哈白猪甘露聚糖结合凝集素-A基因的遗传特征分析

甘露聚糖结合凝集素作为机体重要的天然免疫因子，在机体的抗感染免疫中发挥第一线的作用。其在动物或者禽类血清中水平的高低代表着机体的抗病性，因此可以作为抗病育种的筛选指标之一。研究依据GenBank上发表的甘露聚糖结合凝集素-A的保守序列，设计合成1对引物，采用RT—PCR和TA克隆方法获得重组目的产物，经酶切、PCR扩增和测序鉴定为哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A序列。同源性比较结果表明：哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A与约克夏猪的核苷酸和氨基酸序列同源性最高，为99％；二者核苷酸有3个不同，但是氨基酸有1个差异，位于131位α螺旋颈区内；哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A与人类甘露聚糖结合凝集素-A的氨基酸同源性为60％，而与其他灵长类的氨基酸序列同源性在77％～81％之间，这些数据提示哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A的保守程度相对较高。

甘露聚糖结合凝集素-A在早期糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义

目的探讨甘露聚糖结合凝集素-A(mannose-binding lectin A,MBL-A)在早期糖尿病大鼠肾脏中表达的变化规律及其与糖尿病肾病发生发展的关系。方法将实验大鼠分为模型组和对照组。模型组采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,分别于造模成功后第2、4、6、8周,用免疫组织化学、TUNEL染色分析和计算机图像分析技术连续多时点观察肾脏MBL-A的表达变化和细胞凋亡情况,并分析两者之间的关系及其与肾脏病理变化指标的相关性。结果模型组第2、4、6、8周MBL-A蛋白表达均强于对照组,各时间点比较差异有统计学意义;模型组第4、6、8周肾小球细胞凋亡指数(AI)均高于对照组,各时点间差异有统计学意义。模型组MBL-A与尿蛋白、肾脏肥大指数(KI)呈正相关;肾小球细胞AI与尿蛋白、KI呈正相关;MBL-A与细胞AI呈正相关。结论 MBL-A在早期糖尿病大鼠肾脏中表达上调,以肾小球表达上调为主,并随病程延长逐渐增强,其表达变化与糖尿病肾脏病变相关。细胞凋亡也参与了糖尿病早期肾脏病变的变化,激活MBL,两者相互作用,从而促进糖尿病肾病的发展。

Balb/C小鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达

目的获取具有生物学活性的Balb/C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素(MBL-A)糖识别域(CRD)蛋白。方法应用PCR从含Balb/C小鼠MBL-A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白。表达产物(包涵体)经洗涤和复性处理后,利用GST柱纯化,以SDS-PAGE、Westernblotting和ELISA进行分析鉴定。结果从pmMBL-A中扩增到约450bp的DNA片段,构建重组载体pET41a-mMBL-A-CRD,经酶切和测序鉴定后,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约47000。包涵体经洗涤及复性处理,GST柱纯化后,融合蛋白的纯度达90%以上。Westernblotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应,糖结合试验表明表达产物具有生物学活性。结论成功获得了具有生物学活性的Balb/C小鼠MBL-ACRD蛋白,为MBL-A分子的研究奠定了一定基础。

血清干扰素γ诱导蛋白10和甘露糖结合凝集素在再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征患者中的含量及临床意义

目的探讨血清干扰素γ诱导蛋白10(IP10)和甘露糖结合凝集素(MBL)在再生障碍性贫血(AA)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的含量及临床意义。方法选取2019年1月至2021年6月在昆山市第三人民医院初诊的26例AA患者(AA组)和42例MDS患者(MDS组)作为观察组,另选取30名健康体检者作为对照组。检测并比较两组血清IP10和MBL水平,分析两组血清IP10与MBL的相关性,比较两组不同淋巴细胞亚群比例及CD4^(+)、CD8^(+)淋巴细胞比值。结果AA组和MDS组血清IP-10水平均高于对照组,血清MBL水平均低于对照组,且AA组血清IP-10水平高于MDS组,AA组血清MBL水平低于MDS组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson线性相关分析结果显示,两组血清IP-10与MBL均呈负相关性(r<0,P<0.05)。AA组外周血总CD3^(+)T淋巴细胞比例高于MDS组,差异有统计学意义(P<0.05);两组外周血CD3-CD16+/CD56+NK淋巴细胞比例和CD19+B淋巴细胞比例比较差异无统计学意义。AA组CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例高于MDS组,而CD4^(+)/CD8^(+)比值低于MDS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过检测患者血清IP-10和MBL水平,以及分析外周血T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比值,有助于为AA及MDS的发病机制、早期鉴别诊断等方面提供更有价值的信息。

