甜菜夜蛾核型多角体病毒颗粒剂制备及其抗逆性能评价

甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)具有专一性和高效性,可以有效控制甜菜夜蛾种群,而且对环境和生态安全。为了提高甜菜夜蛾核型多角体病毒的稳定性,以海藻酸钠为包埋材料,通过优化载体用量和进料速率等条件,采用喷雾法制备了病毒颗粒剂,并对其相关性能进行了表征和评价。结果表明:海藻酸钠质量浓度为1%,进料速率为13mL/min时制备的病毒颗粒剂呈不规则形状,颗粒剂产率79.4%,病毒含量1.0×10^(6)PIB/g,D_(50)在130μm左右。经颗粒剂海藻酸钠包埋的甜菜夜蛾核型多角体病毒具有良好的热稳定性和抗紫外性能,同时不会影响其对甜菜夜蛾幼虫的致病力。

一株草地贪夜蛾核型多角体病毒新分离物的室内毒力测定与基因组分析

草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是我国重要的入侵农业害虫。草地贪夜蛾核型多角体病毒是专一性感染草地贪夜蛾的病原。本研究于江西省南昌市玉米田分离得到一株多粒包埋型草地贪夜蛾核型多角体病毒分离物,命名为草地贪夜蛾核型多角体病毒江西分离物(SfMNPV_JX),其对本地草地贪夜蛾幼虫毒力高,LC 50达到1.634×105 PIB/mL。全基因组测序表明,SfMNPV_JX基因组全长134241 bp,共包含140个ORF,系统发育分析显示,SfMNPV_JX属于α-杆状病毒GroupⅡ,是SfMNPV的一个分离物,与草地贪夜蛾核型多角体病毒哥伦比亚分离物(SfMNPV_Colombian)最为近似,序列相似性为97.85%。上述研究结果为研发绿色高效的草地贪夜蛾生物杀虫剂提供重要依据。

草地贪夜蛾核型多角体病毒Hub1的稳定性及对草地贪夜蛾的田间防治效果

草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda是一种破坏性极强的害虫,严重威胁粮食安全。草地贪夜蛾核型多角体病毒Hub1 (S. frugiperda nuclear polyhedrosis virus Hub1,SpfrNPV Hub1)是首个专一性针对草地贪夜蛾的病毒杀虫剂,具有较好的应用前景。本研究采用药膜法评价不同温度、pH值、光照条件等处理对SpfrNPV Hub1活性及稳定性的影响,并开展了20亿病毒包涵体(polyhedral inclusion body,PIB)/mL SpfrNPV Hub1悬浮剂防治草地贪夜蛾田间药效试验。稳定性测定结果表明:SpfrNPV Hub1在pH 4和pH 7,4℃及25℃条件下稳定,在pH9条件下较不稳定,在54℃高温及4000 lx强光照射条件下不稳定。田间药效试验结果显示:20亿PIB/mL SpfrNPV Hub1悬浮剂对草地贪夜蛾有较好的防治效果,制剂用量为1500~1875mL/hm^(2)时,药后7 d和14 d的防效分别达81.18%~82.57%和81.23%~83.06%,持效期长。本研究明确了不同温度、pH值、光照条件对SpfrNPV Hub1活性及稳定性的影响,为指导应用SpfrNPV Hub1防治草地贪夜蛾提供了重要技术支撑。

斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒的巢式PCR检测

旨在建立一种快速、可靠的斜纹夜蛾成虫带核型多角体病毒(Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)的分子检测方法,以克服目前常规PCR技术很难检测到斜纹夜蛾成虫带病毒的缺陷。以SpltNPV的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(ecdysteroid UDP-glucosyltransferase,egt)基因为检测对象,基于该基因序列设计了巢式PCR引物,其中一对外侧引物egt-F/R和一对内侧引物egt1-F/R,并研究斜纹夜蛾成虫带毒的巢式PCR检测可靠性。结果表明:基于egt基因的巢式PCR方法可以特异性扩增SpltNPV的DNA,引物egt-F/R的扩增检测最低限为10-7μg/μL;且基于引物egt-F/R的两轮普通PCR无法检测出成虫带毒,而采用巢式PCR方法可有效扩增出目的egt片段,巢式PCR检测方法的灵敏度比两轮普通PCR检测方法提高2个数量级。因此,本研究成功建立了基于SpltNPV的egt基因的巢式PCR检测技术,该方法为斜纹夜蛾成虫带毒、传毒等流行病学研究提供了可靠的技术支撑。

