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1-磷酸甘露醇脱氢酶基因转化水稻的研究 被引量:16
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作者 王慧中 刘俊君 +6 位作者 卢德赵 赵艳 颜美仙 钱前 彭学贤 陈受宜 黄大年 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期6-10,共5页
PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的... PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的相对电导率和大分子渗漏值明显降低。部分转基因株系能在 1 .0 % Na Cl浓度下正常生长 ,而对照在 0 .5% Na Cl浓度下已不能存活。通过有性杂交途径实现了 mtl D和 gut D两个基因的聚合 ,部分杂交后代株系能在 1 .2 5% Na Cl胁迫下正常生长结实。 展开更多
关键词 水稻 1-磷酸甘露醇脱氢酶基因 6-磷酸山梨基因 转基因植株 耐盐性 产量性性 有性杂交 农艺性状
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乳酸细菌甘露醇脱氢酶研究进展 被引量:2
2
作者 林谦 《科技传播》 2010年第19期104-105,共2页
由于在医药、食品、化工行业中的需求不断增长,甘露醇的生产制备受到国内外的重视。乳酸细菌生产甘露醇具有反应选择性高、反应条件温和,甘露醇收率高等优点,是甘露醇生产研究的热点。乳酸细菌甘露醇脱氢酶是异型发酵乳酸细菌合成甘露... 由于在医药、食品、化工行业中的需求不断增长,甘露醇的生产制备受到国内外的重视。乳酸细菌生产甘露醇具有反应选择性高、反应条件温和,甘露醇收率高等优点,是甘露醇生产研究的热点。乳酸细菌甘露醇脱氢酶是异型发酵乳酸细菌合成甘露醇的关键酶。本文综述了乳酸细菌甘露醇脱氢酶的研究概况,包括酶学特性、结构及分子生物学,并对其研究前景进行了展望。 展开更多
关键词 甘露醇脱氢酶 甘露 乳酸细菌
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假肠膜明串珠菌甘露醇脱氢酶基因的克隆及表达 被引量:2
3
作者 程雅韵 王新 +3 位作者 郑琳 李官浩 崔虎山 金清 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第13期153-156,共4页
利用聚合酶链式反应从假肠膜明串珠菌中扩增出甘露醇脱氢酶(mannitol dehydrogenase,MDA)基因的结构基因,克隆入表达载体p ETDuet-1,构建了甘露醇脱氢酶表达质粒p ETDuet-1-mdh,将其转化进入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳... 利用聚合酶链式反应从假肠膜明串珠菌中扩增出甘露醇脱氢酶(mannitol dehydrogenase,MDA)基因的结构基因,克隆入表达载体p ETDuet-1,构建了甘露醇脱氢酶表达质粒p ETDuet-1-mdh,将其转化进入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达。假肠膜明串珠菌甘露醇脱氢酶结构基因长度为1 017 bp,重组甘露醇脱氢酶基因在大肠杆菌内成功表达,其蛋白质分子质量为36.0 k D;重组甘露醇脱氢酶活力为0.15 U/mg pro,高于假肠膜明串珠菌中甘露醇脱氢酶活力0.03 U/mg pro。 展开更多
关键词 甘露 甘露醇脱氢酶 假肠膜明串珠菌 基因克隆 表达
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NADPH依赖的甘露醇脱氢酶的重组表达及甘露醇的转化条件 被引量:3
4
作者 封志媚 赵雅童 +2 位作者 刘业学 路福平 李玉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期186-191,共6页
对NADPH依赖的甘露醇脱氢酶的异源表达和对果糖的转化情况进行分析,为在细胞内构建甘露醇的合成途径奠定基础。构建重组菌株BL21(DE3)/p ET28a-mdh,对其进行诱导发酵后,通过His标签对目的蛋白进行纯化,并利用HPLC分析纯化后的甘露醇脱... 对NADPH依赖的甘露醇脱氢酶的异源表达和对果糖的转化情况进行分析,为在细胞内构建甘露醇的合成途径奠定基础。构建重组菌株BL21(DE3)/p ET28a-mdh,对其进行诱导发酵后,通过His标签对目的蛋白进行纯化,并利用HPLC分析纯化后的甘露醇脱氢酶转化果糖生成甘露醇的情况。成功构建了NADPH依赖的甘露醇脱氢酶重组表达菌株BL21(DE3)/p ET28amdh,并对表达后的甘露醇脱氢酶进行了纯化,测得纯化后的甘露醇脱氢酶酶活力为270 U/m L。对酶法转化果糖得到甘露醇的转化条件进行优化,确定最佳的转化条件为:当底物浓度为300 g/L,反应初始p H5.8,温度40℃,NADPH终浓度为9 mmol/L时,甘露醇转化率可以达到97.4%。实现了NADPH依赖的甘露醇脱氢酶在大肠杆菌中的活性表达,为进一步研究大肠杆菌合成甘露醇的代谢调控提供了依据。 展开更多