甘露糖结合凝集素(MBL)基因遗传多态性及与奶牛乳腺炎抗病相关性研究

甘露糖结合凝集素是集合素蛋白家族的成员,是一种模式识别血清蛋白,可结合多种微生物并激活先天免疫的凝集素补体途径。牛乳腺炎是一种复杂的乳腺炎疾病,常由环境或传染性致病菌于乳房内感染引起,严重影响产奶效益和奶牛健康。该文着重揭示甘露糖结合凝集素基因多态性与奶牛乳腺炎的关系,阐述了国内外奶牛乳腺炎抗病育种相关研究进展。众多研究表明,甘露糖结合凝集素基因的多态性研究是未来探究改善奶牛乳腺炎抵抗性状的关键标记靶点,抗病基因在育种中的应用将是未来研究抗病性和免疫能力的主要方向。

甘露糖结合凝集素基因多态性血浆甘露糖结合凝集素浓度与儿童肺部感染的相关性分析

目的 探究甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)基因多态性及血浆MBL浓度与儿童肺部感染的关系。方法选取2018年7月—2021年7月民乐县妇幼保健院收治的1 67例社区获得性肺炎患儿为感染组,另选取同期90名健康体检儿童为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测受试者MBL第1外显子54密码子位点基因型,并检测血浆MBL及相关炎症因子[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、降钙素原(procalcitonin,PCT)]水平,采用临床肺部感染评分量表(clinical pulmonary infection scor,CPIS)评价肺部感染严重程度。结果感染组与对照组MBL 54密码子基因型分布、Hardy-Weiberg定律理论分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。感染组血浆MBL水平显著低于对照组,IL-6、TNF-α、PCT水平均显著高于对照组(P<0.05)。GGC/GAC型、GAC/GAC型患儿血浆MBL水平显著低于GGC/GGC型,IL-6、TNF-α、PCT水平均显著高于GGC/GGC型(P<0.05)。Pearson相关分析法显示,患儿血浆MBL与血浆IL-6、TNF-α、PCT表达及CPIS评分均呈负相关(r=0.392、0.31 5、0.446、0.297,P<0.05)。结论 MBL 54密码子GGC→GAC点突变及低血浆MBL水平可能与儿童肺部感染易感性及病情进展有关。

甘露聚糖结合凝集素对脂多糖诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应和胰岛素抵抗的调节作用及机制

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对脂多糖的诱导3T3-L1脂肪细胞炎症反应及胰岛素抵抗的调节作用及机制。方法:诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色分析细胞分化程度,使用CCK-8检测分化过程中MBL(1、10、20μg/ml)及LPS对细胞增殖能力的影响;ELISA检测细胞炎症因子IL-6、TNF-α含量,Western blot检测TNF-α、IL-6及TLR4/NF-κB信号通路中蛋白表达,并分析Akt、IRS-1 try蛋白磷酸化及GLUT4表达情况;流式细胞术检测MBL对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的调节作用。结果:油红O染色显示,12 d时,3T3-L1前体脂肪细胞已诱导为完全成熟的脂肪细胞;CCK-8结果证实,在细胞分化全过程,不同浓度的MBL (1、10、20μg/ml)及LPS对其增殖能力无明显影响;ELISA及Western blot结果显示在脂肪细胞分化至成熟过程中,MBL处理均可抑制LPS诱导的炎症因子分泌,且其抑制作用呈浓度依赖性;Western blot结果显示MBL以浓度依赖的方式抑制LPS诱导的IκB、IKK磷酸化和TLR4以及核NF-κB表达,且MBL可增强Akt和IRS-1磷酸化,增加GLUT4表达;流式细胞术结果显示MBL可以在一定程度上解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的抑制,并呈一定的浓度依赖性。结论:在脂肪细胞中,MBL通过TLR4/NF-κB信号通路抑制细胞炎症因子分泌,发挥抑炎作用;MBL通过抑制炎症因子分泌,解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖和IRS-1/Akt信号的抑制,减轻胰岛素抵抗。

