甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)在HeLa细胞的表达

目的构建甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)真核表达载体并表达MAp19。方法应用PCR技术扩增得到MAp19基因,利用基因克隆技术构建真核表达载体pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19,酶切及测序对其进行鉴定;将构建成功的重组载体通过脂质体转染He La细胞,并采用G418筛选已获得整合有pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察MAp19融合蛋白在He La细胞的定位;Western blot法检测MAp19融合蛋白的水平。结果构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19重组质粒,测序结果与NCBI数据库比对完全一致;采用G418筛选后获得表达外源性MAp19蛋白的He La细胞,该蛋白定位于细胞质中;Western blot结果确定MAp19为分泌性蛋白。结论 MAp19真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白。

血清甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19和三叶因子3及精子相关抗原9水平对宫颈癌患者术后2年复发的预测价值

目的观察宫颈癌患者血清甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(mannose-binding lectin associated protein 19,MAP19)、三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)、精子相关抗原9(sperm-associated antigen 9,SPAG9)表达情况,探讨其对宫颈癌患者术后2年复发的预测价值。方法120例行手术治疗的宫颈癌患者为宫颈癌组,120例低级别宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)患者为CIN组,120例子宫肌瘤或子宫腺肌症患者为对照组。采用ELISA法检测3组血清MAP19、TFF3、SPAG9水平并进行比较。宫颈癌患者术后随访2年,根据复发情况分为复发组40例和未复发组80例,比较2组淋巴结转移、FIGO分期等临床资料及血清MAP19、TFF3、SPAG9水平;采用多因素logistic回归分析宫颈癌患者术后2年复发的影响因素;绘制ROC曲线,评估血清MAP19、TFF3、SPAG9预测宫颈癌患者术后2年复发的效能。结果宫颈癌组血清MAP19[(266.07±80.27)μg/L]、TFF3[(407.27±91.45)μg/L]、SPAG9[(124.09±20.41)μg/L]水平均高于CIN组[(200.27±81.28)、(314.66±70.41)、(106.83±13.29)μg/L]、对照组[(130.25±48.27)、(218.61±50.83)、(3.21±1.07)μg/L](P<0.05),CIN组均高于对照组(P<0.05)。复发组有淋巴结转移(87.50%)、FIGO分期ⅡA期(47.50%)、肿瘤最大直径≥4cm(62.50%)比率及血清MAP19[(199.12±75.48)μg/L]、TFF3[(398.04±90.27)μg/L]、SPAG9[(131.73±19.93)μg/L]水平均高于未复发组[17.50%、15.00%、30.00%、(129.48±50.71)μg/L、(196.65±50.16)μg/L、(10.28±2.31)μg/L](P<0.05)。淋巴结转移(OR=3.054,95%CI:1.367~6.511,P<0.001)、FIGO分期(OR=2.136,95%CI:1.082~4.695,P<0.001)、肿瘤最大直径(OR=1.509,95%CI:1.204~3.165,P=0.020)及血清MAP19(OR=5.841,95%CI:4.749~10.231,P<0.001)、TFF3(OR=4.202,95%CI:2.540~6.394,P<0.001)、SPAG9(OR=4.183,95%CI:3.705~6.247,P<0.001)水平是宫颈癌患者术后2年复发的影响因素。血清MAP19、TFF3、SPAG9分别以189.05、311.25、107.40μg/L为最佳截断值,单独及联合预测宫颈癌患者术后2年复发的AUC分别为0.850(95%CI:0.713~0.935,P<0.001)、0.817(95%CI:0.750~0.916,P<0.001)、0.795(95%CI:0.694~0.910,P<0.001)、0.931(95%CI:0.840~0.958,P<0.001),灵敏度分别为95.1%、93.2%、89.3%、95.6%,特异度分别为74.0%、77.1%、76.8%、80.4%。结论有淋巴结转移、FIGO分期ⅡA期、肿瘤最大直径≥4cm及血清MAP19、TFF3、SPAG9水平升高的宫颈癌患者术后2年易复发,血清MAP19、TFF3、SPAG9联合预测宫颈癌患者术后2年复发有较高价值。

血清半乳糖缺陷型IgA1和甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3在IgA肾病发病机制中的研究进展