关键词 甘露醇脱氢酶 NADPH 甘露 大肠杆菌 纯化
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来源于P.bacterium 1109的甘露醇脱氢酶的重组纯化及酶学性质研究 被引量:2
5
作者 逯付之 徐炜 +3 位作者 吴昊 张文立 光翠娥 沐万孟 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第19期137-143,165,共8页
本文将来自P.bacterium 1109的甘露糖醇脱氢酶(MDH)表达并提取纯化,研究了该重组酶的酶学性质及其在甘露醇生产中的工艺条件。结果显示重组MDH是一个相对分子量为37 kDa的四聚体。氨基酸序列比对发现其与大多数MDHs的同源性小于40%。该... 本文将来自P.bacterium 1109的甘露糖醇脱氢酶(MDH)表达并提取纯化,研究了该重组酶的酶学性质及其在甘露醇生产中的工艺条件。结果显示重组MDH是一个相对分子量为37 kDa的四聚体。氨基酸序列比对发现其与大多数MDHs的同源性小于40%。该酶的最适pH和温度分别为8.5和80℃,且当金属离子Zn^(2+)存在时,重组MDH的活力提高到对照组的260%。此外,重组MDH在75℃孵育6 h后仍可保留超过85%的残留活性,热稳定性较高,比大多数MDHs的活性高。底物特异性研究表明其对D-果糖具有较高的专一性。重组MDH催化D-果糖的米氏常数(K_m)和催化效率(k_(cat)/K_m)分别为20 mmol/L和7.5 L/(mmol·min)。重组MDH在以400 mmol/L的D-果糖为底物的反应系统中,可将80%以上的D-果糖转化为甘露糖醇。通过对反应条件的优化,为后续工业化生产制备甘露醇奠定了基础。 展开更多
关键词 甘露 甘露醇脱氢酶(MDH) P.bacterium 1109 热稳定性 大肠杆菌BL21(DE3)
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芹菜甘露醇脱氢酶基因的分离与表达分析 被引量:6
6
作者 谭国飞 王枫 +2 位作者 贾晓玲 李岩 熊爱生 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2189-2198,共10页
以芹菜(Apium graveolens L.)本芹品种‘六合黄心芹’和西芹品种‘文图拉’为研究对象,通过克隆测序,分别获得2种芹菜的甘露醇脱氢酶基因序列。2种芹菜来源的该基因全长均为1 098 bp,编码365个氨基酸,预测2种芹菜该酶蛋白质分子量分别为... 以芹菜(Apium graveolens L.)本芹品种‘六合黄心芹’和西芹品种‘文图拉’为研究对象,通过克隆测序,分别获得2种芹菜的甘露醇脱氢酶基因序列。2种芹菜来源的该基因全长均为1 098 bp,编码365个氨基酸,预测2种芹菜该酶蛋白质分子量分别为39.66 kD和39.69 kD,pI值分别为6.79和6.78。2种芹菜中甘露醇脱氢酶基因之间有17个核苷酸位点不同,3个氨基酸位点发生改变。通过与其他植物甘露醇脱氢酶基因与氨基酸序列比对,表明该基因具有高度的保守性。进化分析显示,与同属于伞形科的植物香芹进化关系最近。实时定量PCR表明,芹菜中甘露醇脱氢酶基因在根、茎、叶、花中表达有差异,其中根中含量最高。对2种芹菜分别进行4℃、38℃、0.2 mol·L-1NaCl和20%PEG处理7个不同时间段,实时定量表达分析显示,‘六合黄心芹’中甘露醇脱氢酶基因变化大于西芹‘文图拉’,且不同处理后甘露醇脱氢酶基因表达响应呈现出较大的差异。 展开更多
关键词 芹菜 甘露醇脱氢酶 基因克隆 非生物胁迫 表达
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柠檬明串珠菌甘露醇脱氢酶特性研究 被引量:1
7
作者 王新 白琴琴 +2 位作者 李志华 李冬梅 金清 《食品工业》 CAS 北大核心 2014年第10期174-176,共3页
甘露醇在食品、医药和化工等行业有着广泛应用,柠檬明串珠菌发酵过程中在甘露醇脱氢酶催化下将果糖转化为甘露醇,是生产甘露醇的重要菌种。以柠檬明串株菌J17和E28为试验菌种,分别采用分光光度法和TLC薄层层析法检测粗酶液的活性和甘露... 甘露醇在食品、医药和化工等行业有着广泛应用,柠檬明串珠菌发酵过程中在甘露醇脱氢酶催化下将果糖转化为甘露醇,是生产甘露醇的重要菌种。以柠檬明串株菌J17和E28为试验菌种,分别采用分光光度法和TLC薄层层析法检测粗酶液的活性和甘露醇生成量。结果表明,J17所产甘露醇脱氢酶在发酵时间为12 h、温度为33℃、pH为6.0时活性最高,为0.11 U/mL。E28在发酵时间为16 h、温度为33℃、pH为6.5时,甘露醇脱氢酶活性最高,为0.12 U/mL。以甘露醇标准样作为对照,产生的甘露醇最大量接近1%。 展开更多
关键词 柠檬明串珠菌 甘露醇脱氢酶 发酵 甘露
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假单胞菌(Pseudomonas sp. cn 4902)甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因克隆及表达 被引量:4