鸡甘露聚糖结合凝集素基因的遗传特征分析

利用RT-PCR方法,从白色来航鸡肝脏中扩增出鸡MBLcDNA片段,将其克隆入pMD18-T载体并测序,对该基因结构进行分析并与哺乳动物MBL-A序列进行同源性比较。结果表明扩增得到的鸡MBL阅读框全长717bp,编码238个氨基酸残基,与Genbank发表的结果一致。氨基酸比较发现,鸡MBL进化趋势独特,与哺乳动物相差较大。本研究为进一步分析鸡MBL的遗传特征,研究其在抗感染中的作用提供了基础依据。

甘露聚糖结合凝集素诱导DC成熟机制分析

目的:探讨甘露聚糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)诱导人外周血单核细胞(Mo)来源树突状细胞(DC)成熟的机制。方法:从健康成人外周血分离Mo,常规方法体外诱导未成熟DC(imDC),FACS分析DC成熟过程中MBL对CD分子表达的影响,进一步分析MBL与imDC的结合情况;RT-PCR分析DC表面模式识别分子Toll样受体-2(TLR2)和Toll样受体-4(TLR4)的表达;凝胶电泳迁移率法(EMSA)和Western blot分析NF-κB的活性及细胞核移位。结果:FCM分析表明,MBL能够使DC表面CD83、CD86及MHC分子表达升高;MBL能够以Ca2+浓度依赖关系与imDC细胞结合;RT-PCR结果表明MBL能够减少DC表面TLR2和TLR4的表达。EMSA和Western blot分析结果显示,MBL能够增强NF-κB活性及细胞核移位。结论:MBL可通过直接结合imDC表面分子来影响DC模式识别分子的表达并调节信号分子NF-κB活性,提示MBL能够通过配体结合调控DC分化成熟,揭示了MBL调节DC分化成熟有关信号途径。

抗人甘露聚糖结合凝集素单抗的制备、鉴定及应用

目的 制备抗人甘露聚糖结合凝集素单克隆抗体及建立应用方法。方法 用亲和层析法自人血清中提取甘露聚糖结合凝集素 (MBL) ,免疫Balb/c小鼠 ,通过细胞融合的方法 ,得到 3株稳定分泌抗人MBL单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株。建立检测MBL的ELISA。结果 本组mAb识别相对分子质量 (Mr)为 310 0 0的MBL分子 ,与MBL作用后可明显抑制MBL 甘露聚糖复合物的抗补体效应。用ELISA检测 186例健康人血清中MBL水平为 2 6 9± 1 5 8mg/L。结论 成功地获得了抗MBL的mAb并用于建立ELISA。

2型糖尿病患者甘露聚糖结合凝集素和补体C_3、C_4、备解素的表达及其意义

目的探讨2型糖尿病患者甘露聚糖结合凝集素(MBL)、C3、C4和备解素(Pf)水平的变化及意义。方法2型糖尿病患者40例,正常对照组24例。测定循环血清中MBL、C3、C4和Pf水平。同时测定糖脂代谢指标及尿微量白蛋白排泄率。结果2型糖尿病患者血清中MBL和Pf水平无明显变化,C3和C4水平增高。糖化血红蛋白和甘油三酯(TG)是MBL的独立预测因素,TG、体重指数(BM I)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)进入C3回归方程,TG是C4的独立预测因素。结论C3、C4水平与肥胖及脂肪代谢异常有关,MBL与2型糖尿病肾脏并发症无直接关系。

