内外关于甘草查尔酮B抗肿瘤、抗炎和抗病毒作用及其机制的最新研究进展进行总结,以期为今后开展相关研究提供理论依据。

甘草查尔酮A通过Akt/ERK信号通路抑制骨肉瘤增殖

目的 探究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法 体外培养骨肉瘤HOS和U2OS细胞,通过MTT实验检测不同浓度LCA处理不同时间对HOS和U2OS细胞增殖的影响;加入终浓度分别为对照组(含0.1%DMSO的培养液)、5、10及20μmol·L^(-1)的LCA处理细胞48 h,流式细胞术检测LCA对HOS和U2OS细胞凋亡的影响,通过Western blot检测LCA对细胞凋亡相关蛋白cleaved PARP1、Bcl-2、Bax以及Akt和ERK蛋白表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明,LCA可抑制骨肉瘤HOS和U2OS细胞的增殖,并且呈时间和剂量依赖性;流式细胞术的结果表明,LCA可引起细胞凋亡。Western blot结果显示,ERK和Akt的磷酸化被抑制,cleaved PARP1和Bax的表达量升高,Bcl-2的表达量降低。裸鼠荷瘤实验表明,注射LCA后肿瘤体积明显减小(P<0.05),肿瘤的质量明显减小(P<0.01)。结论 LCA可以抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与抑制Akt/ERK信号通路有关。

刺甘草查尔酮下调ASK1-JNK信号通路抗FFA诱导的非酒精性脂肪性肝病

目的探究刺甘草查尔酮(echinatin,Ech)对游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)诱导人肝癌(HepG2)细胞的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型的影响及作用机制。方法实验分组为对照组、FFA模型组、Ech组(0.3、1、3μmol·L^(-1));通过细胞形态学和化学荧光法分析细胞内脂质积累、线粒体损伤、氧化应激以及凋亡情况;分子对接预测Ech与ASK1和JNK蛋白的亲和力;Western blot分析NF-κB p65、BAX以及ASK1-JNK信号通路相关蛋白表达情况。结果相较于FFA模型组,Ech组细胞脂质积累明显减轻,线粒体损伤以及氧化应激情况得到改善,凋亡率明显下降,并且NF-κB p65、BAX、p-ASK1、JNK、p-JNK的蛋白表达量均明显降低。结论Ech改善FFA诱导的HepG2细胞脂质积累、线粒体功能障碍、氧化应激、细胞凋亡以及炎症反应,可能与下调ASK1-JNK信号通路有关。

甘草查尔酮A对结肠癌细胞中氧化还原稳态调控的影响

目的研究甘草查尔酮A对结肠癌细胞氧化还原调控的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测甘草查尔酮A对结肠癌细胞活性的影响;经甘草查尔酮A或活性氧(ROS)抑制剂处理后,流式细胞术和Western blot法检测结肠癌细胞凋亡率、凋亡蛋白和ROS水平;酶学实验和试剂盒检测甘草查尔酮A对硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性的影响;分子对接和Western blot法检测甘草查尔酮A对TrxR1蛋白的作用;沉默结肠癌细胞中TrxR1蛋白,经甘草查尔酮A处理后,检测ROS水平及凋亡率变化;经甘草查尔酮A或还原型谷胱甘肽(GSH)抑制剂处理后,检测细胞GSH水平及凋亡率。结果甘草查尔酮A能抑制结肠癌细胞活性(P<0.05,P<0.01),诱导结肠癌细胞发生凋亡(P<0.05,P<0.01),并上调其ROS水平;ROS抑制剂能逆转甘草查尔酮A引起的ROS水平上升和促凋亡作用(P<0.01);甘草查尔酮A能选择性抑制TrxR1活性(P<0.05,P<0.01),对TrxR1蛋白表达则几乎无影响(P>0.05);沉默TrxR1和GSH抑制剂均能协同甘草查尔酮A的促凋亡作用(P<0.01),甘草查尔酮A对GSH水平几乎无影响(P>0.05)。结论甘草查尔酮A可能通过抑制TrxR1蛋白活性、上调ROS水平的方式诱导结肠癌细胞凋亡。