甜菜夜蛾核型多角体病毒在宿主种群中的垂直传播研究

以两种浓度的病毒液感染甜菜夜蛾4龄、5龄幼虫,以研究甜菜夜蛾核型多角体病毒从亲代到子代垂直传递的方式和效率。实验结果表明,该病毒可通过母体介导(卵内、卵表)和父体介导等3种方式传递给子代,造成子代感染。幼虫经口感染后母体介导传递实验表明,病毒垂直传播可引起20%～48%的子代幼虫病死,并能使子代成虫产卵量下降;母体介导传播实验中,以5%福尔马林进行卵表面消毒证实仍有18.8%的幼虫感染病毒死亡,表明了该病毒可经卵内传播,并同时存在着附卵传播;母体介导传递实验还表明病毒对宿主有弱化作用,亲代免于病死的蛹重量减轻,羽化所得雌成虫的产卵量下降,产卵期延长。以交互配对将感染与未感染的雌雄成虫彼此交配,表明雄成虫精子也能垂直传递病毒(父体介导),引起20%～40%子代幼虫感病死亡。成虫经口感染,对所产卵块表面消毒后,仍导致28.6%的子代幼虫死于病毒感染,也表明存在卵内传播。

甜菜夜蛾核型多角体病毒对甜菜夜蛾幼虫的毒力测定

室内毒力测定表明，在一定范围内，不同浓度甜菜夜蛾核型多角体病毒（SeNPV）感染甜菜夜蛾2龄幼虫后，浓度越高，甜菜夜蛾死亡率越高，开始死亡时间越早，全程感染至死亡的天数越短，致死中时（LT50）为2．44～5．60d，致死中浓度LC50=7．11×10^4 PIB／ml。以剂量为2×10^5 PIB／ml的SeNPV样品感染甜菜夜蛾1～4龄幼虫，低龄幼虫的死亡高峰期为4～5d，全程期为6～7d；3龄以上幼虫死亡高峰期为7d左右，全程期为10～12d。

温度对甜菜夜蛾核型多角体病毒流行的影响

在恒温条件下 ,研究了甜菜夜蛾 3龄初幼虫感染核型多角体病毒后的病死速率、病死时间分布与温度关系。结果表明 ,在2 9℃以下 ,随温度的升高 ,病死率增加 ,幼虫病死速率加快 ,病死持续时间缩短 ;该病毒的热抑制温度在 2 7℃左右。改进的Schoolfield模型、Stinner模型可很好地描述幼虫病死速率与温度关系。甜菜夜蛾种群饲毒后的每日病死率可用时间 -剂量 -死亡率模型较好地拟合 ,模型模拟值与实测值有较好的吻合 (Hosmer- L em oshow统计量检验不显著 ) ,方程中各项系数经 t检验达极显著水平 ;不同温度下的幼虫累计病死时间分布可用 Weibull模型、Gompertz模型及 L ogistic模型拟合 ,模型经 F检验显著 ,模型中各系数经 t检验均达到或接近显著水平。用剩余平方和 Q比较各模型的拟合程度 ,以 L ogistic模型拟合最好 ,Gompertz模型次之 ,Weibull模型拟合效果稍差。

甜菜夜蛾核型多角体病毒对拟澳洲赤眼蜂的影响:种群参数比较和PCR检测

用生命表方法和PCR检测研究了甜菜夜蛾核型多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhedrovirus,SeMNPV)对拟澳洲赤眼蜂TrichogrammaconfusumViggiani的影响。结果表明 ,在 2 5± 1℃下 ,取食含SeMNPV蜂蜜和纯蜂蜜 (对照 )的两组赤眼蜂雌蜂的寿命、繁殖力、羽化率、产雌率均无显著差异 ;内禀增长率 (rm)分别为 0 35 2 4和 0 3418,周限增长率 (λ)为 1 4 2和1 4 1,非常接近 ;净繁殖率 (R0 )分别为 12 4 34和 14 2 5 7,平均世代历期为 13 6和 14 5天 ,种群倍增时间分别为 1 96和 2 0 3天。对 5头取食含SeMNPV蜂蜜的雌蜂的子代的PCR检测结果也均为阴性。因此 ,结论认为SeMNPV对拟澳洲赤眼蜂成蜂并无明显影响 ,体内携带病毒的亲代蜂并不能将病毒传给子代。

