甜菜夜蛾核型多角体病毒颗粒剂制备及其抗逆性能评价

甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)具有专一性和高效性,可以有效控制甜菜夜蛾种群,而且对环境和生态安全。为了提高甜菜夜蛾核型多角体病毒的稳定性,以海藻酸钠为包埋材料,通过优化载体用量和进料速率等条件,采用喷雾法制备了病毒颗粒剂,并对其相关性能进行了表征和评价。结果表明:海藻酸钠质量浓度为1%,进料速率为13mL/min时制备的病毒颗粒剂呈不规则形状,颗粒剂产率79.4%,病毒含量1.0×10^(6)PIB/g,D_(50)在130μm左右。经颗粒剂海藻酸钠包埋的甜菜夜蛾核型多角体病毒具有良好的热稳定性和抗紫外性能,同时不会影响其对甜菜夜蛾幼虫的致病力。

甜菜夜蛾核型多角体病毒在宿主种群中的垂直传播研究

以两种浓度的病毒液感染甜菜夜蛾4龄、5龄幼虫,以研究甜菜夜蛾核型多角体病毒从亲代到子代垂直传递的方式和效率。实验结果表明,该病毒可通过母体介导(卵内、卵表)和父体介导等3种方式传递给子代,造成子代感染。幼虫经口感染后母体介导传递实验表明,病毒垂直传播可引起20%～48%的子代幼虫病死,并能使子代成虫产卵量下降;母体介导传播实验中,以5%福尔马林进行卵表面消毒证实仍有18.8%的幼虫感染病毒死亡,表明了该病毒可经卵内传播,并同时存在着附卵传播;母体介导传递实验还表明病毒对宿主有弱化作用,亲代免于病死的蛹重量减轻,羽化所得雌成虫的产卵量下降,产卵期延长。以交互配对将感染与未感染的雌雄成虫彼此交配,表明雄成虫精子也能垂直传递病毒(父体介导),引起20%～40%子代幼虫感病死亡。成虫经口感染,对所产卵块表面消毒后,仍导致28.6%的子代幼虫死于病毒感染,也表明存在卵内传播。

温度对甜菜夜蛾核型多角体病毒流行的影响

在恒温条件下 ,研究了甜菜夜蛾 3龄初幼虫感染核型多角体病毒后的病死速率、病死时间分布与温度关系。结果表明 ,在2 9℃以下 ,随温度的升高 ,病死率增加 ,幼虫病死速率加快 ,病死持续时间缩短 ;该病毒的热抑制温度在 2 7℃左右。改进的Schoolfield模型、Stinner模型可很好地描述幼虫病死速率与温度关系。甜菜夜蛾种群饲毒后的每日病死率可用时间 -剂量 -死亡率模型较好地拟合 ,模型模拟值与实测值有较好的吻合 (Hosmer- L em oshow统计量检验不显著 ) ,方程中各项系数经 t检验达极显著水平 ;不同温度下的幼虫累计病死时间分布可用 Weibull模型、Gompertz模型及 L ogistic模型拟合 ,模型经 F检验显著 ,模型中各系数经 t检验均达到或接近显著水平。用剩余平方和 Q比较各模型的拟合程度 ,以 L ogistic模型拟合最好 ,Gompertz模型次之 ,Weibull模型拟合效果稍差。

甜菜夜蛾核型多角体病毒对拟澳洲赤眼蜂的影响:种群参数比较和PCR检测

用生命表方法和PCR检测研究了甜菜夜蛾核型多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhedrovirus,SeMNPV)对拟澳洲赤眼蜂TrichogrammaconfusumViggiani的影响。结果表明 ,在 2 5± 1℃下 ,取食含SeMNPV蜂蜜和纯蜂蜜 (对照 )的两组赤眼蜂雌蜂的寿命、繁殖力、羽化率、产雌率均无显著差异 ;内禀增长率 (rm)分别为 0 35 2 4和 0 3418,周限增长率 (λ)为 1 4 2和1 4 1,非常接近 ;净繁殖率 (R0 )分别为 12 4 34和 14 2 5 7,平均世代历期为 13 6和 14 5天 ,种群倍增时间分别为 1 96和 2 0 3天。对 5头取食含SeMNPV蜂蜜的雌蜂的子代的PCR检测结果也均为阴性。因此 ,结论认为SeMNPV对拟澳洲赤眼蜂成蜂并无明显影响 ,体内携带病毒的亲代蜂并不能将病毒传给子代。

人工饲料成分对甜菜夜蛾核多角体病毒产量的影响

通过采取单因素和正交组合设计的方法 ,研究了甜菜夜蛾Spodopteraexigua人工饲料中黄豆粉、酵母粉和麦麸 3种主要营养成分对甜菜夜蛾核多角体病毒产量的影响 ,同时获得甜菜夜蛾核多角体病毒高产优化组合方案 :酵母粉 7g、黄豆粉 14g和麦麸 6 g。此外 ,还研究了 4种无机盐和 1种非蛋白氮对甜菜夜蛾核多角体病毒产量的影响。