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病,是导致终末期肾病的常见原因。目前,肾活检仍然是其诊断和评估病情活动的金标准。已有研究显示半乳糖缺陷型IgA1(galactose-deficient IgA1,Gd-IgA1)的沉积在IgAN致病过程中发挥重要作用,GdIgA1的沉积会激活补体系统,包括替代途径、凝集素途经和经典途径,甘露糖结合凝集素是凝集素途径起始的关键因子,活化的甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(mannose binding lectin-associated serine protease,MASPs)是凝集素途径的关键酶,MASPs存在三种不同的亚型(MASP1、MASP2、MASP3),MASP3作为一种新型的MASP蛋白酶,成为近期研究热点,国内外多项研究表明MASP3能够激活D因子,参与替代途径,造成肾小球系膜细胞的损伤。因此Gd-IgA1的沉积与MASP3地出现在IgAN当中可能存在一些联系,有待于进一步的实验研究。本文旨在系统综述GdIgA1、MASP3在IgAN的发病机制中的作用,并探讨Gd-IgA1与MASP3之间的相关性。

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2基因的克隆与鉴定

目的 获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶－２（ＭＡＳＰ－２）编码区基因。方法采用 ＲＴ－巢式 ＰＣＲ技术从 人胎肝组织总ＲＮＡ扩增目的cＤＮＡ片段，克隆人ｐＧＥＭ－Ｔ载体，酶切图谱分析和测序鉴定。结果获得了编码合信号 顺序的ＭＡＳＰ－２肽链全长cＤＮＡ，将其与pＧＥＭ－Ｔ载体连接，转化大肠杆菌ＴＧ１，建立了ＭＡＳＰ－２的重组克隆。酶切图 谱与微机分析结果无异；序列分析表明，与报道的人 ＭＡＳＰ－２ｃＤＮＡ序列一致。结论成功克隆了人 ＭＡＳＰ－２基因，为深 入研究补体凝集素途径的激活机制和甘露聚糖结合凝集素基因突变引起免疫缺损的发病机制奠定了基础。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶

甘露聚糖结合凝集素 (MBL)是一种重要的天然免疫防御分子 ,通过激活MBL相关丝氨酸蛋白酶 (MASP)而启动补体激活凝集素途径来清除病原体。本文就MASP的基因。

2型糖尿病患者血浆甘露聚糖结合凝集素与血糖糖化血红蛋白的相关性分析

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血浆甘露聚糖结合凝集素(MBL)水平及其与血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)的关系。方法选取T2DM患者及健康人各60例,测定血浆MBL、空腹血糖(FPG)和HbA1c水平,观察MBL水平变化及与FPG、HbA1c的关系。结果 T2DM患者血浆MBL、FPG、HbA1c水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01);Pearson相关性分析显示,血浆MBL水平与HbA1c呈明显正相关(r=0.257,P=0.047)。结论 MBL在T2DM患者血浆中明显增高,可能参与了T2DM的发病过程,检测MBL对T2DM的诊断和预后具有潜在的临床价值。

肝细胞肝癌患者血浆中甘露聚糖结合凝集素和甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2的表达水平

目的检测肝细胞肝癌患者血浆中甘露糖结合凝集素(MBL)、MBL相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)的表达水平,探讨其与肝细胞肝癌发生发展的相关性。方法用酶联免疫吸附测定方法检测64例肝细胞肝癌患者及30例健康人血浆中MBL及MASP-2的表达水平,并用统计学方法分析患者血浆中MBL及MASP-2的浓度与各临床指标的相关性。结果肝细胞肝癌患者血浆中MBL和MASP-2的浓度均显著高于健康人群(P=0.014、0.002),MBL/MASP-2比值在健康人群与肝细胞肝癌患者中的差异无统计学意义,此外,患者血浆中MBL与MASP-2并无相关性。在肝细胞肝癌患者中,血浆MBL水平与肿瘤的血管侵犯(r=0.253,P=0.047)和总胆红素水平(r=0.283,P=0.024)呈正相关;血浆中MASP-2水平与肝细胞肝癌的TNM分期呈正相关(r=0.276,P=0.027),而与血浆白蛋白呈负相关(r=0.-0.317,P=0.015)。经ROC曲线分析,MBL和MASP-2曲线下面积分别为0.665(P=0.010)和0.694(P=0.003),对肝细胞肝癌诊断的敏感性分别为50%和89.1%。结论补体凝集素途径的关键分子MBL、MASP-2与肝细胞肝癌患者的炎症状态和疾病进展相关,参与了肝癌的发生与发展。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3的研究现状