8
作者 刘广发 谭静 +3 位作者 陈启伟 刘广发 谭静 陈启伟 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期183-188,共6页
参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究... 参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究。结果表明 ,克隆获得一长为 114 9bp的基因。经蛋白质保守区域研究 ,初步判别该基因为mtlD结构基因。将该基因与pBV2 2 0质粒构建成高效表达原核重组载体pBH。SDS PAGE电泳表明 ,含pBH的转化子产生特异的、分子量约为 4 1kD的蛋白带 ,表达量约占菌体可溶性蛋白 6 7%。转化子的耐盐水平比对照提高了约 1/5。在含 0 9mol/LNaCl的液体培养基中 ,转化子培养 2 4h后其生物量约是对照的 10 2倍 ,甘露醇含量约是对照的 4 1倍。可见 ,假单胞菌的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因是一个重要的耐盐相关基因 ,该基因已在GenBank登记 ,代号为AY112 6 96。 展开更多
关键词 假单胞菌 甘露-1-磷酸 基因 克隆
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大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达
9
作者 谢启鑫 庄东红 +3 位作者 欧阳永长 胡忠 钟名其 彭桂庄 《江西农业学报》 CAS 2007年第10期5-8,15,共5页
以大肠杆菌(Escherichia coli)W3350菌株总DNA为模板,根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase)基因(mtlD)序列设计引物,通过PCR扩增到1条长约1.15 kb的特异片断,把该片断连接到pUCm-T载体上进... 以大肠杆菌(Escherichia coli)W3350菌株总DNA为模板,根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase)基因(mtlD)序列设计引物,通过PCR扩增到1条长约1.15 kb的特异片断,把该片断连接到pUCm-T载体上进行测序。序列分析结果表明,该基因编码区全长1149 bp,共编码382个氨基酸,与报道的mtlD基因修正序列完全一致。将该基因插入到原核表达载体pET28a(+),IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,发现在约45 kD处明显比对照多出1条带,凝胶扫描后经Bandscan 5.0软件分析表明,该特异条带的蛋白含量占菌体可溶性总蛋白的72.9%。Western blot检测其为带组氨酸标签的融合蛋白,而质谱分析证实其为甘露醇-1-磷酸脱氢酶。转化子的耐盐能力比对照提高了约20%。该基因提交到GeneBank数据库,返回的接受号为DQ660889。 展开更多
关键词 大肠杆菌 W3350菌株 甘露-1-磷酸 基因克隆 原核表达
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大肠杆菌Top10甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因克隆及生物信息学分析
10
作者 麻鹏达 张晓英 +1 位作者 李海云 马瑞 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第5期981-986,共6页
根据细菌中存在的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase,mtlD)的基因序列,采用PCR扩增的方法从大肠杆菌(Escherichia coli)Top10中克隆到了mtlD基因(Acession numeber:EU433565)。mtlD开放阅读框为1149bp,编码含有38... 根据细菌中存在的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase,mtlD)的基因序列,采用PCR扩增的方法从大肠杆菌(Escherichia coli)Top10中克隆到了mtlD基因(Acession numeber:EU433565)。mtlD开放阅读框为1149bp,编码含有382个氨基酸残基,分子量为41.2kD的蛋白,预测等电点为5.37。mtlD含有38个碱性氨基酸,50个酸性氨基酸,158个疏水氨基酸及72个极性氨基酸。二级结构预测表明该蛋白含约60.47%的α-螺旋、4.71%的β-转角、10.73%的延伸链和20.48%的不规则卷曲。亲疏水性分析显示,mtlD是亲水性蛋白。亚细胞定位分析表明mtlD主要定位于细胞质中。序列分析表明大肠杆菌Top10mtlD基因与大肠杆菌W3350、大肠杆菌DEC12a和盐生盐杆菌(Halobacterium salinarum)的mtlD基因同源性分别为99%、97%和93%。大肠杆菌Top10mtlD基因的克隆及生物信息学分析为今后对mtlD的进一步深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌Top10 甘露-1-磷酸基因 基因克隆 生物信息学分析
