甜瓜种质资源对甜瓜坏死斑点病毒病的田间抗性鉴定

由甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus,MNSV)侵染引起的甜瓜坏死斑点病毒病在我国多地发生,严重影响着甜瓜的产量与品质。以392份来自国内外的甜瓜种质为试验材料,采用田间自然发病的方法,于果实定形期进行发病情况调查,计算发病率、病情指数、相对抗性指数。结果表明,392份甜瓜种质资源中有高抗材料296份,中抗材料50份,中感材料25份,高感材料21份。其中,302份厚皮甜瓜自交纯系中表现高抗的种质有245份,占81.13%;26份地方品种厚皮甜瓜自交系中表现高抗的种质有14份,占53.85%;8份地方品种薄皮甜瓜自交系均为高抗种质资源;11份国外种质资源中表现高抗的种质有8份,占72.73%;31份国内F1代中表现高抗的种质有15份,占48.39%;14份国外F1代中表现高抗的种质有6份,占42.86%。

甜瓜响应甜瓜坏死斑点病毒侵染的cDNA文库构建

为解析甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus,MNSV)与寄主甜瓜的互作,筛选病毒编码的蛋白与寄主的互作因子,构建了MNSV侵染的甜瓜cDNA文库。在甜瓜品种白玫子叶期接种MNSV,待植株表现典型的系统坏死斑点症状后,收集症状明显的整株甜瓜幼苗,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术合成cDNA,利用DSN(duplex-specific nuclease)对cDNA均一化处理后,首次构建了MNSV侵染甜瓜的cDNA文库并评价了文库的质量,文库容量为4.5×106 cfu,文库滴度为3.6×10^7 cfu·mL^-1,文库克隆重组率为100%,文库插入片段大小在500~2000 bp之间,说明文库质量很好。该文库的构建为解析MNSV与寄主互作及甜瓜响应MNSV的致病机制奠定了基础。

甜瓜坏死斑点病毒研究进展

甜瓜(Cucumis melo)是世界上热带和温带地区的一种重要葫芦科作物,也是我国重要的经济作物,甜瓜感染甜瓜坏死斑点病毒(Melon necrotic spot virus,MNSV)会造成重大经济损失。本文对甜瓜坏死斑点病毒的分类地位、特性及发生分布、基因与致病性研究、病毒在细胞间的运动、影响传播因素及抗性研究等进展做一综述。目前,关于该病毒的研究国内外已有不少报道,但病毒致病机制的研究仍在探索,因此揭示其致病机制成为研究该病毒的首要任务,为该病毒的抗性研究奠定基础。

瓜类新病毒病害(二):甜瓜坏死斑点病

介绍了我国最新发现的瓜类病毒病害——甜瓜坏死斑点病的症状、分布、病原及基因组、寄主范围、传播途径、防治措施,抗性和分子生物学研究等方面的内容。

甜瓜坏死斑点病毒山东分离物的基因组

甜瓜坏死斑点病毒(Melon necrotic spot virus,MNSV)是我国甜瓜病毒新纪录种,主要靠种子和土壤真菌传播。本文以MNSV山东分离物(MNSV-Shandong)为材料,利用RT-PCR和RACE技术获得了MNSV山东分离物基因组,并分析了其基因组成和进化关系。MNSV-Shandong基因组为4 267 nt,编码5个ORF,参与复制的p29和p89基因分别编码29 kDa和89 kDa蛋白质;p42基因编码的外壳蛋白为42 kDa;p7A和p7B基因编码的移动蛋白均为7 kDa。系统进化树表明MNSV-Shandong与海门分离物(MNSV-HM)聚在一起,与欧洲、部分亚洲及北美洲在一个分支上,与日本分离物距离较远。本文为国内首次报道MNSV山东分离物基因组。

广西三种甜瓜病毒分离物的分子检测与鉴定

瓜类褪绿黄化病毒Cucurbits chlorotic yellows virus(CCYV)、甜瓜黄化斑点病毒Melon yellow spot virus(MYSV)及甜瓜坏死斑点病毒Melon necrotic spot virus(MNSV)是近年来报道侵染瓜类作物的新病毒,在个别种植区大面积发生,对生产构成严重威胁。为了解3种病毒在广西的发生情况,先后到各西甜瓜种植区进行了调查,并采集疑似CCYV、MYSV及MNSV的甜瓜病叶样品,提取病叶总RNA,通过特异性引物分别进行一步法RTPCR扩增,电泳结果显示RT-PCR产物与预期大小一致的序列条带;将扩增产物分别连接到pMD19-T克隆载体上,挑选阳性克隆子进行序列测定及比对分析。结果表明:CCYV、MYSV和MNSV广西分离物的CP基因序列与其他已报道核苷酸序列一致性分别达95.1%~100%、96.5%~99%和83.7%~92.5%。

两种甜瓜病毒寿光分离物的分子检测与鉴定

甜瓜坏死斑点病毒（Melon necrotic spot virus ,MNSV）及瓜类褪绿黄化病毒（Cucurbit chlorotic yellows vi-rus ,CCYV）近年来在瓜类种植区均大面积发生,危害较为严重,已成为制约甜瓜生产的重要因素。本研究广泛收集疑似感染 MNSV 及 CCYV 的甜瓜病叶,从中提取植物总 RNA 进行 RT-PCR 扩增,将产物分别连接到 pEASY-T1 Simple 克隆载体上,对含有目的片段的重组子进行测序及比对分析。结果显示得到了与预期结果一致的 DNA序列,其扩增产物大小分别为673 bp（MNSV）和877 bp（CCYV）。同源性分析结果表明,MNSV 和 CCYV 寿光分离物的核苷酸序列与中国其他地区或一些国家已报道的分离物同源性达99%～100%。

我国主要甜瓜病毒的研究及防治

随着甜瓜种植面积不断扩大,病虫害监控防治成为生产优质瓜果的关键环节之一,而病毒病在甜瓜生产过程中危害严重。因此该研究就几种主要的甜瓜病毒,即小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellow virus,CCYV)、甜瓜坏死斑点病毒(Melon necrotic spot virus,MNSV)和甜瓜黄化斑点病毒(Melon yellow spot virus,MYSV)的分类、基因组结构、传播方式、寄主、症状展开论述。并对甜瓜病毒的检测和防治方法进行综述,以期为甜瓜病毒的防控提供依据。

MNSV p42与寄主因子3-HIBADH互作

甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus,MNSV)是侵染甜瓜的重要病毒之一,为害严重。为了明确MNSV的致病机制,本研究以pGBK-p42为诱饵载体,利用Mating的方法从感染MNSV的甜瓜cDNA文库中筛选出6个与p42互作的寄主因子,进一步利用酵母双杂交系统、双分子荧光互补技术(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)等验证p42与寄主因子3-羟基异丁酸脱氢酶(3-Hydroxyisobutyrate dehydrogenase-like 1,3-HIBADH)的互作,并明确了p42蛋白的s-domain是与3-HIBADH互作的关键区域。此外,利用激光共聚焦显微镜观察发现p42 s-domain与3-HIBADH作用改变了3-HIBADH蛋白在烟草表皮的亚细胞定位,进一步证实p42可与3-HIBADH发生相互作用。该结果为阐明甜瓜响应MNSV侵染的互作机制奠定了基础。