社区获得性肺炎中医证型与血清C-反应蛋白及甘露聚糖结合凝集素的研究

目的：研究社区获得性肺炎（CAP）中医证型血清C-反应蛋白（CRP）及甘露聚糖结合凝集素（MBL）的变化规律，探索中医辨证分型的客观指标。方法选择CAP患者104例，依据《社区获得性肺炎中医诊疗指南（2011版）》将CAP分为实证类（风热袭肺证、外寒内热证、痰热壅肺证、痰湿壅肺证）、正虚邪恋类（肺脾气虚证、气阴两虚证）、危重变证类（热陷心包证、邪陷正脱证）3类8个证候。以同期健康体检者100例为健康对照者。检测各受试者治疗前及治疗后4 d、7 d血清CRP及MBL水平。结果104例CAP患者中证型实证类居多（占63.5%），正虚邪恋类次之（占19.2%），危重变证类占17.3%。CAP各中医证型血清CRP水平高于健康对照者，且随时间变化及不同中医证型而存在差异。随治疗时间延长CAP各中医证型血清CRP水平均呈下降趋势，风热袭肺、外寒内热证型治疗后7 d已降至正常（mg/L：13.51±11.48、7.07±1.84比6.96±2.19，均P＞0.05）；肺脾气虚、气阴两虚证型血清CRP水平较高，但下降速度较快，治疗后7 d时接近正常，但仍高于健康对照组（25.25±25.90、18.17±23.19比6.96±2.19，均P＜0.05）；痰热壅肺、痰湿壅肺证型血清CRP水平虽有下降，治疗后7 d时仍保持较高水平（51.70±27.33、49.28±30.57）；热陷心包、邪陷正脱证型血清CRP水平无下降趋势。风热袭肺、外寒内热、痰热壅肺、痰湿壅肺、肺脾气虚及气阴两虚证型患者血清MBL水平高于健康对照者；热陷心包、邪陷正脱证型血清MBL水平低于其他证型，随治疗时间延长保持较低水平。结论血清CRP可作为判断CAP中医证型参考指标；低血清MBL提示CAP中医证型较重，预后不良。

CGT52TGT和GGA57GAA甘露聚糖结合凝集素突变体的构建

目的 构建CCT52TGT和GGA57GAA 2种甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因突变体。方法 设计2对引物52F/52R和57F/57R(R中引入了点突变),以含汉族人野生型MBL cDNA的重组质粒pGEM-mbl为模板,采用TaKaRa MutanBEST突变试剂盒进行定点突变,以PCR和测序分析进行鉴定。结果 分别用52F/52R和57F/57R为引物对进行PCR,均得到1个约3800 bp的DNA片段,自身连接后获得重组质粒。以SP6/T7P为引物对进行PCR,获得约900 bp的扩增产物。序列分析表明,2种克隆分别除其第52、57位密码变为TGT、GAA外,其余与野生型MBL cDNA完全相同。结论 构建成功CGT52TGT和GGA57GAA MBL基因突变体,为深入探索MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机理和MBL分子的结构-功能关系提供了分子模型。

甘露糖结合凝集素在小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎发病中的机制研究

目的甘露糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)可与甘露糖相关丝氨酸蛋白酶(MBL-associated serineproteases,MASP)结合激活补体系统级联反应。文中检测葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导小鼠急性肠炎的血清MBL与MASP表达水平,以及在糖皮质激素治疗后两者的表达情况。方法将40只8周龄Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、治疗组和对照组,每组10只小鼠。自由饮用5%DSS溶液7 d,造成急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型。小鼠腹腔麻醉后取主动脉血,并立即分离血清,用ELISA方法检测其MBL与MASP的浓度。结果DSS诱导肠炎中MBL与MASP的表达明显高于正常组。用糖皮质激素治疗后MBL的水平明显下降,但MASP的水平变化无统计学意义。结论在5%DSS溶液诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎模型中,MBL与MASP相关信号通路的活化可能参与了UC的发病与进展。糖皮质激素抑制了MBL的产生,可能与其对UC的治疗有关,而与MASP无关。

重组人甘露聚糖结合凝集素三肽链亚单位的制备及其活性分析

目的制备具有生物学活性的重组人甘露聚糖结合凝集素三肽链亚单位(trhMBL)。方法我们先前已构建了N端缺失的重组人甘露聚糖结合凝集素(rhMBL△N)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达rhMBL△N融合蛋白。本实验利用胶原蛋白的3条肽链依其自身性质而相互缠绕成三股螺旋、装配成三级结构的原理,首先以凝血酶酶切rhMBL融合蛋白,将获得的单链rhMBL蛋白在50 mmol/LPBS(pH7.2)和ddH_2O中交替反复透析使之自动装配成trhMBL,最后以配体结合试验和C4d沉淀试验对终产物trhMBL进行生物学活性分析。结果 rhMBL融合蛋白经凝血酶酶切,获得相对分子质量约20 000的rhMBL单链蛋白;将其反复透析后得到相对分子质量约50 000的rhMBL三肽链亚单位trhMBL;活性分析表明,该MBL亚单位的配体结合活性比rhMBL△N肽链高,并获得了激活补体凝集素途径的活性,但这些活性比天然MBL低。结论成功获得了具有生物学活性的重组人-MBL三肽链亚单位;这种三肽链组织形式不仅是MBL的结构亚单位,而且是其功能亚单位。