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球孢白僵菌甘露醇1-磷酸脱氢酶cDNA克隆及生物信息学分析 被引量:1
11
作者 李凯月 郑长英 +1 位作者 燕霞飞 王俊平 《山东农业科学》 2017年第10期10-14,共5页
本研究利用RT-PCR技术克隆获得了球孢白僵菌(Beauveria bassiana)甘露醇1-磷酸脱氢酶(Bb MPD)基因的cDNA序列,并对其氨基酸序列进行生物信息学分析,明确其蛋白典型特征。结果显示,Bb MPD基因cDNA序列长1 176 bp,编码391个氨基酸,分子量... 本研究利用RT-PCR技术克隆获得了球孢白僵菌(Beauveria bassiana)甘露醇1-磷酸脱氢酶(Bb MPD)基因的cDNA序列,并对其氨基酸序列进行生物信息学分析,明确其蛋白典型特征。结果显示,Bb MPD基因cDNA序列长1 176 bp,编码391个氨基酸,分子量约为42.9 k D,理论等电点为5.09;不具有信号肽,属于非分泌蛋白;无跨膜结构,是亲水性蛋白;亚细胞定位预测显示Bb MPD蛋白主要位于细胞质;具有典型的甘露醇1-磷酸脱氢酶保守结构域;α螺旋和无规则卷曲是Bb MPD蛋白主要的二级结构。该结果为进一步研究Bb MPD基因及其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 球孢白僵菌 甘露1-磷酸 基因克隆 生物信息学分析
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甘露醇磷酸化酶基因的敲除对D-甘露醇合成的影响 被引量:3
12
作者 赵雅童 何光明 +3 位作者 瓮茹茹 石爱琴 路福平 李玉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期118-124,共7页
为了探究甘露醇分解利用途径对甘露醇合成的影响,在重组菌株R1(K-12/pTrc99a-mdh)的基础上,通过CRISPR/Cas9 敲除E.coli PTS 系统中的cmtA、cmtB、mtlA 基因,阻断了E. coli K-12 中甘露醇的分解途径,获得了重组菌株R3(K-12/ΔcmtAΔcmtB... 为了探究甘露醇分解利用途径对甘露醇合成的影响,在重组菌株R1(K-12/pTrc99a-mdh)的基础上,通过CRISPR/Cas9 敲除E.coli PTS 系统中的cmtA、cmtB、mtlA 基因,阻断了E. coli K-12 中甘露醇的分解途径,获得了重组菌株R3(K-12/ΔcmtAΔcmtBmdh^+)和R5(K-12/ΔcmtAΔcmtBΔmtlAmdh^+)。与出发菌株R1 相比,R3 的生长速率没有降低,而R5 的生长速率明显下降。并且R5 在以甘露醇为唯一碳源的培养基上已无法生长,说明cmtA、cmtB、mtlA 三个基因全部敲除后,菌株已无法再利用甘露醇作为碳源进行生长。最后,构建的重组菌株R5,测得MDH 酶活力为258 U/mL,用高效液相色谱对胞外产物进行检测,可检测到少量的甘露醇,为进一步探究大肠杆菌合成甘露醇的调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 基因敲除 甘露 甘露醇脱氢酶 NADH
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在明串珠菌中构建葡萄糖到甘露醇的转化体系 被引量:1
13
作者 金红星 王星 彭钰玮 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期96-100,108,共6页
为了进一步提高甘露醇产量,在明串珠菌构建了葡萄糖到甘露醇的转化体系。通过2次同源重组,将mt1d-m1p表达盒串联体定点插入到染色体上。以90g/L蔗糖为底物时,野生型菌株的甘露醇产量为31.48g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)为42.63g/L,Δaldh::(m... 为了进一步提高甘露醇产量,在明串珠菌构建了葡萄糖到甘露醇的转化体系。通过2次同源重组,将mt1d-m1p表达盒串联体定点插入到染色体上。以90g/L蔗糖为底物时,野生型菌株的甘露醇产量为31.48g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)为42.63g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)Δdts::amy为43.47g/L,Δaldh::(mt1d-m1p)Δdts::(mt1d-m1p)为45.74g/L,Δdts1ΔD-ldhΔpat::mdhΔstpk::mdhΔfk::mdhΔaldh::(mt1d-m1p)为47.26g/L。增加甘露醇的合成途径是增产的手段之一。 展开更多
关键词 甘露 明串珠菌 葡萄糖 甘露-1-磷酸 甘露-1-磷酸
