甘薯褪绿斑病毒山东分离物全基因组扩增及遗传进化分析

为了解甘薯褪绿斑病毒(sweet potato chlorotic fleck virus,SPCFV)在山东省的发生及遗传进化情况,分别于2019年和2020年采集了131份甘薯样品,针对SPCFV进行病毒检测、全基因序列扩增、序列分析及遗传进化树构建。结果显示:SPCFV两年的检出率分别为7.1%和5.6%,所有SPCFV感染样品中皆为SPCFV与其他病毒的复合侵染。通过RACE和RT-PCR获得CFV-SD1和CFV-SD2两个全基因组序列,全长均为9105 bp;与已报道分离物核苷酸序列一致性为72.9%~89.5%。全基因组遗传进化分析显示所有SPCFV分离物聚为两簇。且从不同样品中获得6个SPCFV山东分离物的外壳蛋白(coat protein,CP)序列,基于CP氨基酸序列开展遗传进化分析表明,山东分离物均归于亚洲类群的第一簇(Asian isolates 1)。氨基酸偏好性分析显示,CP氨基酸序列N端前35位同样存在多变区。本研究表明了山东省已成为SPCFV的常发区域,且病毒群体存在多样性,研究结果为指导SPCFV的有效防控提供了理论依据。

甘薯褪绿斑病毒外壳蛋白的分子变异及其特异抗血清制备

甘薯褪绿斑病毒（Sweetpotato chlorotic fleckvirus，SPCFV）是侵染甘薯的主要病毒之一。本研究利用RT—PCR方法克隆了SPCFV中国4个分离物的外壳蛋白（CP）基因。序列分析表明，印基因全长900bp，编码299个氨基酸残基。4个分离物印基因的核苷酸序列一致性为78．3％-89．9％，推导的氨基酸序列一致性为91．3％-95．7％，存在较大的分子变异。不同分离物cP氨基酸序列N末端的第3-32位氨基酸为多变区。将四川分离物的印基因克隆到原核表达载体pET-28a（＋）上，SDS-PAGE分析表明，经IPTG诱导，印基因在大肠杆菌BL21（DE3）中得到了高效表达。以表达的蛋白为抗原免疫家兔，制备了SPCFVCP的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明，制备的抗血清效价达1：128000，可用于田间甘薯样品的检测。