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。

甘露聚糖结合凝集素与临床疾病的研究进展

甘露聚糖结合凝集素(MBL)是天然免疫补体系统中的一员,主要由肝细胞合成,作为急性期反应蛋白分泌入血清。血清MBL的水平主要由MBL2基因启动子区及外显子1区的基因多态性决定。MBL可选择性的与病原微生物(如G+/G-细菌、病毒、真菌、原生物等)、坏死损伤细胞、凋亡细胞以及肿瘤细胞等表面的相应配体结合,通过激活补体系统、调理吞噬、调节炎症反应等保护人体。血清MBL的水平对人体影响较大:当血清MBL缺乏时,机体易患某些疾病,如感染性疾病、自身免疫性疾病;但如果血清MBL水平过高,又会对自身组织造成损伤,如在心肌梗死及器官移植中,引起机体的缺血再灌注损伤;此外,MBL基因型及血清MBL水平与肿瘤的易感性可能也存在一定关系。

甘露聚糖结合凝集素与儿童常见病原菌的结合活性研究

目的从人血清中分离纯化甘露聚糖凝集素(MBL),并鉴定其与儿童感染性疾病中常见细菌的结合活性。方法用甘露聚糖-Sepharose4B亲和柱进行亲和层析,从人血清中分离纯化出MBL分子,用酶联凝集试验(ELLA)鉴定其与8个菌种97株不同细菌的结合活性。结果MBL对不同的细菌有不同的结合力,对解鸟氨酸克雷伯菌、大肠埃希菌有很强的结合力;对溶血性葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌的结合力相对较弱;对肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌的不同菌株结合力差异较大。结论MBL对不同的细菌有不同的结合力,对革兰阴性菌的结合力相对较阳性菌强,对某些细菌的不同菌株结合力差异较大。

重庆地区人群血清甘露聚糖结合凝集素水平测定及意义

目的建立重庆地区人群血清甘露聚糖凝集素水平正常值参考范围。方法用ELISA方法检测重庆地区91例新生婴儿脐血MBL水平,274例学龄前儿童、87例成人血清MBL水平,比较各年龄组及不同地区人群血清MBL水平。结果新生儿脐血MBL水平(1.71±1.60)μg/ml,成人外周血(3.09±1.58)μg/ml,两组比较呈显著性差异(P<0.005),学龄前各年龄组MBL水平分别为(3.16±2.00)μg/ml、(3.19±1.88)μg/ml、(3.30±2.05)μg/ml、(3.69±2.22)μg/ml、(3.02±1.38)μg/ml与新生儿比较明显增高(P<0.005),但学龄前期各组间比较无显著性差异(P>0.05),与香港地区足月儿比较无显著性差异(P>0.05),成人血清MBL水平比较有明显增高(P<0.05)。结论新生儿期MBL水平明显低于学龄前各年龄组儿童,学龄前儿童组间比较没有显著差异,重庆成人MBL水平高于香港成人。

复发性流产血清中甘露聚糖结合凝集素表达水平及其临床意义

目的探讨复发性流产患者血清中甘露聚糖结合凝集素(MBL)表达水平及其检测的应用价值。方法选取40例复发性流产的患者、40例健康体检者、40例正常早孕、中孕、晚孕者为研究对象,ELISA法检测血清中MBL水平。将复发性流产患者分为治疗组和对照组,对照组采用小剂量阿司匹林治疗,治疗组在对照组的基础上采用低分子肝素治疗,比较两组患者治疗后血清中MBL水平。结果复发性流产患者、健康体检者、正常早孕、中孕、晚孕者的血清中MBL水平为(1.39±0.62)mg/L、(2.02±0.88)mg/L、(2.45±0.78)mg/L、(2.76±1.21)mg/L和(3.19±1.23)mg/L。随着孕期的延长,MBL的水平有逐渐升高的趋势。复发性流产患者的MBL水平降低,显著低于体检者和正常怀孕者。经治疗后,复发性流产患者的MBL显著高于治疗前。结论复发性流产患者血清MBL水平表达较低,可能与血清MBL水平缺陷导致病原体易感性增加有关。