不同虫龄甜菜夜蛾幼虫实验种群对核型多角体病毒的敏感性

利用经稀释10-1和10-3的甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)初提液,对甜菜夜蛾各龄幼虫不同实验种群进行饲毒,以研究不同龄期宿主幼虫对SeNPV的敏感性差异.结果表明,宿主幼虫虫龄与其对病毒的敏感性呈显著负相关,虫龄越小,对病毒的敏感性越高.低浓度病毒(8.24×104PIB/mL)感染1～3龄幼虫,患病率达89%以上,患病个体死亡率达94%以上.高浓度病毒(8.24×106PIB/mL)能导致89.6%以上高龄幼虫死亡.SeNPV导致宿主幼虫死亡的时间相对较短.Weibull模型可较好地拟合各试验结果.

侧沟茧蜂与核型多角体病毒对寄主甜菜夜蛾幼虫生长的影响

研究了甜菜夜蛾2龄末幼虫被淡足侧沟茧蜂寄生及核型多角体病毒感染后,寄主体长、体宽、头壳宽度及体重的变化。结果表明:各处理组形态学指标均低于对照组,表明甜菜夜蛾在被寄生及感毒后,其生长发育受到了明显抑制。

甜菜夜蛾核型多角体病毒中国分离株的分离鉴定及毒力测定

本文对分离自中国的甜菜夜蛾病毒进行提纯、鉴定。生物测定的结果表明其对二龄、三龄甜菜夜蛾的LC50 分别为 6 .6× 10 4,2 .6× 10 5PIB/mL .

甜菜夜蛾核型多角体病毒vp39基因重组真核表达质粒的构建及鉴定

利用DNA重组技术 ,将杆状病毒极早期基因ie1启动子基因克隆至重组质粒pGEM Se39中 ,成功地构建了重组真核表达质粒pGEM IE1 Se39.

甜菜夜蛾多核壳型核型多角体病毒vp39基因的克隆与表达(英文)

参照苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 ( Ac MNPV)衣壳蛋白基因 vp3 9的序列设计引物 ,采用PCR技术扩增了甜菜夜蛾核型多角体病毒的约 1 .3 kb片段。通过将该片段亚克隆至原核表达载体p ET-2 8构建出重组表达质粒 p ET-Se3 9.以 p ET-Se3 9转化 E.coli BL2 1 .经 IPTG诱导后 ,Se MNPVvp3 9基因高效表达 .SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量为 3 9KD,并且表达量在 IPTG诱导 4 h达到最高水平 .

苜蓿尺蠖核型多角体病毒对甜菜夜蛾的致病力和传播性研究

研究了苜蓿尺蠖核型多角体病毒AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾的致病力和传播流行性。结果表明:AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾有较高的毒力,温度对毒力有很大的影响,在17℃与23℃的条件下,LC50分别为104.56,105.92PIB/mL;感病幼虫的尸体容易腐烂流脓,且脓汁内含有大量病毒。低温贮藏对该病毒的毒力没有明显影响,说明AcMNPV-AaIT有较好的传播流行性,是一种理想的生防病毒。

基因重组核型多角体病毒AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾幼虫的毒力研究

研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPV AaIT和野生型多角体病毒AcMNPV C6对甜菜夜蛾的病原性,并添加感染增效物质,研究其增效作用。结果表明:AcMNPV AaIT对甜菜夜蛾3、4龄幼虫的LD50分别为151、379PIB/头,比AcMNPV C6少39、906PIB/头;LT50分别比AcMNPV C6缩短1.1d和1.5d;昆虫病毒感染增效物质具有强烈的感染增效作用,增效比值为617倍。

我国甜菜夜蛾核型多角体病毒研究新进展

核型多角体病毒是昆虫病毒中最大的类群,它能够专一性地侵染并杀死一种或者几种农林害虫,并对害虫天敌、环境和人畜无害,是一种值得推广的绿色生物农药。为有效利用绿色生物农药防治病虫害,对我国近几年关于甜菜夜蛾核多角体病毒的毒力、病毒制剂研究与生产、田间应用及药效试验、增效剂研究、分子生物学等方面进行了阐述,并提出了新的展望和应用需求。