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霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD的克隆表达
14
作者 梁未丽 陈保立 +2 位作者 赵萌 周妍妍 阚飙 《疾病监测》 CAS 2014年第3期219-222,共4页
目的克隆表达霍乱弧菌甘露醇特异性磷酸烯醇式丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统操纵子中的甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD。方法以测序株N16961染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增mtlD基因,扩增产物经NdeⅠ和XhoⅠ... 目的克隆表达霍乱弧菌甘露醇特异性磷酸烯醇式丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统操纵子中的甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD。方法以测序株N16961染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增mtlD基因,扩增产物经NdeⅠ和XhoⅠ酶切后克隆入表达载体pET-30a。0.1 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解上清经Ni柱亲和层析纯化,比色法测定酶活性。结果 mtlD基因成功克隆入表达载体pET-30a,在宿主菌BL21中诱导表达,利用Ni亲和层析柱获得较高纯度的羧基端带His标签的MtlD蛋白,并具有酶活性。结论表达纯化了有活性的霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶,为进一步的功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 甘露-1-磷酸 mtlD
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基于双酶级联协调表达策略高效催化合成D-甘露醇 被引量:7
15
作者 潘珊 胡孟凯 +4 位作者 潘学玮 吕青兰 朱荣帅 张显 饶志明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期2549-2565,共17页
D-甘露醇(D-mannitol)作为合成抗肿瘤药和免疫刺激剂的重要前体被广泛应用于制药和医疗等行业,酶法合成D-甘露醇反应成本昂贵无法满足工业化生产。本研究首先筛选关键酶获得较优性能的甘露醇脱氢酶Lp MDH和用于辅因子NADH再生的葡萄糖... D-甘露醇(D-mannitol)作为合成抗肿瘤药和免疫刺激剂的重要前体被广泛应用于制药和医疗等行业,酶法合成D-甘露醇反应成本昂贵无法满足工业化生产。本研究首先筛选关键酶获得较优性能的甘露醇脱氢酶Lp MDH和用于辅因子NADH再生的葡萄糖脱氢酶Ba GDH,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中共表达,实现了基于双酶级联反应催化底物D-果糖合成D-甘露醇,D-甘露醇的初步摩尔转化率为59.7%。针对双酶级联催化反应中辅酶再生用酶与催化用酶表达量不协调的问题,通过增加Bagdh拷贝量来提高辅因子循环能力,获得了双酶催化速率平衡的重组大肠杆菌E.coli BL21/pETDuet-Lpmdh-Bagdh-Bagdh。进一步对重组菌的全细胞转化条件进行优化,确定了最适转化条件为反应温度30℃,初始pH值6.5,菌体量OD600=30,底物D-果糖100.0 g/L,辅底物葡萄糖与底物1︰1摩尔当量。于最优转化条件下5 L发酵罐转化24 h,D-甘露醇的最高产量为81.9g/L,摩尔转化率为81.9%。本研究提供了一种绿色、高效生物催化生产D-甘露醇的方法,为实现其规模化生产奠定了基础,同时也对其他相关稀有糖醇的研究具有指导意义。 展开更多
关键词 D-甘露 D-甘露醇脱氢酶 协调表达系统 NADH循环 全细胞转化
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转mtlD基因和BADH基因旱稻苗期耐盐性研究 被引量:3
16
作者 张丽 张洪亮 李自超 《西南农业学报》 CSCD 2005年第5期621-624,共4页
对同时含有mtlD和BADH基因的旱稻,只含mtlD基因或只含BADH基因的旱稻,非转基因旱稻三者在盐胁迫下的表型,生长速率,相对电导率以及K+/Na+含量的比较,发现它们的耐盐性的关系是:同时含有mtlD和BADH基因旱稻>只含mtlD基因或只含BADH旱... 对同时含有mtlD和BADH基因的旱稻,只含mtlD基因或只含BADH基因的旱稻,非转基因旱稻三者在盐胁迫下的表型,生长速率,相对电导率以及K+/Na+含量的比较,发现它们的耐盐性的关系是:同时含有mtlD和BADH基因旱稻>只含mtlD基因或只含BADH旱稻>非转基因旱稻,从而推断出mtlD基因和BADH基因在旱稻的耐盐性方面具有协同(或累加)效应。通过试验比较,还发现只含有mtlD基因和只含有BADH基因的旱稻的耐盐性没有明显差别,从而推断出mtlD基因和BADH基因对植物的耐盐性的贡献差异不显著。此外,已经得到的转基因材料也可以继续作为进一步转化的材料,这为我们进行多基因转化改良植物提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 早稻 1-磷酸甘露醇脱氢酶(mtlD) 甜菜碱醛(BADH) 耐盐性