甜菜夜蛾核多角体病毒的研究与应用进展

本文综述了国内外甜菜夜蛾核多角体病毒的研究和应用进展

不同虫龄甜菜夜蛾幼虫实验种群对核型多角体病毒的敏感性

利用经稀释10-1和10-3的甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)初提液,对甜菜夜蛾各龄幼虫不同实验种群进行饲毒,以研究不同龄期宿主幼虫对SeNPV的敏感性差异.结果表明,宿主幼虫虫龄与其对病毒的敏感性呈显著负相关,虫龄越小,对病毒的敏感性越高.低浓度病毒(8.24×104PIB/mL)感染1～3龄幼虫,患病率达89%以上,患病个体死亡率达94%以上.高浓度病毒(8.24×106PIB/mL)能导致89.6%以上高龄幼虫死亡.SeNPV导致宿主幼虫死亡的时间相对较短.Weibull模型可较好地拟合各试验结果.

甜菜夜蛾核型多角体病毒对甜菜夜蛾幼虫的毒力测定

室内毒力测定表明，在一定范围内，不同浓度甜菜夜蛾核型多角体病毒（SeNPV）感染甜菜夜蛾2龄幼虫后，浓度越高，甜菜夜蛾死亡率越高，开始死亡时间越早，全程感染至死亡的天数越短，致死中时（LT50）为2．44～5．60d，致死中浓度LC50=7．11×10^4 PIB／ml。以剂量为2×10^5 PIB／ml的SeNPV样品感染甜菜夜蛾1～4龄幼虫，低龄幼虫的死亡高峰期为4～5d，全程期为6～7d；3龄以上幼虫死亡高峰期为7d左右，全程期为10～12d。

甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)gp37基因的克隆及序列分析

通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37基因起始密码子上游有一典型的杆状病毒晚期基因启动子序列ATAAG .同其它昆虫杆状病毒和昆虫痘病毒GP37/Fusolin蛋白的比较结果表明 ,SeMNPVGP37与已知gp37/fusolin基因的氨基酸序列同源性较高 (5 0 %～ 6 8% ) ,在其蛋白序列内存在类似的保守区和可能的N_连接糖基化位点 .在SeMNPVgp37基因下游存在一个完整阅读框和部分egt基因序列 .

利用甜菜夜蛾日本品系增殖核多角体病毒

比较了甜菜夜蛾3种品系增殖甜菜夜蛾核多角体病毒(SeNPV)的效果。结果表明,利用甜菜夜蛾日本品系幼虫增殖SeNPV产量最高,其平均单头病毒含量分别比广州品系和荷兰品系高19 6%和53 3%;病毒总含量分别高20 4%和116 7%。在此基础上,进一步研究了虫龄、感染浓度和饲养密度对用甜菜夜蛾日本品系幼虫增殖SeNPV的影响,确定了利用甜菜夜蛾日本品系增殖SeNPV时,以上3因子的最佳条件为:在27±1℃下用1×108PIB/ml的SeNPV感染5龄初幼虫,并按30头/dm2的密度饲养。

侧沟茧蜂与核型多角体病毒对寄主甜菜夜蛾幼虫生长的影响

研究了甜菜夜蛾2龄末幼虫被淡足侧沟茧蜂寄生及核型多角体病毒感染后,寄主体长、体宽、头壳宽度及体重的变化。结果表明:各处理组形态学指标均低于对照组,表明甜菜夜蛾在被寄生及感毒后,其生长发育受到了明显抑制。

甜菜夜蛾核多角体病毒泛素基因的克隆及原核表达

甜菜夜蛾核多角体病毒(Spotoptera exigua multi-nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)泛素基因ubiquitin被克隆和序列分析.该基因编码区全长243bp,编码80个氨基酸残基,预计蛋白质分子量为9.4kDa。将这一ubiquitin基凶克隆到原核表达载体pET-28a上.转化至BL21 (DE3)中,用IPTG进行诱导表达,对表达的条件进行了优化。用异源的泛素单克隆抗体检测目的蛋白,Western blot实验证明所表达的蛋白是泛素蛋白。同时,我们制备了特异性的抗体,为以后的研究工作做了基础。通过计算机软件Gendoc对不同来源的泛素进行分析,结果显示,病毒中的泛素与真核细胞中的泛素相比较,泛素的氨基酸序列有较大的变化,杆状病毒的泛素基因在分子进化上可能有比较独特的途径。

