甜瓜蔓枯病菌及其生物学特性的研究

甜瓜蔓枯病是甘肃白兰瓜的常发病,各瓜区普遍发生,发病率在10～65％。该病的病原菌甜瓜蔓枯病菌在PDA培养基上的菌落形态与裘维蕃先生描述的A,As一致。分生孢子有单孢、双孢、三孢3种。单孢菌株在培养中菌丝间有结合现象,即病菌有同宗配合现象。此菌的菌丝在5～35℃间均可生长,最适温度25℃;分生孢子在5～38℃间均可萌发,最适温度28～30℃;分生孢子在水滴中能很好地萌发;在pH4～9范围内均可萌发,最适为pH7;适宜浓度的马粪、蔗糖、瓜叶汁液对分生孢子萌发有刺激作用;白炽光对孢子萌发有利。病株上的菌丝有3种类型:即普通菌丝、大型薄壁菌丝和索状菌丝。在甘肃,索状菌丝是病菌的重要越冬形态和初侵染来源,而子囊座产生很少。

甜瓜蔓枯病菌原生质体制备及再生体系研究

【目的】建立高效的病原菌原生质体制备和再生体系,明确甜瓜蔓枯病菌的致病机理。【方法】采用单因素分析法,利用2种混合酶20 g·L^(−1) Driselase和8 g·L^(−1) Lysing enzymes,以不同菌龄、摇培转速、不同酶解时间、温度、渗透压稳定剂的种类及pH、再生培养基为研究条件;对甜瓜蔓枯病菌原生质体的制备及再生体系进行优化。【结果】结果表明:以培养36 h左右的菌丝体为材料,以0.7 mol·L^(−1) NaCl作为渗透压稳定剂(pH=7),用20 g·L^(−1) Driselase和8 g·L^(−1) Lysing enzymes在30℃、140 r·min^(−1)条件下酶解4 h,原生质体的产量可达9.65×10^(7)个·mL^(−1);以琼脂含量为0.6%的SR培养基作为再生培养基,甜瓜蔓枯病菌的再生率可达22.53%;原生质体的再生率在存放10 h内下降迅速,10 h后下降速度逐渐平缓。【结论】确定了蔓枯病菌的高效原生质体制备与再生体系,为该菌株遗传转化体系的建立奠定基础。

农杆菌介导的甜瓜蔓枯病菌遗传转化体系的建立

甜瓜蔓枯病是当前危害瓜类的主要病害,严重影响甜瓜的产量和品质,但是蔓枯病菌Didymella bryoniae病原学研究还非常落后,关于该菌功能基因的研究还未见报道。本研究以携带潮霉素B磷酸转移酶基因(hph)的pBIG2RHPH2作为转化载体,根癌农杆菌C58C1作为转化介体,转化甜瓜蔓枯病菌的强致病菌株DB11。研究发现,甜瓜蔓枯病菌的最优转化体系为:甜瓜蔓枯病菌的分生孢子悬浮液浓度为1×106个孢子/mL,农杆菌悬浮液OD600为0.15,共培养时间48h,诱导培养基中添加200μg/mL乙酰丁香酮,选择培养基添加100μg/mL潮霉素B、200μg/mL头孢噻肟钠、200μg/mL氨苄青霉素和200μg/mL四环素。1×105个蔓枯病菌分生孢子可以产生45个左右的转化子,随机挑取3个转化子进行PCR和RT-PCR检测发现,在不含潮霉素B的PDA培养基平板上转化子连续培养5代后,hph基因仍能稳定存在和转录,Southern blotting检测发现,T-DNA都是单拷贝插入3个转化子的染色体内。本研究建立的甜瓜蔓枯病菌的转化体系将为该病菌的功能基因研究和寄主与病原菌的互作研究提供重要技术支撑。

20种植物提取液对甜瓜蔓枯病的抑菌作用

采用生长速率法测定20种植物不同组织部位的乙醇提取液对甜瓜蔓枯病菌的抑菌效果,其中地锦全草乙醇提取物具有显著的抑制作用,当浓度为6 mg/mL时,抑制率为73.6%,其他植物提取物均无明显抑菌效果。对甜瓜蔓枯病的田间试验结果表明,喷雾7 d后的防效为46.0%。将乙醇提取物用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇依次进行萃取,并对各萃取物进行生物测定,结果表明,有效活性成分主要存在于正丁醇相中;当浓度为6 mg/mL时,抑制率为58.1%。抑菌谱测定结果表明,地锦乙醇提取物和正丁醇萃取物对8种病原菌具有一定的抑菌作用。