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以蔗糖为底物利用重组大肠杆菌合成甘露醇 被引量:7
17
作者 陈艳 田康明 +2 位作者 李玉 王正祥 路福平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2182-2190,共9页
【目的】异型发酵乳酸菌可利用胞内产生的甘露醇脱氢酶将果糖高效转化为甘露醇,但果糖作为底物相对昂贵,不利于工业化生产。为了降低生产成本,必须选择廉价的底物。蔗糖相对便宜,并且大量存在于自然界中,能够被重组大肠杆菌利用产生甘... 【目的】异型发酵乳酸菌可利用胞内产生的甘露醇脱氢酶将果糖高效转化为甘露醇,但果糖作为底物相对昂贵,不利于工业化生产。为了降低生产成本,必须选择廉价的底物。蔗糖相对便宜,并且大量存在于自然界中,能够被重组大肠杆菌利用产生甘露醇。蔗糖水解酶(Sucrose hydrolase)和甘露醇脱氢酶(Mannitol dehydrogenase)是发酵生产甘露醇中催化蔗糖转化成甘露醇的关键酶,构建蔗糖水解酶和甘露醇脱氢酶共表达菌株并进行相关研究是本文的主旨。【方法】利用PCR方法分别从植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)基因组DNA中获得sac A和mdh基因,得到大小分别为1 502 bp和1 032 bp的目的基因,经序列分析后将其连接到表达载体p ET-28a(+)上,得到重组表达载体p ET28a-sac A-mdh。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,并用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达情况并测定其酶活。【结果】SDS-PAGE显示表达蛋白的大小亚基分子量分别为55.1 k D和37.8 k D,与预期分子量一致,实现sac A和mdh基因的表达。蔗糖水解酶和甘露醇脱氢酶酶活分别为25.78 U/m L和14.56 U/m L。对重组菌株BL21(DE3)/p ET28a-sac A-mdh进行发酵条件优化,甘露醇质量浓度达到45.19 g/L,总糖转化率为37.66%。【结论】与乳酸菌利用蔗糖发酵生产甘露醇相比,产量提高了6倍,且具有发酵周期短、稳定性高等优点,菌株的成功构建为甘露醇工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 蔗糖水解 甘露醇脱氢酶 基因克隆 大肠杆菌
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利用代谢工程构建D-甘露醇生产菌株 被引量:4
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作者 王小芳 陈晶 +3 位作者 刘萍萍 徐洪涛 郁彭 张学礼 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1450-1462,共13页
D-甘露醇广泛应用于食品、制药、化学品工业等领域。从野生型大肠杆菌出发,将来自假肠膜明串珠菌Leuconostoc pseudomesenteroides ATCC 12291菌株的甘露醇脱氢酶与果糖转运蛋白编码基因整合到大肠杆菌ATCC8739的染色体中,并失活其他的... D-甘露醇广泛应用于食品、制药、化学品工业等领域。从野生型大肠杆菌出发,将来自假肠膜明串珠菌Leuconostoc pseudomesenteroides ATCC 12291菌株的甘露醇脱氢酶与果糖转运蛋白编码基因整合到大肠杆菌ATCC8739的染色体中,并失活其他的发酵途径(丙酮酸甲酸裂解酶、乳酸脱氢酶、富马酸还原酶、乙醇脱氢酶、甲基乙二醛合成酶和丙酮酸氧化酶),构建了一株遗传稳定的D-甘露醇生产菌株。使用无机盐培养基和葡萄糖果糖作为混合碳源,厌氧发酵6 d,D-甘露醇产量达1.2 mmol/L。基于细胞生长和D-甘露醇合成的偶联,进一步通过代谢进化技术提高细胞合成D-甘露醇的生产能力。经过80代的驯化,D-甘露醇产量提高了2.6倍,甘露醇脱氢酶的活性提高了2.8倍。构建获得的遗传稳定的工程菌能直接发酵糖生产D-甘露醇,不需添加抗生素、诱导剂和甲酸,在工业化生产时有一定优势。 展开更多
关键词 D-甘露 代谢进化 甘露醇脱氢酶 大肠杆菌
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mtlD的表达对花生幼苗抗盐性的影响 被引量:3
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作者 宗自卫 杨旭 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第20期10606-10607,共2页