30亿PIB/mL甜菜夜蛾核型多角体病毒悬浮剂防治甘蓝甜菜夜蛾田间药效试验

30亿PIB/m L甜菜夜蛾核型多角体病毒悬浮剂是由江西省新龙生物科技有限公司开发的新型杀虫剂,为了研究其杀虫活性,进行了防治甘蓝甜菜夜蛾田间药效试验。试验结果表明,30亿PIB/m L甜菜夜蛾核型多角体病毒SC对甜菜夜蛾的防治效果突出,制剂施用量300 m L/hm2,防治效果达80%以上,持效期长达7d以上,可以兼治其他害虫。30亿PIB/m L甜菜夜蛾核型多角体病毒SC对甜菜夜蛾具有良好的防治效果,对作物安全,具有良好的推广应用前景。

4种核型多角体病毒对玉米草地贪夜蛾的防效试验

为比较4种核型多角体病毒对富民县玉米草地贪夜蛾的防效,选用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒、甘蓝夜蛾核型多角体病毒、斜纹夜蛾核型多角体病毒和甜菜夜蛾核型多角体病毒进行田间药效试验。结果显示,10亿PIB·mL^(-1)斜纹夜蛾核型多角体病毒悬浮剂按照2250 mL·hm^(-2)的施用量,药后3 d、7 d、10 d对玉米草地贪夜蛾的相对防效分别达64.13%、76.66%、86.54%,显著高于另外3种核型多角体病毒的相对防效。4种核型多角体病毒中,10亿PIB·mL^(-1)斜纹夜蛾核型多角体病毒悬浮剂最适宜富民县草地贪夜蛾生物防控,但核型多角体病毒对玉米草地贪夜蛾的速效性较差,在草地贪夜蛾大量危害时,需与速效性高的高效低毒化学药剂搭配施用或交替施用,迅速降低草地贪夜蛾危害的同时减少化学农药用量。

甜菜夜蛾核型多角体病毒对芦笋园甜菜夜蛾的田间防效

以芦笋园甜菜夜蛾幼虫为对象,开展甜菜夜蛾核型多角体病毒田间杀虫活性、持效性以及与氯虫苯甲酰胺的协同增效作用试验。结果表明,15亿PIB·mL^-1甜菜夜蛾核型多角体病毒水剂对甜菜夜蛾幼虫具有优良的杀虫活性,1 800 mL·hm^-2处理药后5 d防效达94.5%,药后10 d防效依然有75.7%,持效性较好。甜菜夜蛾核型多角体病毒与氯虫苯甲酰胺混合使用药后3和5 d的防效显著高于甜菜夜蛾核型多角体病毒或氯虫苯甲酰胺单用的防效,显著提高了速效性和综合防效。15亿PIB·mL^-1甜菜夜蛾核型多角体病毒水剂是一种新型生物农药,无毒无残留,对人畜及其他生物安全,可在生产上推广应用。

斜纹夜蛾和甜菜夜蛾核型多角体病毒异源重组后的变异

为了明确不同宿主域核型多角体病毒(NPV)间的重组特性,揭示病毒进化规律以及发掘宿主域扩大病毒,本试验将2种病毒[不能经口感染甜菜夜蛾的斜纹夜蛾核型多角体病毒日本福冈株(SlNPV)、不能经口感染斜纹夜蛾的甜菜夜蛾核型多角体病毒美国株(SeNPV)]共同侵染宿主活体,通过饲料添毒法测定病毒异源重组前后的活性,并进一步通过透射电镜观察病毒多角体超微结构,利用限制性酶切比较病毒基因组遗传差异。结果发现,SlNPV和SeNPV在共同经口侵染甜菜夜蛾后,产生能成功侵染甜菜夜蛾和斜纹夜蛾的宿主域扩大重组病毒(Sl-NPV-1)株系,其对斜纹夜蛾的致死中浓度(LC50)与SlNPV间无显著差异,同时SlNPV-1对甜菜夜蛾的侵染力显著低于SeNPV。SlNPV-1株系的超微结构与SlNPV无显著差异。另外,SlNPV-1基因组DNA限制性酶切图谱与SlN-PV的图谱相同。表明,SlNPV和SeNPV混合侵染活体宿主后,能产生对斜纹夜蛾和甜菜夜蛾都具有侵染活性的宿主域扩大重组病毒。