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3(MASP3)是补体凝集素途径的酶成分之一,由MASP1/3基因编码。既往资料证实,MASP3不参与凝集素途径活化,对补体蛋白C3、C4以及C2均无酶切活性,而近期研究表明MASP3是参与补体D因子活化的关键酶,进而可能是联系补体凝集素途径和旁路途径活化的重要成分。此外,人们通过动物疾病模型研究发现MASP3可能作为补体旁路途径异常相关疾病的新治疗靶点,从而为相关疾病提供新的治疗思路。本文旨在对MASP3的编码基因、蛋白结构、生物学功能以及其在旁路途径功能异常相关疾病模型中的研究进展进行综述。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。

社区获得性肺炎中医证型与血清C-反应蛋白及甘露聚糖结合凝集素的研究

目的：研究社区获得性肺炎（CAP）中医证型血清C-反应蛋白（CRP）及甘露聚糖结合凝集素（MBL）的变化规律，探索中医辨证分型的客观指标。方法选择CAP患者104例，依据《社区获得性肺炎中医诊疗指南（2011版）》将CAP分为实证类（风热袭肺证、外寒内热证、痰热壅肺证、痰湿壅肺证）、正虚邪恋类（肺脾气虚证、气阴两虚证）、危重变证类（热陷心包证、邪陷正脱证）3类8个证候。以同期健康体检者100例为健康对照者。检测各受试者治疗前及治疗后4 d、7 d血清CRP及MBL水平。结果104例CAP患者中证型实证类居多（占63.5%），正虚邪恋类次之（占19.2%），危重变证类占17.3%。CAP各中医证型血清CRP水平高于健康对照者，且随时间变化及不同中医证型而存在差异。随治疗时间延长CAP各中医证型血清CRP水平均呈下降趋势，风热袭肺、外寒内热证型治疗后7 d已降至正常（mg/L：13.51±11.48、7.07±1.84比6.96±2.19，均P＞0.05）；肺脾气虚、气阴两虚证型血清CRP水平较高，但下降速度较快，治疗后7 d时接近正常，但仍高于健康对照组（25.25±25.90、18.17±23.19比6.96±2.19，均P＜0.05）；痰热壅肺、痰湿壅肺证型血清CRP水平虽有下降，治疗后7 d时仍保持较高水平（51.70±27.33、49.28±30.57）；热陷心包、邪陷正脱证型血清CRP水平无下降趋势。风热袭肺、外寒内热、痰热壅肺、痰湿壅肺、肺脾气虚及气阴两虚证型患者血清MBL水平高于健康对照者；热陷心包、邪陷正脱证型血清MBL水平低于其他证型，随治疗时间延长保持较低水平。结论血清CRP可作为判断CAP中医证型参考指标；低血清MBL提示CAP中医证型较重，预后不良。

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶与相关疾病最新研究进展

恶性肿瘤与自身免疫性疾病的发病率逐年增高,国内外学者的目光逐渐聚焦在天然免疫这一方面。补体系统则是天然免疫中的关键环节,其在疾病发生、发展过程中所起作用也越来越受到重视。补体是存在于人或动物血清中一组不耐热的且具有酶活性的蛋白质,并非单一分子,是由30多种蛋白成分组成的限制性蛋白酶解系统,又称为补体系统。广泛参与机体的多种免疫效应机制。补体需要被激活才能发挥其相应的生物学作用。

人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2C端基因的克隆与鉴定

目的:获得人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2(MASP-2)C端编码基因,并表达人MASP-2C端片段,为制备单克隆抗体及应用于临床相关疾病的检测奠定分子学基础。方法:采用RT-PCR技术从人胎肝组织总RNA中扩增人MASP-2C端的cDNA,克隆入pGEX-6p-2表达载体,酶切图谱分析和序列分析鉴定。结果:获得编码人MASP-2C端片段的cDNA,并且与pGEX-6p-2载体连接,转化大肠杆菌XL1-blue,成功构建人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆。重组质粒酶切图谱分析和DNA测序分析,人MASP-2C端片段cDNA的重组克隆与GenBank中人MASP-2C端的cDNA序列一致。结论:成功克隆了人MASP-2C端片段cDNA,并在大肠杆菌中表达人MASP-2C端多肽片段。