刺甘草查尔酮调节自噬和NLRP3炎症小体减轻脓毒症心肌损伤

目的探究刺甘草查尔酮对自噬、NLRP3炎症小体和脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法将大鼠按照随机数表法分为Col、LPS、Ech L、Ech M、Ech H、阳性对照组。检测大鼠心功能指标(LVEDD、LVESD、FS、EF);ELISA检测血清中炎症因子(TNF-α、IL-1β)水平和心肌损伤标志物(cTnΙ、CK-MB)含量;HE染色检测心肌组织病理学变化;TUNEL检测心肌细胞凋亡率;蛋白质印迹检测心肌组织中自噬相关蛋白及炎性小体相关蛋白表达。结果和Col组相比,LPS组大鼠心功能指标LVEDD、LVESD和血清中TNF-α、IL-1β、cTnΙ、CK-MB水平明显升高,FS、EF明显降低,心肌组织中p62、NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达和心肌细胞凋亡率均明显升高,组间差异有统计学意义(P<0.05);和LPS组相比,Ech L、Ech M与Ech H组心功能指标LVEDD、LVESD和血清中TNF-α、IL-1β、cTnΙ、CK-MB水平明显降低,FS、EF明显升高,心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ι比值、Becline-1、p62均逐渐升高,NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达和心肌细胞凋亡率均逐渐降低,组间差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖。结论刺甘草查尔酮可减轻脓毒症大鼠心肌损伤,其可能和促进心肌组织中自噬和抑制NLRP3炎症小体激活有关。

甘草查尔酮B对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用及其机制

目的:探讨甘草查尔酮B(LCB)对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞的抑制作用及其机制。方法:常规培养MDA-MB-231细胞,用不同浓度LCB处理后,采用CCK-8法、免疫荧光法、FCM和WB法分别检测MDA-MB-231细胞的增殖活力、细胞核内DNA双链断裂标志物γ-H2AX的表达,以及细胞周期和周期调控、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、内质网应激信号途径相关蛋白的表达水平。结果:LCB能显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖活力(P<0.05),使γ-H2AX阳性细胞数和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)、G2/M和S期的细胞数量均明显增加(均P<0.05)、MAPK家族主要成员细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)和p38MAPK蛋白的磷酸化水平均显著上调(均P<0.05),还使内质网应激途径相关蛋白Bip、ATF4和CHOP的表达均显著上调(均P<0.05)。结论:LCB能够显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖活力、诱导DNA损伤和细胞周期阻滞于G2/M和S期,LCB对MDA-MB-231细胞的抑制作用可能与其激活MAPK和内质网应激信号通路相关。

甘草查尔酮胶囊质量标准研究

目的:建立甘草查尔酮胶囊的质量标准。方法:采用薄层色谱法对甘草查尔酮胶囊进行薄层鉴别;采用高效液相色谱法测定甘草查尔酮A的含量。色谱柱Waters XTerra RP C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-1%磷酸溶液(58∶42);体积流量1.0 mL/min;检测波长310 nm;柱温25℃。结果:甘草查尔酮胶囊薄层色谱图斑点清晰,阴性无干扰;甘草查尔酮A在0.05125~0.5125 mg内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为100.76%,RSD为1.62%(n=6)。结论:本研究建立的甘草查尔酮胶囊的薄层鉴别方法及甘草查尔酮A含量测定方法,增强了该制剂的可控性,为医院制剂或新药研发提供了理论数据。

甘草查尔酮A抑制ERK1/2/NF-κB途径减轻吸烟诱导的小鼠急性肺损伤

目的探讨甘草查尔酮A(LA)对吸烟诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用及相关机制。方法整体实验:香烟烟雾暴露构建小鼠急性肺损伤模型,取肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞计数,测定肺内角质形成细胞衍生趋化因子(KC)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素^(-1)β(IL^(-1)β)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA和蛋白表达水平,用试剂盒测定肺组织中过氧化物髓化酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及谷胱甘肽(GSH)水平。肺组织病理切片进行HE染色。离体实验:香烟烟雾提取物(CSE)诱导上皮细胞损伤,测定细胞内白介素-8(IL-8)、MMP-9 mRNA的表达。Western blot分析细胞外信号调节激酶l/2(ERK1/2)、p38分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平和转录因子NF-κB p65的活性。结果整体实验显示LA组肺内炎症细胞数量及浸润程度均明显低于模型组。模型组肺内KC、TNF-α、IL^(-1)β、MMP-9 mRNA和蛋白表达较正常对照组均明显升高,经LA处理后,上述指标相比模型组明显降低。与正常对照组相比,模型组肺内MPO活性明显上升,而SOD活性和GSH水平明显下降。LA能逆转这种变化,明显降低MPO活性,升高SOD活性和GSH水平。离体实验显示,LA(2.5、5μmol·L^(-1))能明显降低CSE刺激的细胞内IL-8和MMP-9 mRNA的高表达。CSE可以诱导细胞ERK1/2磷酸化和胞核内NF-κB p65的表达,经LA预处理后,上述指标可明显抑制。结论 LA可能通过阻断ERK1/2/NF-κB途径来抑制炎症介质的高表达、调节氧化/抗氧化失衡、下调金属蛋白酶,从而发挥对急性肺损伤小鼠的保护作用。