甜菜夜蛾核多角体病毒基因组13.7～21.6m.u.区域的分析

甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhedrovirus,SeMNPV)基因组13 7～21 6m u 区域是SeMNPV的重组热点区。以SeMNPV美国分离株SeUS1为模板,长片段PCR对SeUS1的13 7～21 6m u 区域扩增,得到11 3kb,2 0kb和0 7kb3个片段。对照已发表的SeMNPV基因组序列,11 3kb片段是具完整SeMNPV序列基因型的产物,2 0kb和0 7kb片段表明SeUS1中还存在两种缺失突变株。对2 0kb和0 7kb片段的序列分析揭示了这两株突变株在缺失部位的DNA一级结构。对三株重组SeMNPV病毒(SeXD1、SeXD2和SeXD3)的分析发现,它们和野生型病毒SeUS1中的一个基因型一样,均缺失了SeMNPVnt18513～29105之间长10593bp的片段,暗示SeUS1中一株自发形成的缺失突变体在离体细胞中具有复制优势。将该片段基因排列与其它10种基因组序列已测定的杆状病毒比较,发现两个在GroupⅡNPVs中保守的基因簇。最大简约性法对部分基因的系统发育分析表明,缺失片段中某些基因可能存在于杆状病毒分化之前的病毒基因组中。

甜菜夜蛾核多角体病毒sod基因的克隆及原核表达

甜菜夜蛾核型多角体病毒中国株(Spotoptera exigua MNPV-Z)超氧化物歧化酶基因(sod)业已被克隆及在大肠杆菌中进行了表达,证明了SeMNPV-Z的sod基因产物确有SOD活性,其活力单位约为291.19U/mL培养液。DNA测序结果表明SeMNPV-Z的sod基因编码151个氨基酸,与人的sod1基因的核苷酸的同源性为50％,与LdNPV、HaSNPV、HcNPV、AcNPV和BmNPV的sod基因的同源性分别为64％、63％、63％、65％、63％。

甜菜夜蛾核型多角体病毒vp39基因重组真核表达质粒的构建及鉴定

利用DNA重组技术 ,将杆状病毒极早期基因ie1启动子基因克隆至重组质粒pGEM Se39中 ,成功地构建了重组真核表达质粒pGEM IE1 Se39.

保幼激素类似物对重组甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1增殖的影响

用重组甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1感染甜菜夜蛾幼虫,并于同龄期点滴保幼激素类似物Methoprene（ZR-515）,研究其对SeXD1增殖的影响。研究表明,用5×10^7PIB/ml的SeXD1感染甜菜夜蛾五龄幼虫,并以2μg/头Methoprene点滴处理效果最佳,其感染死亡率、平均单头病毒含量、病毒总产量分别为95.3%、8.6×10^8PIBs/头和2.45×10^11PIBs;比对照提高65.1%、115.0%和264.1%。研究了Methoprene对染毒及未染毒宿主消化生理的影响。结果显示,Methoprene处理不仅延长甜菜夜蛾幼虫历期,增加其取食量,还显著提高幼虫的食物转化率。

甜菜夜蛾核型多角体病毒中国分离株的分离鉴定及毒力测定

本文对分离自中国的甜菜夜蛾病毒进行提纯、鉴定。生物测定的结果表明其对二龄、三龄甜菜夜蛾的LC50 分别为 6 .6× 10 4,2 .6× 10 5PIB/mL .

甜菜夜蛾多核壳型核型多角体病毒vp39基因的克隆与表达(英文)

参照苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 ( Ac MNPV)衣壳蛋白基因 vp3 9的序列设计引物 ,采用PCR技术扩增了甜菜夜蛾核型多角体病毒的约 1 .3 kb片段。通过将该片段亚克隆至原核表达载体p ET-2 8构建出重组表达质粒 p ET-Se3 9.以 p ET-Se3 9转化 E.coli BL2 1 .经 IPTG诱导后 ,Se MNPVvp3 9基因高效表达 .SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量为 3 9KD,并且表达量在 IPTG诱导 4 h达到最高水平 .

甜菜夜蛾核多角体病毒BAC-TO-BAC外源基因表达系统的建立

用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能够在大肠杆菌中低拷贝稳定复制 ,称为bacmid。由于SeUS1由不同的SeMNPV基因型组成 ,每个bacmid携带了一种病毒基因型 ,所有bacmid构成了SeUS1分离株的BAC文库。REN对 111个bacmid分析表明 ,SeUS1分离株中除了包含具有完整SeMNPV遗传信息的基因型外 ,还包括不同类型的缺失基因型。将具有完整SeMNPV基因组的基因型SeBAC10转染昆虫细胞 ,可产生子代病毒 ,故SeBAC10是一种在真核细胞和原核细胞中均能复制的穿梭质粒。因为SeBAC10中多角体蛋白基因 (Seph)被插入失活 ,将Seph作为报告基因通过位点特异性重组方式插入位于LacZ框内转座子Tn7的附着靶位点attTn7,得到重组SeBAC10 (即SeBAC10ph)转染甜菜夜蛾培养细胞Se3 0 1后 ,细胞出现典型的病理变化 ,核中出现多角体 ,证明SeMNPVBAC TO