甘露聚糖结合凝集素基因多态性及血浆蛋白水平与儿童巨细胞病毒感染的相关性分析

人巨细胞病毒(HCMV)属于疱疹病毒家族,正常人感染HCMV后通常无明显症状,但是如果胎儿或婴幼儿等免疫功能低下人群感染HCMV会增加先天性畸形、黄疸、肝炎、肺炎、脑炎和紫癜的发生风险,严重影响儿童的正常生长发育。本研究选取我院收治的100例巨细胞病毒感染急性期患儿作为研究对象,探讨MBL基因多态性及血浆蛋白水平与儿童HCMV感染的相关性,现报道如下。

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2的研究进展

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)是补体凝集素途径关键酶,位于染色体1p36上,约20 kb,由686个氨基酸残基构成。通过病原相关分子模式识别病原体,与凝集素结合,以酶原形式存在的MASP-2活化,继而激活后续级联反应,致使入侵的病原体被机体清除破坏。MASP-2基因多态性普遍存在,过高或过低的MASP-2水平都不利于免疫系统正常运行,影响着多种疾病的易感性及发展进程。MASP-2血清浓度在不同疾病及同一疾病不同阶段的不尽相同。MASP-2与肿瘤、感染性疾病以及自身免疫性疾病的发生发展密切相关。

2型糖尿病患者甘露聚糖结合凝集素和补体C_3、C_4、备解素的表达及其意义

目的探讨2型糖尿病患者甘露聚糖结合凝集素(MBL)、C3、C4和备解素(Pf)水平的变化及意义。方法2型糖尿病患者40例,正常对照组24例。测定循环血清中MBL、C3、C4和Pf水平。同时测定糖脂代谢指标及尿微量白蛋白排泄率。结果2型糖尿病患者血清中MBL和Pf水平无明显变化,C3和C4水平增高。糖化血红蛋白和甘油三酯(TG)是MBL的独立预测因素,TG、体重指数(BM I)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)进入C3回归方程,TG是C4的独立预测因素。结论C3、C4水平与肥胖及脂肪代谢异常有关,MBL与2型糖尿病肾脏并发症无直接关系。

甘露糖结合凝集素在小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎发病中的机制研究

目的甘露糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)可与甘露糖相关丝氨酸蛋白酶(MBL-associated serineproteases,MASP)结合激活补体系统级联反应。文中检测葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导小鼠急性肠炎的血清MBL与MASP表达水平,以及在糖皮质激素治疗后两者的表达情况。方法将40只8周龄Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、治疗组和对照组,每组10只小鼠。自由饮用5%DSS溶液7 d,造成急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型。小鼠腹腔麻醉后取主动脉血,并立即分离血清,用ELISA方法检测其MBL与MASP的浓度。结果DSS诱导肠炎中MBL与MASP的表达明显高于正常组。用糖皮质激素治疗后MBL的水平明显下降,但MASP的水平变化无统计学意义。结论在5%DSS溶液诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎模型中,MBL与MASP相关信号通路的活化可能参与了UC的发病与进展。糖皮质激素抑制了MBL的产生,可能与其对UC的治疗有关,而与MASP无关。

甘露糖结合凝集素补体途径与糖尿病肾病的相关性的研究进展

糖尿病肾病是糖尿病最严重的微血管并发症,是终末期肾病的重要病因之一。甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)是糖尿病肾病发生发展重要的生物标志物,H型纤维胶原凝集素(H-ficolin)也与糖尿病肾病的发展有关,而MBL相关丝氨酸蛋白酶与糖尿病肾病的关系有待进一步研究。

甘露糖结合凝集素与炎性肠病相关性的研究进展

甘露糖结合凝集素(MBL)属于凝集素家族,是机体先天性免疫的重要成分,有激活补体系统、调理吞噬等作用,并与许多免疫相关性疾病有关。炎性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,目前普遍认为其发病机制与自身免疫损害密切相关。近年研究表明,MBL基因的多态性导致了其血清水平的个体差异,且与炎性肠病的发病率、临床症状、病程等具有相关性。文中综述了MBL及其与炎性肠病间相关性的研究进展。