[目的]研究转甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因(mtlD)花生幼苗的抗盐性。[方法]通过根癌农杆菌介导将外源mtlD导入花生,通过检测植株的鲜重、高度等指标来判断转基因花生的抗盐性。[结果]PCR Northern杂交显示,mtlD已成功整合到染色体上;转基因... [目的]研究转甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因(mtlD)花生幼苗的抗盐性。[方法]通过根癌农杆菌介导将外源mtlD导入花生,通过检测植株的鲜重、高度等指标来判断转基因花生的抗盐性。[结果]PCR Northern杂交显示,mtlD已成功整合到染色体上;转基因植株的鲜重、高度、甘露醇-1-磷酸脱氢酶的活性都明显高于对照植株。[结论]mtlD基因在花生中的表达增强了转基因花生的抗盐性。 展开更多
关键词 花生 盐害 甘露-1-磷酸
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Regeneration of transgenic loblolly pine expressing genes for salt tolerance 被引量:3
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作者 唐巍 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2002年第1期1-6,82,共6页
Salinity stress is one of the most serious factors limiting the distribution and productivity of crops and forest trees. The detrimental effects of salt on plants are a consequence of both a water deficit resulting in... Salinity stress is one of the most serious factors limiting the distribution and productivity of crops and forest trees. The detrimental effects of salt on plants are a consequence of both a water deficit resulting in osmotic stress and the effects of excess sodium ions on critical biochemical process. A novel approach to improve salt tolerance has been established by using the technology of plant genetic transformation and using loblolly pine (Pinus taeda L.) as a model plant. Mature zygotic embryos of loblolly pine were infected with Agrobacterium tumefaciens strain LBA 4404 harbouring the plasmid pBIGM which carrying the mannitol-1-phosphate dehydrogenase (Mt1D) and glucitol-6-phosphate dehydrogenase (GutD). Organogenic transgenic calli and transgenic regenerated plantlets were produced on selection medium containing 15mg/L kanamycin and confirmed by Southern blot analysis of genomic DNA. Salt tolerance assays demonstrated that the salt tolerance of transgenic calli and regenerated plantlets were increased. These results suggested that an efficient Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation protocol for stable integration of foreign genes into loblolly pine has been developed and this could be useful for the future studies on engineering breeding of conifers. 展开更多
关键词 Pinus taeda L. Agrobacterium tumefaciens Salt tolerance Genetic engineering
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